本发明专利技术公开一种猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制备方法和应用，其抗菌肽氨基酸序列如SEQ No.1所示。本发明专利技术首先分析猪凝血酶的氨基酸组成特点，发现碳末端富含有疏水性和正电荷的氨基酸残基，从而通过截取碳末端的方式获得不同长度的衍生肽；然后使用多肽合成仪，进行固相合成法合成多肽粗品；最后使用高效液相色谱对多肽粗品进行纯化，并用电喷雾质谱法进行鉴定。通过最小抑菌浓度和溶血试验测定衍生抗菌肽的抑菌活性，筛选出具有较高活性的多肽PT17。本发明专利技术的优点：该多肽衍生自猪凝血酶的碳末端，属于天然衍生物，安全性较好，具有广谱抗菌活性和低毒性；肽链较短，制备方法和技术成熟，合成成本低。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开一种猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制备方法和应用，其抗菌肽氨基酸序列如SEQ No.1所示。本专利技术首先分析猪凝血酶的氨基酸组成特点，发现碳末端富含有疏水性和正电荷的氨基酸残基，从而通过截取碳末端的方式获得不同长度的衍生肽；然后使用多肽合成仪，进行固相合成法合成多肽粗品；最后使用高效液相色谱对多肽粗品进行纯化，并用电喷雾质谱法进行鉴定。通过最小抑菌浓度和溶血试验测定衍生抗菌肽的抑菌活性，筛选出具有较高活性的多肽PT17。本专利技术的优点：该多肽衍生自猪凝血酶的碳末端，属于天然衍生物，安全性较好，具有广谱抗菌活性和低毒性；肽链较短，制备方法和技术成熟，合成成本低。【专利说明】猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制备方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制备方 法和应用。
技术介绍
传统抗生素在饲料兽药中的应用提高了 了动物的生产性能，降低了疾病发生率； 但同时也导致药物残留、耐药性菌株、环境污染等问题的产生，因此需要发现新型的抗菌制 剂。益生菌、中草药、抗菌肽等作为重要的替代物，受到人们的广泛关注，其中抗菌肽是机体 免疫的重要组成部分，因为其独特由膜介导的抑菌机制而不易使细菌产生耐药性、安全无 毒性等特点而备受青睐。抗菌肽一般都具有疏水性和正净电荷的特点，残基长度也从十以 下到几十不等。 结合生物信息学等分析方法，发现凝血、消化和补体系统中的某些重要丝氨酸蛋 白酶的碳末端富含疏水性和正电荷残基。因此，本专利技术以猪凝血酶为目标，通过截取其碳末 端而获得氨基酸长度从11到19不等的5条抗菌肽序列，通过化学合成和活性测定，筛选抑 菌活性优异的衍生肽。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制备方法和应用。本 专利技术通过截取猪凝血酶碳末端的方式获得氨基酸长度不等的衍生肽，通过活性测定筛选得 到活性优异的衍生抗菌肽。 本专利技术的目的通过下述技术方案实现： 1、一种猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽，序列如SEQ No. 1所示。 2、如上所述的一种猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽，制备方法如下： (1)根据猪凝血酶的氨基酸组成特点，发现碳末端富含有疏水性和正电荷的氨基 酸残基，从而通过截取猪凝血酶碳末端的方式获得氨基酸长度为11、13、15、17、19不等的5 条衍生肽PTll，PT13，PT15，PT17，PT19，序列分别如如SEQNo·2、SEQNo·3、SEQNo·4、SEQ No. 1、SEQ No. 5 所示； (2)采用固相化学合成法，通过多肽合成仪合成这五条多肽粗品； (3)将合成的多肽使用反相高效液相色谱进行纯化，并利用电喷射质谱法对合成 的多肽进行鉴定，完成多肽的制备。 3、一种如上所述的猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽在治疗革兰氏阳性菌或革兰氏阴 性菌感染性疾病药物中的应用。 本专利技术的有益效果：（1)该多肽衍生自猪凝血酶的碳末端，属于天然衍生物，安全 性较好，具有广谱抗菌活性和低毒性；（2)该多肽由17个氨基酸组成，肽链较短，制备方法 和技术成熟，合成成本低。 【专利附图】【附图说明】 图1为抗菌肽PTll的质谱图。 图2为抗菌肽PT13的质谱图。 图3为抗菌肽PT15的质谱图。 图4为抗菌肽PT17的质谱图。 图5为抗菌肽PT19的质谱图。 【具体实施方式】 下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限 于此。 实施例1 : 猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽的设计 通过NCBI获取猪凝血酶的氨基酸全序列，以该酶碳末端的第一个氨基酸为起点， 通过截取方式，获得氨基酸长度从11至19不等的5条衍生肽PTlI，PT13, PT15, PT17, PT19。 如表1所示。 表1猪凝血酶衍生抗菌肽的氨基酸序列和分子量 【权利要求】1. 一种猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽，其特征在于，序列如SEQ No. 1所示。2. 根据权利要求1所述的一种猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽的制备方法，其特征在于， 步骤如下： (1) 根据猪凝血酶的氨基酸组成特点，发现碳末端富含有疏水性和正电荷的氨基酸残 基，从而通过截取猪凝血酶碳末端的方式获得氨基酸长度为11、13、15、17、19不等的5条衍 生肽？1'11、？1'13、？1'15、？1'17、？1'19，序列分别如如5￡〇吣.2、5￡〇吣.3、5￡〇吣.4、5￡〇吣.1、 SEQ No. 5 所示； (2) 采用固相化学合成法，通过多肽合成仪合成这五条多肽粗品； (3) 将合成的多肽使用反相高效液相色谱进行纯化，并利用电喷射质谱法对合成的多 肽进行鉴定，完成多肽的制备。3. -种如权利要求1所述的猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽在治疗革兰氏阳性菌或革兰 氏阴性菌感染性疾病药物中的应用。【文档编号】A61K38/48GK104498465SQ201410855264【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月25日 优先权日:2014年12月25日 【专利技术者】马清泉, 毕重朋, 单安山, 吕希婷 申请人:东北农业大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种猪凝血酶碳末端衍生抗菌肽，其特征在于，序列如SEQ No.1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马清泉，毕重朋，单安山，吕希婷，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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