一种制备稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1晶体的方法技术

本发明专利技术涉及蛋白质晶体的制备，具体说来，公开了一种制备稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1蛋白质晶体的方法：1)将稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1溶于HEPES或PBS Buffer中，获得终浓度为8～10mg/mL的MoMps1蛋白质，将所述的MoMps1蛋白质与晶体生长试剂按10％～80％的体积比混合，得到0.3～0.8μL的液滴；2)置于4～22℃的恒温箱中培养10～20天，即可得到所述晶体。其中，所述晶体生长试剂的组分包括：10％～60％V/V Tacsimate；0.001～0.5M二甲砷酸钠；0.01～10.0mM精胺；pH值为3.0～9.5。本发明专利技术开展了稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1蛋白质晶体生长方法的探索，通过一系列的筛选，获得了晶体质量高、衍射数据好、重复性好的蛋白质晶体生长方法。

Method for preparing rice blast fungus mitogen activated protein kinase MoMps1 crystal

The invention relates to a protein crystal preparation, in particular, discloses a preparation method of Magnaporthe grisea promoting mitogen activated protein kinase MoMps1 protein crystal: 1) the M.grisea mitogen activated protein kinase MoMps1 dissolved in HEPES or PBS Buffer, to obtain a final concentration of 8 ~ 10mg/mL MoMps1 protein, MoMps1 protein and the crystal growth of 10% ~ 80% reagent according to the volume ratio of 0.3 ~ 0.8 L drop; 2) in 4 ~ 22 DEG C temperature in the incubator for 10 to 20 days, can be obtained by the crystal. Among them, the crystal growth reagent consists of: 10% ~ 60%V/V Tacsimate; 0.001 ~ 0.5M two ~ 10.0mM 0.01 methyl sodium arsenate; spermine; pH value is 3 ~ 9.5. The present invention is carried out to promote exploration of rice blast fungus mitogen activated protein kinase MoMps1 protein crystal growth method, through a series of screening, protein crystal diffraction data, high quality, good reproducibility was obtained.

【技术实现步骤摘要】
一种制备稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1晶体的方法
本专利技术涉及蛋白质晶体的制备，具体说来，涉及一种稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1晶体的制备方法。
技术介绍
蛋白质是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命的存在，而蛋白质的三维结构往往决定了其功能，所以确定蛋白质的三维结构对了解与阐释生命现象与生命活动有着重要的意义。目前，利用X射线技术来确定和解析蛋白质的三维结构是公认的最为可靠的方法，尤其是近年来，利用结构生物学手段来研究蛋白质与蛋白质、蛋白质与转录因子相互作用，进而回答相关蛋白质的互作机制已发挥着非常重要的作用。但是蛋白质晶体的生长，尤其是高分辨率、重复性好的晶体生长方法一直是此领域研究的“瓶颈”，这对利用结构生物学的手段来阐释上述机制具有很大的限制。具体说来，主要表现在，蛋白质不稳定、易降解或沉淀；蛋白质样品不结晶；蛋白质样品能够结晶但是衍射数据差，分辨率低等方面。水稻是世界的主要粮食作物之一，世界上约有50％的人口以稻米作为主食。由稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)侵染水稻引起的稻瘟病是世界各水稻产区普遍发生、危害极大的真菌性病害，也是制约水稻安本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1蛋白质晶体的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1溶于HEPES或PBS Buffer中，获得终浓度为8～10mg/mL的MoMps1蛋白质，将所述的MoMps1蛋白质与生长试剂按10％～80％的体积比混合，得到0.3～0.8μL的液滴；2)置于4～22℃的恒温箱中培养10～20天，即可得到所述蛋白质晶体；其中，所述晶体生长试剂的组分包括：10％～60％V/V Tacsimate；0.001～0.5M二甲砷酸钠；0.01～10.0mM精胺；pH为3.0～9.5。

【技术特征摘要】
1.一种制备稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1蛋白质晶体的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将稻瘟病菌促分裂原活化蛋白激酶MoMps1溶于HEPES或PBSBuffer中，获得终浓度为8～10mg/mL的MoMps1蛋白质，将所述的MoMps1蛋白质与生长试剂按10％～80％的体积比混合，得到0.3～0.8μL的液滴；2)置于4～22℃的恒温箱中培养10～20天，即可得到所述蛋白质晶体；其中，所述晶体生长试剂的组分包括：10％～60％V/VTacsimate；0.001～0.5M二甲砷酸钠；0.01～10.0mM精胺；pH为3.0～9.5。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生长试剂的组分包括：15％～40％V/VTacsimate；0.03～0.3M二甲砷酸钠；0.05～5.0mM精胺；pH为4.0～8.5。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述生长试剂的组分包括：26％V/VTacsimate；0.05M二甲砷酸钠；1.0mM精胺；其pH为6.5。4.根据权利要求1-3任意一项所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘俊峰，张国珍，周锋，陈霞，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11