本发明专利技术涉及透明质酸-槲皮素结合物自组装胶束制剂及其制备方法，由丁二酸酐修饰的槲皮素与己二酸二酰肼修饰的透明质酸反应得到的透明质酸-槲皮素结合物在蒸馏水中超声分散而成，透明质酸-槲皮素结合物为己二酸二酰肼修饰的透明质酸溶于磷酸盐缓冲液中，加入用DMSO溶解的丁二酸酐修饰的槲皮素，在N2保护下室温搅拌反应后透析、冻干制得。本发明专利技术胶束制剂在电镜下呈圆球形，平均粒径为172.1nm，界面电势为-20.3mV，药物含量为10.2％，且呈现明显的缓释特征，具有一定的pH敏感性。细胞实验显示制剂能明显提高槲皮素对肿瘤细胞的毒性，且在受体介导的内吞作用下，对CD44过表达的肿瘤细胞具有良好的靶向性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于胶束制 备
。
技术介绍
槲皮素（Quercetin，QT)是从天然植物中提取的多酚黄酮类化合物，具有广泛的 药理作用。研究表明槲皮素对多种癌症均具备良好的抑制作用，如乳腺癌，肺癌，卵巢癌等。 然而由于其溶解度低，亲水性差，在胃肠道中不稳定，以及广泛的首过代谢，槲皮素在临床 上的应用受到了很大的限制。为了提高槲皮素的生物利用度，目前的研究主要集中于利用 纳米技术制备槲皮素的各种新型制剂，如包合物、微乳、脂质体、聚合物胶束、纳米结晶和胶 束等。其中，制备具有自组装能力的天然聚合物-药物结合物受到了广泛关注。 透明质酸（Hyaluronic acid, HA)是一种天然的高分子酸性黏多糖，具有良好的生 物相容性和生物可降解性。将其与疏水性药物结合后可明显提高药物的水溶性。此外，透 明质酸与肿瘤细胞表面过度表达的特异性标志物，如⑶44具有较高的亲合力。因此以透明 质酸为靶向分子与药物结合后，可增强由受体介导的细胞内吞作用，使药物主动靶向于病 灶部位，避免对正常细胞的毒性，提高药物的治疗指数。 此外，透明质酸分子中众多的羟基和羧基为结合药物提供了活性位点，但直接结 合有低效性，将槲皮素与透明质酸有效结合才有利于广泛应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服上述不足而提供一种透明质酸-槲皮素结合物自组装胶束 制剂及其制备方法，不仅能够实现药物的有效结合，还可控制透明质酸分子中羧基的取代 度，有利于保留其主动靶向性。 本专利技术是通过以下技术方案实现的： 透明质酸-槲皮素结合物自组装胶束制剂，由丁二酸酐修饰的槲皮素与己二酸二 酰肼修饰的透明质酸反应得到的透明质酸-槲皮素结合物在蒸馏水中超声分散而成。 所述的透明质酸-槲皮素结合物为己二酸二酰肼修饰的透明质酸溶于磷酸盐缓 冲液中，加入用DMSO溶解的丁二酸酐修饰的槲皮素，在N 2保护下室温搅拌反应后透析、冻 干制得。 透明质酸-槲皮素结合物自组装胶束制剂的制备方法，包括步骤如下： (1) 丁二酸酐修饰的槲皮素的制备：将槲皮素和丁二酸酐溶于四氢呋喃中，加入 催化剂，N2保护下室温搅拌反应1?3天，除杂纯化处理得到反应中间体槲皮素半琥珀酸； 将所得中间体溶于乙腈中，加入N-羟基丁二酰亚胺磷酸二苯酯（SDPP)和催化剂，N 2保护下 室温搅拌反应2?10h，将反应液后处理得丁二酸酐修饰的槲皮素，即QT-NHS酯粗品； (2)己二酸二酰肼修饰的透明质酸的制备：将透明质酸HA溶于H2O中，加入己二酸 二酰肼（ADH)，用盐酸调节pH至4. 