缀合试剂制造技术

本发明专利技术提供一种通式化合物，其中每个X独立地代表聚合物链；p代表1-6的整数；Y代表酰胺基；且Z代表-CH.(CH2L)2或-C(CH2L)(＝CH2)，其中每个L独立地代表离去基团。所述化合物是可用于将聚合物缀合至蛋白质上的试剂，所得缀合物是新的并且也构成本发明专利技术的一部分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】缀合试剂本专利技术涉及用于将聚合物缀合到蛋白质和肽的新型缀合试剂，还涉及生产新型缀合物的新方法。许多治疗活性分子，例如蛋白质，不具有在临床医学用途中达到效果所需要的性质。例如，许多天然蛋白质不能作为良好的药物，因为在将其给予患者时有几个固有缺点，包括：(1)蛋白质被多种存在于血液或组织中的肽链内切酶和肽链端解酶消化；(2)在一定程度上，几乎所有的蛋白质都是免疫原性的；和(3)蛋白质能被肾脏超滤作用和细胞内吞作用快速地排泄。一些被发现可在医学上作为活性治疗剂的分子具有全身毒性或缺乏最佳生物利用度和药物动力学。如果蛋白质很快地从血液循环清除，则它们通常不得不被频繁地给予患者。频繁的给药进一步提高毒性风险，尤其是免疫学衍生的毒性。通常很难达到治疗有效剂量，因此效力受损。因此，快速清除既是效力问题也是安全性问题。水溶性合成聚合物，特别是聚亚烷基二醇，被广泛用于缀合治疗活性分子如蛋白质。通过延长循环时间和降低清除率，这些治疗缀合物已显示可有利地改变药物动力学，降低全身毒性，并且在一些情况下，显示出提高的临床效力。将聚乙二醇PEG共价缀合到蛋白质的方法通常称为“PEG化”。对于使效力最优化和确保剂量之间的一致性非常重要的是，对于每个分子，缀合到每个蛋白质的缀合聚合物分子的数量是相同的，并且各聚合物分子特异性地共价缀合到每个蛋白质分子的相同的氨基酸残基上。在沿着蛋白质分子的位点上非特异性缀合会导致缀合产物分布，且通常未缀合的蛋白质形成难以纯化且纯化成本高的复杂混合物。WO2005/007197公开了一系列新型缀合试剂，所述缀合试剂可用于与蛋白质的亲核基团反应从而产生蛋白质-聚合物缀合物。这些试剂发现特别有用，因为其能够与来自蛋白质中的二硫键的两个硫原子缀合从而形成硫醚缀合物，并且也能用于缀合其它亲核试剂，例如与两个组氨酸残基，例如在与蛋白质连接的聚组氨酸标签中的两个组氨酸残基缀合，如WO2009/047500中记载的。对于一些用途，需要将两个聚合物链缀合到蛋白质上，因为含有给定分子量的单链的缀合物的空间性质可明显不同于含例如各具有一半分子量的两条链的缀合物的性质。可用于这种缀合作用的试剂是已知的。因此，例如，US5,932,462(Harris)公开了能将两条PEG链缀合到蛋白质的试剂。Congetal，BioconjugateChemistry23(2012)，pp.248-263也公开了能将两条PEG链缀合到蛋白质的试剂，具体地，如第249页图1的试剂3所示的PEG-双砜试剂。在Cong的试剂中，两个PEG链连接到作为苯基基团上的不同位置，所述苯基基团为该试剂与蛋白质反应官能团之间的连接基团。Cong的试剂能够将两个PEG链缀合到，例如，来自蛋白质中的二硫键的两个硫原子，或者缀合到与蛋白质连接的聚组氨酸标签中存在的两个组氨酸残基，其与Harris的试剂相比提供了改良的缀合作用。现已发现能够将两条聚合物链缀合到蛋白质的新试剂，其显示超越Cong已知试剂的改良性质。因此，本专利技术提供通式化合物：其中每个X独立地代表聚合物链；p代表1-6的整数；Y代表酰胺基；且Z表示-CH.(CH2L)2或-C(CH2L)(＝CH2)，其中每个L独立地代表离去基团。式I试剂含有两条聚合物链X。每个聚合物X可为，例如聚(亚烷基二醇)、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯如聚(丙烯酰吗啉)、聚甲基丙烯酸酯、聚噁唑啉、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺或聚甲基丙烯酰胺如聚羧甲基丙烯酰胺、或HPMA共聚物。另外，该聚合物可以是一种易受酶降解或水解降解的聚合物。这样的聚合物，例如包括聚酯、聚缩醛、聚(原酸酯)、聚碳酸酯、聚(亚氨基碳酸酯)、以及聚酰胺如聚(氨基酸)。聚合物可以是均聚物、无规共聚物或结构限定的共聚物如嵌段共聚物。例如，它可以是来自两个或更多个环氧烷、或者来自聚(环氧烷)与聚酯、聚缩醛、聚(原酸酯)、或聚(氨基酸)的共聚物，例如嵌段共聚物。所谓的Pluronics是PEG嵌段共聚物中重要的类别。这些都来自环氧乙烷和氧化丙烯嵌段。可使用的多官能聚合物包括二乙烯基醚-马来酸酐与苯乙烯-马来酸酐的共聚物。也可以使用天然存在的聚合物，例如，多糖如壳多糖、葡聚糖、糊精、脱乙酰壳多糖、淀粉、纤维素、糖原、聚唾液酸及其衍生物。