一种Taq聚合酶冻干保护剂制造技术

本发明专利技术提供了一种Taq聚合酶冻干保护剂，以100ml Taq聚合酶冻干保护剂计，在85ml Taq聚合酶缓冲液与15ml甘油的混合溶液中加入1克甘露醇、1克葡萄糖、2克可溶性淀粉后即得。本发明专利技术的Taq聚合酶冻干保护剂使Taq聚合酶可以进行有效的冷冻干燥过程。添加冻干保护剂的Taq聚合酶冷冻干燥后，仍能进行PCR实验，其残余酶活为70％。而且Taq聚合物酶冻干粉可存放在4℃冰箱，便于存储和运输。Taq聚合物酶冻干粉稳定性好。

A Taq polymerase lyophilized agent

The invention provides a Taq polymerase cryoprotector, with 100ml Taq polymerase cryoprotector, adding 1 grams of 1 grams of glucose, mannitol, 2 grams of soluble starch is obtained in the mixed solution of 85ml buffer and 15ml Taq polymerase in glycerol. The Taq polymerase lyophilized agent of the present invention enables the Taq polymerase to undergo an efficient freeze-drying process. PCR experiments with lyophilized Taq polymerase could still be carried out, and the residual enzyme activity was 70%. In addition, the Taq polymer enzyme freeze-dried powder can be stored in a refrigerator of 4 DEG C, which is convenient for storage and transportation. Taq polymer enzyme freeze-dried powder has good stability.