75,再加入催化剂，并保持pH在4. 75时间0. 1?Ih后 用氢氧化钠溶液调节pH至7. 0,反应液用蒸馏水透析，冻干得HA-ADH ; (3)己二酸二酰肼修饰的透明质酸溶于磷酸盐缓冲液中形成lmg/ml的溶液，加入 用DMSO溶解的丁二酸酐修饰的槲皮素，在N 2保护下室温搅拌反应1?3天后透析、冻干制 得透明质酸-槲皮素结合物HA-QT ; (4)将HA-QT固体，置于蒸馏水中，室温下，搅拌后超声分散，使其在水中分散均 勻，形成胶束制剂。 上述制备方法中步骤（1)中槲皮素与丁二酸酐的摩尔比例为1:1?5,槲皮素与四 氢呋喃的用量为1?5: l,mg/mL,槲皮素与催化剂的摩尔比例为1:1?20,所述的催化剂选 自吡啶、三乙胺、EDCI中的任一种或两种以上。所述的除杂纯化处理为去除溶剂，碱洗，乙 酸乙酯提取，饱和食盐水洗，无水Na 2SO4干燥，过滤，蒸除溶剂。所述的中间体与SDPP的摩 尔比例为1:1?5,中间体与乙腈的用量为1?5:1，mg/mL，中间体与催化剂的摩尔比例为 1:1?10,所述的催化剂选自吡陡、三乙胺、EDCI中的任一种或两种以上。所述的后处理为 旋蒸去除溶剂，乙酸乙酯溶解，水洗，饱和食盐水洗，无水Na 2SO4干燥，过滤，蒸除溶剂。 步骤⑵中HA与ADH的摩尔比例为1:0. 5?5，拟与H2O的用量为5?20: l，mg/ mL，HA与催化剂的质量比例为3?10:1，所述的催化剂选自吡陡、三乙胺、EDCI中的任一种 或两种以上。所述的盐酸的浓度为lmol/L，氢氧化钠溶液的浓度为lmol/L。所述的蒸馏水 透析两天，每12h换水一次。 步骤⑶中用的pH = 6. 5的磷酸盐缓冲液，己二酸二酰肼修饰的透明质酸与丁二 酸酐修饰的槲皮素用量的质量比例为2?10:1，DMS0与体系中水的体积比为2:1。所述的 透析为先用DMSO透析2天,再用蒸馈水透析3天。 步骤⑷中HA-QT与蒸馈水的比例为2?10:1，mg/mL ;所述的超声分散为搅拌 IOmin 后超声 lmin。 槲皮素水溶性差，在胃肠道中不稳定，口服生物利用度在小鼠中小于17%，人体还 不到2%，极大的限制了其临床应用，因而研发具有良好溶解性能的槲皮素给药系统备受关 注。透明质酸水溶性强，以其作为载体，在提高药物水溶性的同时，还能延长药物在体内的 滞留时间，实现制剂对肿瘤的靶向治疗作用。本专利技术研究首次将槲皮素与透明质酸相结合， 是一种具有较长的体内作用时间，较好的主动靶向功能的透明质酸-槲皮素结合物自组装 胶束制剂。该结合物胶束与槲皮素原料药相比，显示了更强的细胞毒性和细胞摄取作用，以 及更长的动物体内循环时间和抗肿瘤疗效。细胞研究结果显示，透明质酸-槲皮素结合物 自组装胶束与非槲皮素原料药相比，可明显提高槲皮素对MCF-7细胞的毒性和摄取。动物 研究表明，该结合物的胶束在大鼠体内的平均滞留时间，半衰期和血药峰浓度和体内抗肿 瘤活性均显著高于槲皮素原料药。此外，与表面活性剂胶束相比，此类聚合物胶束具有较高 的载药量，较低的临界胶束浓度浓度，且呈现良好的缓释行为，可有效避免剧烈的突释。本 专利技术胶束制剂在电镜下呈圆球形，平均粒径为172. lnm，界面电势为-20. 3mV，药物含量为 10. 2% (w/w)，且呈现明显的缓释特征，具有一定的pH敏感性。