一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，首先通过蛋白A/G琼脂糖纯化树脂连接抗体Ab1，用以捕捉血清中的GFAP形成PA/G‑Ab1‑GFAP，离心清洗达到分离富集的目的；其次以柠檬酸为碳源、二乙烯三胺为钝化剂合成碳点CDs，与抗体Ab2通过酰胺键连接，形成荧光标记探针CDs‑Ab2；然后将PA/G‑Ab1‑GFAP与CDs‑Ab2相结合形成夹心结构PA/G‑Ab1‑GFAP‑Ab2‑CDs，检测荧光强度，根据标准曲线，得到血清中GFAP的含量。本发明专利技术的方法具有灵敏度高、检测简便的优点和免疫反应的高选择性、高亲和力的特点，可以直接应用于血清中GFAP的测定。

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法
本专利技术属纳米材料、荧光免疫技术和生物分析检测领域，具体涉及基于碳点为荧光标记物的双抗体夹心定量测定血清中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的方法。
技术介绍
外伤性脑损伤(Traumaticbraininjury,TBI)是导致青少年和儿童死亡的主要因素。外伤性脑损伤包括不同等级的初始伤害和随时间以初始损伤点为核心的细胞死亡向周围组织传递损伤的过程。因此，需要建立一个检测外伤性脑损伤的合适方法。目前，诊断外伤性脑损伤的主要方法如下：核磁共振成像(MRT)、计算机断层扫描(CT)、弥散张量成像(DTI)和住院观察。然而现有的这些诊断手段都需要昂贵的仪器，在资源缺乏的地区难以实现，且在诊断过程中的辐射可能会损害病人的健康。研究表明外伤性脑损伤导致的脑细胞死亡会使各种脑内蛋白进入体液中，根据后创伤性脑损伤诱导释放各种生物标志物的模式和时间可以推测损伤的程度和结果。在各种创伤性脑损伤的生物标志物中，神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)仅在星形胶质细胞死亡后才释放，是脑组织中特殊的蛋白。Papa等的研究结果证实，随着脑损伤的加重，病人血清中的GFA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，步骤如下：(1)、制备蛋白A/G琼脂糖纯化树脂连接抗体Ab1的复合物PA/G‑Ab1；(2)、制备碳点标记荧光探针CDs‑Ab2：以柠檬酸为碳源，二乙烯三胺修饰合成碳点，将CDs在EDC、NHS的作用下，与多克隆抗体Ab2通过酰胺键共价结合，形成CDs‑Ab2；(3)、将步骤(1)所得PA/G‑Ab1与血清内的GFAP特异性反应，将其从复杂基质中分离富集，形成PA/G‑Ab1‑GFAP；(4)、将PA/G‑Ab1‑GFAP与CDs‑Ab2相结合形成夹心结构PA/G‑Ab1‑GFAP‑Ab2‑CDs，用PBS溶液清洗至上清液无荧光后测试荧光强度，根据...

【技术特征摘要】
1.一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，步骤如下：(1)、制备蛋白A/G琼脂糖纯化树脂连接抗体Ab1的复合物PA/G-Ab1；(2)、制备碳点标记荧光探针CDs-Ab2：以柠檬酸为碳源，二乙烯三胺修饰合成碳点，将CDs在EDC、NHS的作用下，与多克隆抗体Ab2通过酰胺键共价结合，形成CDs-Ab2；(3)、将步骤(1)所得PA/G-Ab1与血清内的GFAP特异性反应，将其从复杂基质中分离富集，形成PA/G-Ab1-GFAP；(4)、将PA/G-Ab1-GFAP与CDs-Ab2相结合形成夹心结构PA/G-Ab1-GFAP-Ab2-CDs，用PBS溶液清洗至上清液无荧光后测试荧光强度，根据标准曲线，得到血清中GFAP的含量。2.根据权利要求1所述的定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中，取...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡琴，马云苏，许贯虹，魏芳弟，岑瑶，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32