高效的小体积核酸合成制造技术

总体而言，本公开内容涉及用于产生核酸分子的组合物和方法。在一些方面，本发明专利技术允许核酸分子的微量产生，任选地随后为这些核酸分子装配成更大的分子。在一些方面，本发明专利技术允许核酸分子(例如，大核酸分子例如基因组)的有效产生。

【技术实现步骤摘要】
高效的小体积核酸合成本申请是申请日为2012年9月26日、申请号为201280057089.4、专利技术名称为“高效的小体积核酸合成”的专利技术专利申请的分案申请。专利
总体而言，本公开内容涉及用于产生核酸分子的组合物和方法。在一些方面，本专利技术允许核酸分子的微量产生，任选地随后为这些核酸分子装配成更大的分子。在一些方面，本专利技术允许核酸分子(例如，大核酸分子例如基因组)的有效产生。专利技术背景核酸分子的产生可以是相当简单或复杂的，这取决于诸如待产生的核酸分子的类型等的因素。例如，历史上，短的单链核酸分子例如引物典型地通过化学合成来产生(参见例如，U.S.专利号5,837,858，其公开内容通过提及而并入本文)。进一步地，更长的核酸分子典型地通过聚合酶链式反应(PCR)来产生。PCR的一个缺点是通常需要模板核酸。许多核酸合成方法对于从头产生大的核酸分子具有有限的能力。本公开内容的一个方面是解决该限制。专利技术概述本专利技术部分地涉及用于合成核酸分子的组合物和方法。本专利技术还涉及用于装配核酸分子从而形成诸如质粒、染色体和基因组之类的分子的组合物和方法。在一些方面，本专利技术涉本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于核酸分子的非模板定向合成的多孔平板，所述平板包含：(a)位于所述平板的众多孔的每个孔中的磁性珠粒，和(b)存在于一个或多个孔中的以电化学方式产生的酸，其中所述珠粒的直径为1.0μm至100μm。

【技术特征摘要】
2011.09.26 US 61/539,3031.用于核酸分子的非模板定向合成的多孔平板，所述平板包含：(a)位于所述平板的众多孔的每个孔中的磁性珠粒，和(b)存在于一个或多个孔中的以电化学方式产生的酸，其中所述珠粒的直径为1.0μm至100μm。2.权利要求1的多孔平板，其中所述平板中的孔的数目为10至50,000。3.权利要求1的多孔平板，其中每个孔的总体积为0.1μl至50μl。4.权利要求1的多孔平板，其中每个孔可操作地与一对电极相连接。5.权利要求1的多孔平板，其中所述平板的孔与用于引入和移除试剂的微观流体通道相连接。6.用于产生经装配的核酸分子的方法，所述方法包括：(a)合成众多核酸分子，其中以大约0.001纳摩尔至大约1,000纳摩尔的平均量在平板的孔中制备每个核酸分子；(b)将在(a)中产生的核酸分子进行合并，从而产生汇集物；(c)将一些或所有存在于在(b)中形成的汇集物中的核酸分子进行连接，从而形成众多更大的核酸分子；(d)从在(c)中形成的所述众多更大的核酸分子中去除包含序列错误的核酸分子，从而产生校正了错误的核酸分子汇集物；和(e)将在所述校正了错误的核酸分子汇集物中的核酸分子进行装配，从而形成经装配的核酸分子。7.权利要求6的方法，其中(c)中的连接由聚合酶链式反应和/或连接酶来介导。8.权利要求6的方法，其中所述经装配的核酸分子由至少五个核酸分子组成。9.权利要求6的方法，其中所述经装配的核酸分子由五至五千个核酸分子组成。10.权利要求6的方法，其中所述经装配的核酸分子具有至少20千碱基。11.权利要求6的方法，其中所述经装配的核酸分子具有10千碱基至1兆碱基。12.权利要求6的方法，其中所述经装配的核酸分子是闭合的、环状的。13.权利要求12的方法，其中所述经装配的核酸分子为质粒。14.权利要求6的方法，其中同时形成两个或更多个经装配的核酸分子。15.权利要求6的方法，其中在校正了错误的核酸分子汇集物中的核酸分子的装配在真菌细胞中发生。16.权利要求6的方法，其中将在(c)或(e)之一或两者中产生的经装配的核酸分子装配和引入到克隆载体中。17.用于产生产物核酸分子的方法，所述方法包括：(a)设计大小为10千碱基至500千碱基的产物核酸分子，其中所述产物核酸分子通过核苷酸序列来进行定义；(b)合成众多在核苷酸序列方面不同的独个核酸分子，其中合成每个独个核酸分子以制备1.0×107至1.0×109个拷贝的数量，并且其中所述独个核酸分子能够与一个或多个其他独个核酸分子杂交；(c)在一定的条件下将在(b)中合成的独个核酸分子进行合并，所述条件允许所述独个核酸分子在允许形成至少一个更大的核酸分子的条件下进行杂交；和(d)将在(c)中形成的所述至少一个更大的核酸分子与一个或多个另外的核酸分子进行合并，从而形成产物核酸分子，其中所述产物核酸分子包含少于一个的序列错误/千碱基。18.权利要求17的方法，其中所述产物核酸分子具有选自下列的大小：(a)10千碱基至300千碱基；(b)10千碱基至200千碱基；(c)10千碱基至100千碱基；和(d)10千碱基至50千碱基。19.权利要求17的方法，其中在步骤(b)之后采用错误校正程序。20.权利要求17的方法，其中合成每个独个核酸分子以制备选自下列的数量：(a)5.0×104至1.0×109个拷贝；(b)1.0×106至1.0×109个拷贝；(c)1.0×107至1.0×108个拷贝；(d)2.0×107至1.0×109个拷贝；(e)5.0×107至1.0×109个拷贝；(f)7.0×107至1.0×109个拷贝；(g)2.0×107至8.0×108个拷贝；和(h)2.0×107至5.0×108个拷贝。21.权利要求17的方法，其中使用聚合酶链式反应来扩增在步骤(c)中形成的所述至少一个更大的核酸分子。22.权利要求17的方法，其中所述产物核酸分子是可自我复制的。23.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·彼得森，A·特里弗泽，T·珀米墨尔，
申请(专利权)人：基因技术股份公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE