一种删除转基因大豆筛选标记的方法技术

本发明专利技术涉及转基因植物，具体公开了一种删除转基因大豆筛选标记的方法，将含有筛选标记的转基因大豆种子在含有β‑雌二醇的育苗基质中播种培养，在大豆种子萌发出苗阶段和大豆幼苗生长期间进行β‑雌二醇处理诱导，待幼苗生长至21～42d时，筛选获得能够表达目的基因、且无筛选标记的转基因大豆植株，正常管理直到结荚成熟，收获无筛选标记的转基因大豆种子。利用本发明专利技术提供的方法可以显著提高转基因大豆标记基因的删除率(达到50％以上)。培养的大豆幼苗生长健壮，有效提高了转基因大豆的成活率(达到97％以上)，大豆生长发育良好，结实率高，可以获得大量的无标记基因的转基因大豆，对推动转基大豆因商业化有重要的理论及实践意义。

【技术实现步骤摘要】
一种删除转基因大豆筛选标记的方法
本专利技术涉及转基因植物，具体地说，涉及一种删除转基因大豆筛选标记的方法。
技术介绍
大豆原产中国，是世界上重要油料作物之一。大豆是最早开展转基因研究的作物之一。据报道通过转基因技术已成功转入了抗旱、抗除草剂、抗病虫、耐盐碱等基因，为培育具有优良性状的转基因大豆新品种提供了基础。但由于转基因植物的安全性等问题限制了转基因大豆的推广应用。目前，转基因技术可能存在的潜在安全风险问题受到公众的广泛关注，而转基因技术中标记基因的安全性问题已成为当今基因工程研究的热点。选择标记基因是目前阻碍转基因植物发展的因素之一。选择标记基因编码一种正常植物细胞不存在的酶，能在转化体中有效表达并易于检测或定量分析。其功能是在某种选择压力下，将转化体筛选出来。常用的选择标记基因包括抗生素基因和除草剂基因。抗生素基因主要包括nptⅡ、cat、spt等；除草剂抗性基因有抗草丁膦和双丙膦的bar和pat及抗草甘膦的epsps基因等。这些选择标记基因虽然方便、廉价，但是，当获得转基因植株后，筛选标记基因就失去价值，其继续表达的产物也会带来安全隐患，从而引起人们转基因植物安全问题的担忧本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种删除转基因大豆筛选标记的方法，其特征在于，将含有筛选标记的转基因大豆种子在含有β‑雌二醇的育苗基质中播种培养，在大豆种子萌发出苗阶段和大豆幼苗生长期间进行β‑雌二醇处理诱导，待幼苗生长至21～42d时，筛选获得能够表达目的基因、且无筛选标记的转基因大豆植株，正常管理直到结荚成熟，收获无筛选标记的转基因大豆种子。

【技术特征摘要】
1.一种删除转基因大豆筛选标记的方法，其特征在于，将含有筛选标记的转基因大豆种子在含有β-雌二醇的育苗基质中播种培养，在大豆种子萌发出苗阶段和大豆幼苗生长期间进行β-雌二醇处理诱导，待幼苗生长至21～42d时，筛选获得能够表达目的基因、且无筛选标记的转基因大豆植株，正常管理直到结荚成熟，收获无筛选标记的转基因大豆种子。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在大豆种子萌发出苗阶段向育苗基质浇灌含有6～14μmol/Lβ-雌二醇的水溶液；在大豆幼苗生长期间向育苗基质浇灌6～14μmol/Lβ-雌二醇霍格兰氏全营养液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，根据育苗基质的干湿程度浇灌，以保证大豆苗正常生长所需要的水分和营养。4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述标记基因通过含Cre/loxP位点特异性重组系统载体，进入转基因大豆中，所述标记基因位于两个loxP位点之间。5.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述含有β-雌二醇的水溶液和β-雌二醇霍格兰氏全营养液中β-雌二醇的浓度为8～12μmol/L。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述含有β-雌二醇的水溶液和β-雌二醇霍格兰氏全营养液中β-雌二醇的浓度为10μmol/L。7.根据权利要求1～3任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：李桂兰，乔潇，董秋平，乔亚科，张锴，
申请(专利权)人：河北科技师范学院，
类型：发明
国别省市：河北,13