一种体外蛋白质合成的试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种酵母细胞提取液的制备方法、酵母细胞提取液和利用所述的酵母细胞提取液在体外体系中合成蛋白质的方法，以及含有所述的酵母细胞提取液的试剂盒，该试剂盒可以用于体外体系中蛋白质合成，比传统方法简便；无需转化、培养、破碎；节省大量使用时间和成本；可表达的蛋白质种类多,不受蛋白毒性影响；可表达多种蛋白质复合物，无需37℃高温。另外，本发明专利技术的中所使用的原料酵母细胞，培养简单，操作方便，繁殖迅速，成本较低，制备得到的酵母提取物具有蛋白质翻译后修饰的能力，适合大规模制备，具有工业生产的优势；采用真空冷冻干燥法把酵母细胞提取物制成冻干粉低温或常温保存，便于运输。

Reagent kit for in vitro protein synthesis and preparation method thereof

The present invention provides extract in vitro system in protein synthesis method for extracting liquid yeast yeast cell preparation, yeast extract and the use of the yeast cells, and containing the liquid extraction kit, the kit can be used for protein synthesis in vitro system, compared with the traditional method simple; without conversion, training, breaking; save a lot of time and cost can be used; the expression of the protein species, without protein toxicity; the expression of several protein complexes, without a temperature of 37 degrees centigrade. In addition, the raw material of yeast cells, use of the invention in the cultivation of simple, convenient operation, low cost, rapid reproduction, yeast extract prepared with protein translation ability after modification, and is suitable for large-scale production, has the advantages of industrial production; a vacuum freeze-drying method to yeast cells made from the extract of freeze-dried powder at low temperature save or at room temperature, easy to transport.

【技术实现步骤摘要】
一种体外蛋白质合成的试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及用于体外蛋白合成(invitroproteinsynthesis)的酵母细胞提取液的制备方法、酵母细胞提取液和利用所述的酵母细胞提取液在体外体系中合成蛋白质的方法，以及含有所述的酵母细胞提取液的试剂盒，该试剂盒可以用于体外体系中蛋白质合成，属于生物

技术介绍
传统的蛋白表达是指通过细菌、真菌、植物细胞或动物细胞等表达外源基因的生物学技术。随着科学技术的发展，蛋白质相关的前沿领域逐渐兴起，体外蛋白合成系统应运而生，其是以外源mRNA或者DNA为模板，在RNA聚合酶及转录因子等组分作用下合成相应的mRNA，通过在体系内加入氨基酸、ATP和GTP完成蛋白质翻译的体外系统[1]。体外翻译系统内的组分和翻译条件可以根据需要进行适当的改变，可以并行检测多种基因模板，也可同时加入多个模板，可以研究多种蛋白质的复合物和之间的相互作用[2-3]。体外翻译系统也可以对基因产物进行特异性标记，产生特定改造的蛋白质产物，或便于在反应混合物中检测[4]。另外，体外翻译系统中表达蛋白质可以不需要先进行克隆，无需构建表达细胞宿主。因此体外蛋白合成系统本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外蛋白质合成试剂盒中酵母细胞提取液的制备方法，具体包括以下几个步骤：a)挑取酵母单菌落，接种于YPD培养基中；b)在OD600=3.0‑6.9时，离心收获酵母细胞；c)菌体收获后采用Buffer A 进行重悬，重悬2‑4次；d)菌体采用高压破碎或者搅拌机破碎；e)把步骤d中收获的酵母细胞提取物进行离心2‑4次，离心力在30000‑100000× g；f)离心后，取中间层的酵母细胞提取物，除去分子量不超过2 KDa的胞内组分，并将所得溶液浓缩，分装；g)液氮速冻，‑80℃保存；h)或液氮速冻后，使用冷冻干燥机器冻干, 制成水分<5%的干粉后，密闭低温或室温保存。

【技术特征摘要】
1.一种体外蛋白质合成试剂盒中酵母细胞提取液的制备方法，具体包括以下几个步骤：a)挑取酵母单菌落，接种于YPD培养基中；b)在OD600=3.0-6.9时，离心收获酵母细胞；c)菌体收获后采用BufferA进行重悬，重悬2-4次；d)菌体采用高压破碎或者搅拌机破碎；e)把步骤d中收获的酵母细胞提取物进行离心2-4次，离心力在30000-100000×g；f)离心后，取中间层的酵母细胞提取物，除去分子量不超过2KDa的胞内组分，并将所得溶液浓缩，分装；g)液氮速冻，-80℃保存；h)或液氮速冻后，使用冷冻干燥机器冻干,制成水分<5%的干粉后，密闭低温或室温保存。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述酵母菌为乳酸克鲁维酵母。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：高压破碎时，压力值为500-1400bar，菌体与BufferA的比例为2g:1mL。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征是：所述BufferA由20-30mMpH为7.4的4-羟乙基哌嗪乙磺酸钾,100-200mM醋酸钾，1-2mM醋酸镁，2mM二硫苏糖醇，0.5mM苯甲基磺酰氟组成。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：搅拌机破碎，搅拌时间为8min。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：用于体外蛋白合成的酵母细胞提取液,包括使用权利要求1中b-h任一项的酵母细胞提取物。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是：酵母细胞提取物反复冻融后，不损失体外蛋白合成的活性。8.一种采用如权利要求1所述的酵母提取物的体外蛋白质合成的试剂盒，其特征是：所述试剂盒具有一体外蛋白质合成反应体系，该反应体系包括：酵母细胞提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，符雷，柴智，刘帅龙，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31