可使用蛋白质作为聚合物。这样允许将一个蛋白质如抗体或抗体片段与另一个蛋白质如酶或其他活性蛋白质缀合。并且，如果使用含催化剂序列的肽，例如糖基转移酶的O-聚糖受体位点，则允许为随后的酶反应引入入底物或目标物。也可使用聚(氨基酸)如聚谷氨酸或聚甘氨酸，也可使用来自天然单体如糖或氨基酸与合成单体如环氧乙烷或甲基丙烯酸的混合聚合物。优选地，用于本专利技术的每个聚合物是亲水的或水溶性的合成聚合物。如果聚合物是聚(亚烷基二醇)，则优选为一种含C2和/或C3单元的聚合物，特别是聚(乙二醇)(PEG)。除了上下文另有要求，本说明书中任何之处提及聚合物，都应理解为包括对PEG的具体提及。聚合物可任选地通过任何希望的方式衍生或官能化。反应性基团可连接到聚合物终点或末端基团，或沿着聚合物链通过侧链连接基团连接；在这种情况下，聚合物可以是，例如聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯或马来酸酐共聚物。这种官能化的聚合物提供了制备多聚缀合物(即聚合物缀合到多于一个分子上的缀合物)的又一个机会。例如，聚合物可以在沿着它长度的任何点上(例如在它的终点上)携带一个或多个药物分子。如果需要，可使用常规方法将该聚合物偶联到固体载体上。所述两条聚合物链X可以相同或者不同。特别是，每个X可以代表相同的化学聚合物，或不同的化学聚合物。例如，每个X均可代表PEG链，或一个X可代表PEG链且另一个X可代表不同的聚合物，例如PVP或蛋白质链。每个聚合物X可含有单个的直链，或其可具有包含许多或大或小的链的支化形态。通常，聚合物链通过合适的末端基团引发或终止，并且在该链的另一末端连接到式I分子的剩余部分。例如，PEG链可以具有选自烷氧基(如甲氧基)、芳氧基、羧基或羟基的末端基团。在该链是支化的情况下，每个自由支链终点都会携带末端基团。每个聚合物链X可具有任何合适的分子量，且每个聚合物链X可具有与另一个相同或不同的分子量。例如每个链可有至少5、10、15、20、30或40kDa的分子量。通常，每个链的优选最大分子量是60kDa。当缀合物意在离开循环并渗入组织时，例如用于治疗由恶性肿瘤、感染或自身免疫疾病或者创伤引起的炎症时，可有利地使用聚合物(X+X)的总分子量在2000-30,000g/mol范围内的缀合物。对于缀合物意在保留在循环中的应用，使用总分子量较高的聚合物是有利的，例如在20,000-75,000g/mol范围内。p代表1-6的整数，例如1、2，或特别是3。本专利技术的试剂包含酰胺基Y，如绘在式I中的Y可为-CO-NR′-或优选为-NR′-CO-，其中R′代表C1-4烷基基团，例如甲基基团，或特别是氢原子。该基团可连接到式I中苯基的任何位置，但是优选-CO.Z基团的对位。如果需要，式I的苯基基团可携带另外的取代基，但是优选不被取代。离去基团L可代表例如-SR、-SO2R、-OSO2R、-N+R3、-N+HR2、-N+H2R、卤素或其中R具有上述给出的含义，且代表取代的芳基本文档来自技高网...

【技术保护点】
以下通式的化合物其中每个X独立地代表聚合物链；p代表1‑6的整数；Y代表酰胺基；Z代表‑CH.(CH2L)2或‑C(CH2L)(＝CH2)，其中每个L独立地代表离去基团。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.06.18 GB 1210770.21.以下通式的化合物其中每个X独立地代表聚(乙二醇)；p代表1-6的整数；Y代表酰胺基；Z代表-CH(CH2L)2或-C(CH2L)(＝CH2)，其中每个L独立地代表离去基团。2.权利要求1的化合物，其中Y代表-NH-CO-。3.权利要求1或2的化合物，其中p是3。4.权利要求1或2的化合物，其中每个L独立地代表-SR、-SO2R、-OSO2R、-N+R3、-N+HR2、-N+H2R、卤素、或其中R代表氢原子或烷基、芳基或烷芳基，且代表含有至少一个吸电子取代基的取代芳基。5.权利要求4的化合物，其中每个L独立地代表苯磺酰基或甲苯磺酰基。6.权利要求1的化合物，其具有式：7.权利要求6的化合物，其中每个X独立地代表式CH3O-(CH2CH2O)m-的聚乙二醇，其中m是X中环氧乙烷单元的数量。8.以下通式的化合物其中X、p和Y具有上述权利要求任一项中给定的含义，A代表基团CO、CHOH、CHNH2、CHNHR、CHNR2、CHOR、CHO...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·戈德温，
申请(专利权)人：宝力泰锐克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB