一种贻贝多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种由贻贝中提取的贻贝多糖及其工业化提取方法和该贻贝多糖制备降血脂、抗动脉粥样硬化的药物和保健食品中的应用。所述贻贝多糖，以（1→4)‑α‑D‑Glc为主链，含有（1→2)‑α‑D‑Glc分枝，构型为α‑吡喃型葡聚糖，平均每12个葡萄糖主链中有1个（1→2)葡萄糖分枝，相对分子量为800‑8000 KDa。所述贻贝多糖通过粗提、酶解、提纯、干燥等步骤提取自贻贝属（

【技术实现步骤摘要】
一种贻贝多糖及其制备方法和应用
本专利技术属于天然产物提取及应用领域，涉及一种贻贝多糖及其制备方法和应用。
技术介绍
脂质代谢紊乱导致的高脂血症与人类健康的头号杀手心脑血管疾病的发生有着密切的关系，是威胁人类生命健康的最重要的致病因素之一。目前市场上流行的降血脂药物以他汀类药物应用最广、疗效最好，约占调血脂药物销售总额的80%以上。但他汀类药物存在与肝、肾及体内代谢障碍相关的不良反应，另外，还常见有胃肠反应、鼻炎、鼻窦炎、头痛、咽痛、流感综合症、关节炎、胸痛、失眠、肌肉毒性等毒副作用。这使得对他汀类药物替代产品的需求极为迫切。多糖是所有生物有机体的重要组成部分，具有独特的生物学活性，能提高机体的免疫功能，并参与一切重要的生命活动过程，具有广泛的免疫增强、降血脂、抗肿瘤等作用，同时不良反应又很小。近年来随着开发海洋资源的兴起，人们对海洋生物多糖产生了极大的兴趣,发现了许多具有生物活性的多糖类物质，包括具有抗病毒活性的硫酸多糖、促进骨愈合的海洋细菌多糖等。贻贝多糖来源于海洋动物贻贝（Mytilussp.）。贻贝是海洋贝类养殖中的重要种类，又名海虹，俗称“海中鸡蛋”，具有明显的补肝肾、降血脂等功效，有很高的药食价值。研究发现贻贝降血脂的功能主要源自于其体内的多糖。目前，贻贝多糖的化学结构尚不明确，其降脂功效和毒性评价也影响着其进一步应用于药物及保健食品。因此，制备高纯度的贻贝多糖并对其进行结构解析、功效研究和毒性评价，对进一步将其开发成天然来源降血脂药物和保健食品具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供了一种由贻贝中提取的贻贝多糖及其工业化提取方法。本专利技术另一目的是提供贻贝多糖的在制备降血脂、抗动脉粥样硬化的药物和保健食品中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。一种贻贝多糖，以（1→4)-α-D-Glc为主链，含有（1→2)-α-D-Glc分枝，构型为α-吡喃型葡聚糖，平均每12个葡萄糖主链中有1个（1→2)葡萄糖分枝，其结构式为：；所述贻贝多糖相对分子量为800-8000KDa。所述贻贝多糖提取自贻贝属（Mytilussp.）动物，包括厚壳贻贝（Mytiluscoruscus）和紫贻贝（Mytilusedulis）。一种上述贻贝多糖的提取方法，包括以下步骤：（1）原料处理：贻贝加热去壳留肉并干燥，粉碎机粉碎，过20-40目筛，得贻贝干粉；（2）多糖提取：步骤（1）制得的贻贝干粉中加入6倍体积的水，100℃提取2h；过滤去除贻贝肉渣，得多糖提取液；（3）酶解：将步骤（2）制得的多糖提取液调pH至8.0，加入0.2%w.t的碱性蛋白酶，50℃酶解2h，酶解完成后在80℃条件下灭活15-30min，得酶解液；以硅藻土为助滤剂，抽滤过滤，得到澄清的酶解液；（4）乙醇沉淀：在步骤（3）制得的多糖溶液中加入1.5倍90-95%（v/v）的乙醇进行沉淀，静置6h，倾去上清液，得到多糖沉淀；（5）脱水：在步骤（4）制得的多糖沉淀中加入1倍体积90-95%（v/v）的乙醇进行脱水；（6）过滤干燥：用400目筛网对脱水后的多糖沉淀进行过滤，收集沉淀，60℃真空干燥，得到粗多糖；（7）重溶：将步骤（6）所得粗多糖溶于水，配制10%贻贝粗多糖溶液，12000rpm离心1h，将上清液用0.45μm滤膜过滤，得多糖滤液；（8）离子交换层析：将步骤（7）的多糖滤液用DEAE-琼脂糖（FF）层析柱纯化，以0.05mol/LNaCl溶液为洗脱液，收集洗脱组分；（9）超滤：用截留分子量为5000的滤膜对步骤（8）所得洗脱组分进行超滤脱盐和浓缩，得浓缩液；（10）冷冻干燥：将步骤（9）浓缩液冷冻干燥，得贻贝多糖成品。上述贻贝多糖成品的纯度为99%以上。所述的贻贝多糖在制备用于治疗或预防心脑血管疾病药物中的应用，所述的心脑血管疾病包括高血脂症、动脉粥样硬化。所述贻贝多糖在制备具有降血脂功效的保健品或特殊医学用途配方食品中的应用。本专利技术具有以下优点：本专利技术的贻贝多糖来源于海洋贝类动物贻贝，是海洋贝类养殖中的重要种类，也是最常见的一种食用贝类，可以通过人工养殖大量获得，从而使贻贝多糖来源问题很容易得到解决，又能够拉动海水养殖产业发展。本专利技术提取贻贝多糖的方法，条件温和、纯度高。