细胞实验显示制剂能明显提 高槲皮素对肿瘤细胞的毒性，且在受体介导的内吞作用下，对CD44过表达的肿瘤细胞具有 良好的靶向性。动物实验表明该胶束能明显改善药物在体内的药物动力学参数，增强药物 的抗肿瘤效果，且安全无毒，无刺激。本专利技术的透明质酸-槲皮素结合物自组装胶束制剂将 来有望成为癌症治疗的新型药物制剂。 此外，本专利技术所采用的制备方法，简单易行，且条件温和，有效地避免了剧烈反应 条件对槲皮素药物活性的破坏。且该方法具有良好的通用性，可普遍用于以透明质酸为载 体与其他药物相结合的制备工艺之中。 【附图说明】 图1 :以pH = 7. 0的磷酸盐缓冲液（PBS)为释放介质于37°C下制剂及原料药的释 放行为。三条曲线分别代表：HA-QT制剂在含有1 %吐温-80的释放介质，HA-QT制剂在含 有1 %吐温-80和酯酶的释放介质，及槲皮素的丙二醇溶液的释放行为。 图2 :以pH = 5. 0的磷酸盐缓冲液（PBS)为释放介质于37°C下制剂及原料药的释 放行为。三条曲线分别代表：HA-QT制剂在含有1 %吐温-80的释放介质，HA-QT制剂在含 有1 %吐温-80和酯酶的释放本文档来自技高网...
【技术保护点】
透明质酸‑槲皮素结合物自组装胶束制剂，由丁二酸酐修饰的槲皮素与己二酸二酰肼修饰的透明质酸反应得到的透明质酸‑槲皮素结合物在蒸馏水中超声分散而成。
【技术特征摘要】
1. 透明质酸-槲皮素结合物自组装胶束制剂，由丁二酸酐修饰的槲皮素与己二酸二酰 肼修饰的透明质酸反应得到的透明质酸-槲皮素结合物在蒸馏水中超声分散而成。2. 根据权利要求1所述的透明质酸-槲皮素结合物自组装胶束制剂，其特征是，所述 的透明质酸-槲皮素结合物为己二酸二酰肼修饰的透明质酸溶于磷酸盐缓冲液中，加入用 DMSO溶解的丁二酸酐修饰的槲皮素，在N2保护下室温搅拌反应后透析、冻干制得。3. 透明质酸-槲皮素结合物自组装胶束制剂的制备方法，其特征是，包括步骤如下： (1) 丁二酸酐修饰的槲皮素的制备：将槲皮素和丁二酸酐溶于四氢呋喃中，加入催化 齐U，N2保护下室温搅拌反应1?3天，除杂纯化处理得到反应中间体槲皮素半琥珀酸；将所 得中间体溶于乙腈中，加入N-羟基丁二酰亚胺磷酸二苯酯SDPP和催化剂，N2保护下室温搅 拌反应2?10h，将反应液后处理得丁二酸酐修饰的槲皮素，即QT-NHS酯粗品； (2) 己二酸二酰肼修饰的透明质酸的制备：将透明质酸HA溶于H2O中，加入己二酸二酰 肼ADH，用盐酸调节pH至4. 75,再加入催化剂，并保持pH在4. 75时间0? 1?Ih后用氢氧 化钠溶液调节pH至7. 0,反应液用蒸馏水透析，冻干得HA-ADH ; (3) 己二酸二酰肼修饰的透明质酸溶于磷酸盐缓冲液中形成lmg/ml的溶液，加入用 DMSO溶解的丁二酸酐修饰的槲皮素，在N2保护下室温搅拌反应1?3天后透析、冻干制得 透明质酸-槲皮素结合物HA-QT ; (4) 将HA-QT固体，置于蒸馏水中，室温下，搅拌后超声分散，使其在水中分散均匀，形 成胶束制剂。4. 根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：翟光喜，庞鑫，杨小叶，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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