一种启动子批量捕获方法技术

本发明专利技术提供一种启动子批量捕获方法，所述方法利用植物基因转录时在启动子区域所形成的“DNA‑蛋白因子”的复合体，应用改进的染色体免疫共沉淀技术，把包含有未知植物基因启动子片段的DNA分拣出来。本发明专利技术利用蛋白因子OsTBP2和OsTFIIB紧密结合启动子上的TATA盒短链保守序列启动转录这一特性，通过生成这两种因子的特异性抗体，结合染色质免疫共沉淀技术(ChIP)，专向捕捉未知植物基因启动子片段的技术。本技术利用大多数启动子都含有的一段TATA盒短链保守序列这一特点，结合近年来新开发的染色质免疫共沉淀技术(ChIP)来分离未知的植物基因启动子片段的技术，比较容易实现植物启动子的大规模捕获，具有较高的商业价值。

【技术实现步骤摘要】
一种启动子批量捕获方法
本专利技术涉及到生物技术和植物基因工程
具体而言，本专利技术涉及一种能够批量地从植物中捕获启动子的方法，该方法利用植物基因转录时在启动子区域所形成的“DNA-蛋白因子”的复合体，通过改进的染色体免疫共沉淀技术，使用复合体中蛋白因子的特异性抗体，从植物基因组分离未知的基因启动子片段。
技术介绍
在植物的生长发育过程中，基因的调控序列即启动子对植物在不同的生长阶段里特定组织结构的形成和生长发育，以及对外界生物、非生物因子的胁迫应答都起着决定性的作用。启动子区域中的保守序列是转录因子的靶标，两者的特异结合是促进下游编码基因表达的重要环节，因此研究特定基因的调控首先要了解它的启动子。大多数启动子都含有一些短链的保守序列，也叫做顺式作用元件。启动子上的TATAbox，是许多通用转录因子的装配位点。TFIID因子对TATAbox的识别是转录起始的第一步，转录因子TFIID的亚基TBP(TATA-bindingprotein)特异性识别和结合TATAbox，然后促进其他转录因子结合，从而形成多因子的全酶-RNA聚合酶II。转录因子TFIIB是TFIID和RNA聚合酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种启动子批量捕获方法，其特征在于，所述方法利用植物基因转录时在启动子区域所形成的“DNA‑蛋白因子”的复合体，应用改进的染色体免疫共沉淀技术(ChIP)，把包含有未知植物基因启动子片段的DNA分拣出来，实现启动子片段的有效富集。

【技术特征摘要】
1.一种启动子批量捕获方法，其特征在于，所述方法利用植物基因转录时在启动子区域所形成的“DNA-蛋白因子”的复合体，应用改进的染色体免疫共沉淀技术(ChIP)，把包含有未知植物基因启动子片段的DNA分拣出来，实现启动子片段的有效富集。2.根据权利要求1所述的启动子批量捕获方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：1)取预定量待提取的植株材料，对植株材料中的植物细胞进行交联；2)对所述植物细胞进行粉碎；3)对所得产物进行离心沉积，获得含有“DNA-蛋白因子”复合体的清液；4)将含有“DNA-蛋白因子”复合体的清液与所述蛋白因子的蛋白因子抗体接触，使所述蛋白因子与蛋白因子抗体相结合形成目标蛋白核酸结合体；5)收集所述目标蛋白核酸结合体并对所述目标蛋白核酸结合体进行酶解，除去所述蛋白因子抗体；6)从酶解产物中提取出所述DNA碎片。7)对上述释放出的DNA片段进行测序和生物信息学比对，初步确定启动子片段的富集程度。8)通过实验验证富集的启动子片段的功能，以及在其基础上进行启动子优化设计。3.根据权利要求2所述的启动子批量捕获方法，其特征在于，所述步骤1)包括：通过1％多聚甲醛交联植物细胞；所述步骤2)包括：对待提取植株材料进行超声粉碎；所述步骤4)包括：在含有DNA碎片的清液中加入ProteinA磁珠，室温孵化预定时间。4.根据权利要求2所述的启动子批量捕获方法，其特征在于，所述方法还包括步骤7)，对所获得的DNA碎片进行定量或半定量PCR扩增。5.根据权利要求2所述的启动子批量捕获方法，其特征在于，所述蛋白因子包括OsTBP2及增强OsTBP2与TATA盒结合的OsTFIIB蛋白。6.根据权利要求5所述的启动子批量捕获方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤4)中添加OsTBP2及OsTFIIB蛋白的抗体。7.根据权利要求5所述的启动子批量捕获方法，其特征在于，所述步骤4)包...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨剑波，王常霖，魏鹏程，李娟，李浩，杨亚春，李莉，许蓉芳，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院水稻研究所，
类型：发明
国别省市：安徽,34