一种高效的人颊脂体脂肪干细胞的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高效的人颊脂体脂肪干细胞的制备方法，具体步骤为：获得的颊脂体组织；把人颊脂体组织剪碎成1mm

【技术实现步骤摘要】
一种高效的人颊脂体脂肪干细胞的制备方法
本专利技术涉及细胞工程领域，具体来说是一种高效的人颊脂体脂肪干细胞的制备方法。
技术介绍
脂肪干细胞（adiposed-derivedstemcells,ASCs）来源于脂肪组织，是一种处于静止状态的，未分化的干细胞，它具有保持长期自我更新的能力，且在一定条件下，能诱导分化成为特定的组织。由于脂肪组织易获得，供应充足，可反复取材，无道德争论，因此，ASCs是组织工程优秀的种子细胞，有望在乳房再造、面部凹陷畸形、各种组织缺损修复、帕金森病治疗中发挥作用。颊脂体是一团特殊的脂肪组织，它与皮下脂肪组织有着明显的区别,颊脂垫内的脂肪小叶间隔为薄弱而疏松的结缔组织，脂肪细胞小，富于顺应性和半流动性，非常柔软，易与周围组织分离，易于伸展和塑形,抗感染能力强，不易吸收和坏死,颊脂体以上解剖特点为其临床应用提供了有利条件。脂肪组织是一种非常有前景的间充质干细胞来源，其不需要给病人全身麻醉隔离，而给病人最小的不适感,人脂肪干细胞已经被证明是一种多能干细胞,尤其是颊脂体很容易在口腔颌面外科领域获得，并提供了一个可靠的口腔外科的组织材料,颊脂体包含有大量的脂肪干细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效的人颊脂体脂肪干细胞的制备方法，其特征在于：具体步骤为：（1）、通过外科手术获得的颊脂体组织，用D‑Hank’s溶液冲洗3次，洗去组织表面的结缔组织、血管内皮；（2）、用外科手术剪把人颊脂体组织剪碎成1mm

【技术特征摘要】
1.一种高效的人颊脂体脂肪干细胞的制备方法，其特征在于：具体步骤为：（1）、通过外科手术获得的颊脂体组织，用D-Hank’s溶液冲洗3次，洗去组织表面的结缔组织、血管内皮；（2）、用外科手术剪把人颊脂体组织剪碎成1mm3的小块；（3）、用含有0.01%（m/v）Ⅰ型胶原酶和0.05%（m/v）中性蛋白酶的高糖DMEM培养基10ml，在37℃的条件下，消化60min；（4）、吹打上述细胞悬液4-5次，在室温条件下，以860×g的转速，离心10min；（5）、吸弃上层悬浮脂肪颗粒和成熟脂肪细胞，获取底部细胞团，采用PBS溶液重悬细胞，并用100μm孔径滤膜过滤；（6）、对细胞滤液计数，用过量的1×BDIMag™Buffer轻洗细胞，1500rpm离心5min，弃上清；（7）、把CD31磁珠彻底涡旋均匀，然后每1×107个细胞加50μLCD31磁珠，混合均匀后，在30℃的条件下孵育30min；（8）、用BDIMag™Buffer把体系调整到1-8×107个/ml细胞之后，迅速把标记好的体系放到磁力架上孵育8-10分钟；（9）、吸出磁力架上的流式管里面的液体上清，上清细胞为CD31-细胞，此时即为去除了内皮细胞后，纯化的脂肪干细胞；（10）、在1500rpm条件下，将上清液离心5min，弃上清；（11）、将上述细胞置于37℃，5%CO2培养箱中，用10mlDMEM培养基进行培养，每周换液2次；（12）、细胞融合度达到80%以上后，吸干培养液，用PBS液轻洗细胞两次；（13）、向...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦玉军，陆宝石，李航，苏军，吴远航，
申请(专利权)人：安徽安龙基因医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34