【技术实现步骤摘要】
一种Taq聚合酶冻干保护剂
本专利技术属于生物
，具体涉及一种Taq聚合酶冻干保护剂。
技术介绍
Taq聚合酶是从水生栖热菌ThermusAquaticus(Taq)中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶。它经常用于聚合酶链反应(PCR)，这是一种扩增DNA短片段数量的方法。在97.5℃Taq酶的半衰期只有9分钟。而在低温环境，Taq酶的活性会大大降低，从而使半衰期延长，增加保存时间。因此，Taq聚合酶可以在酶贮存缓冲液中-20℃保存，该方法能够有效保存Taq聚合酶酶活性。但酶贮存缓冲液在冷冻过程与解冻过程会造成Taq聚合酶的酶活损失。真空冷冻干燥简称冻干，是将湿物料或溶液在较低的温度(－10℃～－50℃)下冻结成固态，然后在真空(1.3～13帕)下使其中的水分不经液态直接升华成气态，最终使物料脱水的干燥技术。而Taq聚合酶在冷冻干燥的过程中由于低温效应、冻结效应和脱水效应会导致其活性组分的变性，使Taq聚合酶残余活性降低甚至失活。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种Taq聚合酶冻干保护剂，按照以下步骤配制：以100mlTaq聚合酶冻干保护剂计，在85mlTaq聚合酶缓冲液与15ml甘油的混合溶液中加入1克甘露醇、1克葡萄糖、2克可溶性淀粉，即得。优选地，本专利技术所述的Taq聚合酶冻干保护剂中，所述Taq聚合酶缓冲液为Tris-HCl缓冲液(PH8.0)。优选地，本专利技术所述的Taq聚合酶冻干保护剂中，所述Taq聚合酶冻干保护剂的使用方法为在Taq聚合酶酶液中加入Taq聚合酶冻干保护剂；所述加入的Taq聚合酶冻干保护剂与Taq聚合酶的重量比为1:1。本专利技术的另一目的在于提供一种Taq聚合酶冻干保存的方法，包括以下步骤：1)、提取获得Taq酶液；2)、在Taq酶液中加入Taq聚合酶冻干保护剂；3)、以预冻温度为-20℃，预冻12小时；4)、预冻后置于真空冷冻干燥机内冷冻干燥约14小时～16小时，得到白色粉末粗酶，-20℃保存。优选地，本专利技术所述的Taq聚合酶冻干保存的方法中，所述Taq聚合酶冻干保护剂为按照以下步骤配制：以100mlTaq聚合酶冻干保护剂计，在85mlTaq聚合酶缓冲液、15ml甘油中加入1克甘露醇、1克葡萄糖、2克可溶性淀粉，即得。优选地，本专利技术所述的Taq聚合酶冻干保存的方法中，所述Taq聚合酶缓冲液为Tris-HCl缓冲液(PH8.0)。优选地，本专利技术所述的Taq聚合酶冻干保存的方法中，所述Taq聚合酶冻干保护剂与Taq聚合酶的配比为1:1。优选地，本专利技术所述的Taq聚合酶冻干保存的方法中，所述Taq聚合酶的单位体积的活力单位为2.5U/μl。由上以及本专利技术后续实施例可见，本专利技术的优点至少在于：1)、本专利技术的Taq聚合酶冻干保护剂使Taq聚合酶可以进行有效的冷冻干燥过程。添加冻干保护剂的Taq聚合酶冷冻干燥后，仍能进行PCR实验，其残余酶活为70％。2)、Taq聚合物酶冻干粉可存放在4℃冰箱，便于存储和运输。Taq聚合物酶冻干粉稳定性好。具体实施方式在本专利技术的一个实施例中，提供了一种Taq聚合酶冻干保护剂，所述Taq聚合酶冻干保护剂为按照以下步骤配制：以100mlTaq聚合酶冻干保护剂计，在85mlTaq聚合酶缓冲液与15ml甘油的混合溶液中加入1克甘露醇、1克葡萄糖、2克可溶性淀粉，即得。优选地，在本专利技术的另一个实施例中，所述Taq聚合酶缓冲液为Tris-HCl缓冲液(PH8.0)。优选地，在本专利技术的另一个实施例中，所述Taq聚合酶冻干保护剂的使用方法为在Taq聚合酶酶液中加入Taq聚合酶冻干保护剂；所述加入的Taq聚合酶冻干保护剂与Taq聚合酶的重量比为1:1。在本专利技术的再一个实施例中，还提供了一种Taq聚合酶冻干保存的方法，包括以下步骤：1)、提取获得Taq酶液；2)、在Taq酶液中加入Taq聚合酶冻干保护剂；3)、以预冻温度为-20℃，预冻12小时；4)、预冻后置于真空冷冻干燥机内冷冻干燥约14小时～16小时，得到白色粉末粗酶，-20℃保存。优选地，本专利技术所述的Taq聚合酶冻干保存的方法中，所述Taq聚合酶冻干保护剂为按照以下步骤配制：以100mlTaq聚合酶冻干保护剂计，在85mlTaq聚合酶缓冲液、15ml甘油中加入1克甘露醇、1克葡萄糖、2克可溶性淀粉，即得。优选地，在本专利技术的另一个实施例中，所述Taq聚合酶缓冲液为Tris-HCl缓冲液(PH8.0)。优选地，在本专利技术的另一个实施例中，所述Taq聚合酶冻干保护剂与Taq聚合酶的配比为1:1重量比。优选地，在本专利技术的另一个实施例中，所述Taq聚合酶的单位体积的活力单位为2.5U/μl。下面将结合本专利技术中的实施例，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例11、取出-80℃保存的大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)，购自北京索莱宝公司置于冰上解冻，移液管吸出50μl移入灭菌离心管中。2、加入Taq质粒1μl(武汉楚灵生物工程有限公司，pTrc-Taq蛋白酶质粒)，轻轻混匀后置于冰上静置30min，42℃水浴锅放置45秒～60秒，冰上放置2～3min。3、离心管中加入500μl液体LB培养基，轻轻混匀后置于37℃摇床振荡复苏1h，转速60～80rpm。4、移液管吸出100μl涂布划含100μg/ml氨苄青霉素的琼脂平板上，37℃过夜培养。5、挑取单菌落，接种于50mL含100μg/ml氨苄青霉素的LB培养基中，220rpm37℃培养过夜。6、取10ml过夜培养的大肠杆菌接种于1L含100μg/ml氨苄青霉素的LB培养基中，220rpm37℃培养6～7h，OD600为0.8～1.0，加入1mmol/lIPTG，继续培养12h。7、3000rpm，4℃，离心10min收集细菌，弃去上清。8、加入含4mg/ml溶菌酶的Tris-HCl缓冲液(PH8.0)30ml，充分重悬，室温孵育15min。75℃水浴1h(期间摇匀数次)。9、上述混合物冰上冷却后，12000rpm，4℃，离心10min，收集上清液。10、上清液在4℃，Tris-HCl缓冲液(PH8.0)中透析12h，得到澄清透明的Taq粗酶液。11、在Taq粗酶液中加入混合保护剂1％甘露醇、1％葡萄糖、2％可溶性淀粉和15％甘油预冻(预冻温度为-20℃；预冻12h；装液厚度约为5mm)。12、预冻后置于真空冷冻干燥机内冷冻干燥约14～16h，得到白色粉末Taq酶。13、Taq酶蛋白用Tris-HCl缓冲液(PH8.0)1:1稀释，PCR检测。PCR反应体系(50μl体系)为模板DNA(SEQIDNO1)2μl，上游引物(SEQIDNO2ATCACTGCATAATTCGTGTCGCT)1μl，下游引物(SEQIDNO3CGATCCCAACCTCCAGAACAT)1μl，10×Buffer(含Mg2+)5μl，dNTP(各2.5mM)4μl，Taq酶2-3μl，加ddH2O至50μl。PCR反应条件为步骤(1)温度94℃，时间3-5min；(2)温度94℃，时间0.5min；(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Taq聚合酶冻干保护剂，其特征在于，按照以下步骤配制：以100ml Taq聚合酶冻干保护剂计，在85ml Taq聚合酶缓冲液与15ml甘油的混合溶液中加入1克甘露醇、1克葡萄糖、2克可溶性淀粉，即得。

【技术特征摘要】
1.一种Taq聚合酶冻干保护剂，其特征在于，按照以下步骤配制：以100mlTaq聚合酶冻干保护剂计，在85mlTaq聚合酶缓冲液与15ml甘油的混合溶液中加入1克甘露醇、1克葡萄糖、2克可溶性淀粉，即得。2.根据权利要求1所述的Taq聚合酶冻干保护剂，其特征在于，所述Taq聚合酶缓冲液为Tris-HCl缓冲液(PH8.0)。3.根据权利要求1所述的Taq聚合酶冻干保护剂，其特征在于，所述Taq聚合酶冻干保护剂的使用方法为在Taq聚合酶酶液中加入Taq聚合酶冻干保护剂；所述加入的Taq聚合酶冻干保护剂与Taq聚合酶的重量比为1:1。4.一种Taq聚合酶冻干保存的方法，包括以下步骤：1)、提取获得Taq酶液；2)、在Taq酶液中加入Taq...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾昊，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：北京,11