本专利技术的贻贝多糖急性毒性分级属无毒级，安全性高；且贻贝多糖能显著降低甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，具有降脂作用。本专利技术的贻贝多糖在制备治疗或预防高血脂症、动脉粥样硬化的药物，制备具有降血脂功效的保健品或特殊医学用途配方食品中具有广泛应用。附图说明图1为贻贝多糖的HPGPC洗脱曲线；图2为贻贝多糖PMP柱前衍生液相色谱分析谱图：A为单糖标准品的PMP柱前衍生液相色谱图（其中，1为Man；2为GlcN；3为Rha；4为GlcA；5为GalA；6为GalN；7为Glc；8为Gal；9为Xyl；10为Ara；11为Fuc）；B为贻贝多糖的PMP柱前衍生液相色谱图。图3为贻贝多糖光谱分析谱图：A为贻贝多糖的紫外吸收曲线；B为贻贝多糖的红外吸收曲线；图4为贻贝多糖的1H-NMR图谱；图5为贻贝多糖的13C-NMR图谱图6为贻贝多糖的DEPT图谱；图7为贻贝多糖的HH-COSY图谱；图8为贻贝多糖的HSQC图谱；图9为贻贝多糖的TOCSY图谱；图10为贻贝多糖的HMBC图谱；图11为贻贝多糖甲基化衍生物GC-MS总离子流图；图12为1,5-二-O-乙酰基-1-脱氧-2,3,4,6-四-O-甲基-D-葡萄糖醇质谱图：a为贻贝多糖所得质谱图；b为CCRC标准质谱图；图13为1,2,5-三-O-乙酰基-1-脱氧-3,4,6-三-O-甲基-D-葡萄糖醇质谱图：a为贻贝多糖所得质谱图；b为CCRC标准质谱图；图14为1,4,5-三-O-乙酰基-1-脱氧-2,3,6-三-O-甲基-D-葡萄糖醇质谱图：a为贻贝多糖所得质谱图；b为CCRC标准质谱图；图15为1,2,4,5-四-O-乙酰基-1-脱氧-3,6-二-O-甲基-D-葡萄糖醇质谱图：a为贻贝多糖所得质谱图；b为CCRC标准质谱图。具体实施方式下面结合实施例和附图对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不受下述实施例的限制。实施例1贻贝多糖的提取制备。（1）原料处理：将浙江省嵊泗县产厚壳贻贝加热去壳留肉干燥，用粉碎机粉碎，过20目筛，得贻贝干粉；（2）多糖提取：步骤（1）制得的贻贝干粉中加入6倍体积的水，100℃提取2h；（3）除渣：用50目筛网分离贻贝肉渣与多糖提取液；（4）酶解：将步骤（3）制得的多糖提取液用NaOH调pH至8.0，加入质量比为0.2%的碱性蛋白酶，50℃酶解2h，酶解完成后在80℃条件下灭活20min，得酶解液；（5）过滤：以硅藻土为助滤剂，抽滤滤过，得到澄清的多糖溶液；（6）乙醇沉淀：在步骤（5）制得的多糖溶液中加入1.5倍体积质量分数为93%的食用酒精进行多糖沉淀，静置6h，倾去上清液，得到多糖沉淀；（7）脱水：在步骤（6）制得的多糖沉淀中加入1倍体积质量分数为93%的食用酒精对多糖沉淀进行脱水；（8）过滤干燥：用400目筛网对脱水后的多糖沉淀进行过滤，收集沉淀，60℃真空干燥，得到粗多糖。（9）重溶：将步骤（8）所得粗多糖溶于水，配制10%贻贝粗多糖溶液，12000rpm离心1h以除去不溶物；（10）过滤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种贻贝多糖，其特征在于，以（1→4)‑α‑D‑Glc为主链，含有（1→2)‑α‑D‑Glc分枝，构型为α‑吡喃型葡聚糖，平均每12个葡萄糖主链中有1个（1→2)葡萄糖分枝，其结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种贻贝多糖，其特征在于，以（1→4)-α-D-Glc为主链，含有（1→2)-α-D-Glc分枝，构型为α-吡喃型葡聚糖，平均每12个葡萄糖主链中有1个（1→2)葡萄糖分枝，其结构式为：；所述贻贝多糖相对分子量为800-8000KDa。2.根据权利要求1所述的贻贝多糖，其特征在于，提取自贻贝属（Mytilus）动物，包括厚壳贻贝（Mytiluscoruscus）和紫贻贝（Mytilusedulis）。3.一种如权利要求1所述的贻贝多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）原料处理：贻贝加热去壳留肉并干燥，粉碎机粉碎，过20-40目筛，得贻贝干粉；（2）多糖提取：步骤（1）制得的贻贝干粉中加入6倍体积的水，100℃下提取2h；过滤去除贻贝肉渣，得多糖提取液；（3）酶解：将步骤（2）制得的多糖提取液调pH至8.0，加入0.2%w.t的碱性蛋白酶，50℃酶解2h，酶解完成后在80℃条件下灭活15-30min，得酶解液；以硅藻土为助滤剂，抽滤过滤，得到澄清的酶解液；（4）乙醇沉淀：在步骤（3）制得的多糖溶液中加入1...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘飞，张金华，张天娇，侯重文，程艳玲，邵华荣，朱希强，凌沛学，解荣利，张辉，
申请(专利权)人：山东省药学科学院，山东福瑞达医药集团公司，
类型：发明
国别省市：山东,37