一种ASE‑HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种ASE‑HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，该方法提取效果好且耗时短、重复性好，检测精度高。属于化学检测领域。该方法采用ASE法萃取黄芩粉末，并收集乙醇萃取液；采用HPLC法测定乙醇萃取液中黄芩苷的含量。本发明专利技术可以代替药典方法对黄芩中的黄芩苷进行提取以及含量测定。

Method for the determination of baicalin content in a ASE HPLC method

The invention discloses a method for ASE HPLC method for the determination of baicalin content in the extraction method, good effect and short time, good repeatability, high accuracy. Belongs to the field of chemical detection. The ASE method was used to extract the powder of Scutellaria baicalensis Georgi and the ethanol extract was collected. The content of Baicalin in ethanol extract was determined by HPLC. The invention can extract baicalin in Radix Scutellariae and replace the Pharmacopoeia method and determine the content of baicalin.

【技术实现步骤摘要】
一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法
本专利技术属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法。
技术介绍
2010年版药典方法中记载的制备供试品溶液的方法为：取本品中粉约0.3g，精密称定，加70％乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。该方法回流时间长，且对技术人员的专业水平要求较高。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术旨在提供一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，该方法提取效果好且耗时短、重复性好，检测精度高。为了实现上述技术效果，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE法萃取黄芩粉末，并收集乙醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定乙醇萃取液中黄芩苷的含量。优选地，所述的步骤1依次包括下述子步骤：步骤S1：将黄芩样品粉碎，过筛，取0.3g与1g石英砂混合；步骤S2：将所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加石英砂至与池口平行；步骤S3：用70％乙醇萃取，结束后，将萃取液用70％乙醇定容至50ml，离心，取上清液，即得。优选地，步骤S3所述的萃取参数为：压力为1500psi，温度为120℃，萃取时间为5min，循环次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。优选地，步骤S2所述的ASE萃取池的体积为10ml。优选地，步骤S3所述的离心参数为：离心速度为15000r/min，离心时间为3min。优选地，步骤1所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为ThermoSyncronisC18；柱温为40℃；流速为0.5mL/min；流动相为甲醇-0.1％磷酸；检测波长为280nm。优选地，所述的色谱柱规格为：3*100mm，3μm。优选地，所述的流动相为体积比等于47：53的甲醇-0.1％磷酸。本专利技术与传统方法相比，具有以下优点：本专利技术曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用70％乙醇回流3小时。本实验选用甲醇、乙醇、70％乙醇作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示甲醇与乙醇提取后黄芩苷含量与2015年版《中国药典》含量下降，原因可能是黄芩苷的极性大，故采用与药典一致的提取溶剂70％乙醇。70％乙醇的熔沸点较高，快速溶剂萃取(以下简称ASE)提取原理：A:提高温度降低溶剂的黏度，减少溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；B:萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态(液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力)。故我们选择采用120℃，提取5min，提取3次，即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度120℃，提取时间5min，提取次数3次。附图说明图1为以黄芩苷对照品的浓度(mg/ml)-峰面积进行的线性回归图；图2为黄芩苷对照品的色谱图；图3为采用药典方法提取所得的供试品溶液的色谱图；图4为采用ASE法萃取所得的供试品溶液的色谱图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术的权利要求保护范围内所做的有限次修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围内。实施例11、仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、ThermoU3000UHPLC液相色谱仪。1.2试剂：水：符合GB/T6682规定的一级水；乙醇(CH4O)：色谱纯(液相色谱用)；石英砂：粒径2mm。2、方法2.1供试品溶液的制备2.1.12010年版药典方法：取本品中粉约0.3g，精密称定，加70％乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.1.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：样品经粉碎机粉碎，过三号筛，精密称定0.3g，与1g石英砂混合均匀，待用，移入到预先放好过滤膜的10ml萃取池中再加入适量石英砂，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用70％乙醇稀释至刻度，在15000r/min下离心3min，取上清液，进入LC测定。2.2对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。2.3ASE萃取条件：压力为1500psi，温度为120℃，萃取时间为5min，循环次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。2.4色谱条件与系统适用性试验：a)仪器：Thermo双三元液相(U-3000)No.5121；b)色谱柱：ThermoSyncronisC18，3*100mm，3μm；c)柱温：40℃；d)流速：0.5mL/min；e)流动相：：甲醇-0.1％磷酸(47:53)；f)检测波长：280nm；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数按补骨脂素峰计算应不低于2500。2.5测定法：照高效液相色谱法(通则0512)测定；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.6标准限值要求：本品按干燥品计算，含黄芩苷(C21H18O11)不得少于9.0％。2.7计算(外标法)：式中CR—对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/L)；AX—供试品的峰面积；AR—对照品峰面积。注意：使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。3、结果3.1线性关系取黄芩苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％乙醇制成每1ml含黄芩苷0.2852mg的溶液，然后分别精密吸取该溶液0.5μl、0.8μl、1μl、2μl、5μl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果详见表1。以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归，求得回归方程：y＝6021.6316x-32.5278，R2＝1.0000。黄芩苷在0.1426～1.426mg/ml范围内呈良好的线性关系，详见图1。表1线性实验结果3.2重现性实验取相同批号的样品(批号：1510077)0.3g，共4份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中黄芩苷的含量见表2，RSD为0.01％，结果表明ASE提取方法重复性良好。表2重现性实验结果3.3样品含量测定结果(3批)表3样品含量测定结果3.4色谱测定图2为黄芩苷对照品的色谱图；图3为采用药典方法提取所得的供试品溶液的色谱图；图4为采用ASE法萃取所得的供试品溶液的色谱图。4、讨论：4.1ASE提取溶剂的选择：本专利技术曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ASE‑HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE法萃取黄芩粉末，并收集乙醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定乙醇萃取液中黄芩苷的含量。

【技术特征摘要】
1.一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE法萃取黄芩粉末，并收集乙醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定乙醇萃取液中黄芩苷的含量。2.根据权利要求1所述的一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，其特征在于，所述的步骤1依次包括下述子步骤：步骤S1：将黄芩样品粉碎，过筛，取0.3g与1g石英砂混合；步骤S2：将所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加石英砂至与池口平行；步骤S3：用70％乙醇萃取，结束后，将萃取液用70％乙醇定容至50ml，离心，取上清液，即得。3.根据权利要求2所述的一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，其特征在于，步骤S3所述的萃取参数为：压力为1500psi，温度为120℃，萃取时间为5min，循环次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。4.根据权利要求2所述的一种A...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖强，陈学松，韦日伟，王丽丽，欧妮，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45