本发明专利技术公开了栀子苷和黄芩苷在制备脑缺血损伤急性期和恢复早期药物中的应用，其特征在于所述药物包括9mg栀子苷单剂量和21mg黄芩苷单剂量的活性成分。本发明专利技术的药物治疗效果好，能够降低脑缺血炎症反应对脑缺血起到一定的保护作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药领域，尤其涉及从梔子苷和黄芩苷在制备脑缺血损伤急性期和恢复早期药物中的应用。
技术介绍
缺血性脑卒中属中医“中风”范畴，其发病率、病死率及致残率高，已成为严重威胁人类健康的医学难题和社会问题。 现代医家认为“毒损脑络 ”是其病理基础和关键环节，清热解毒法能祛除热毒、瘀毒或痰毒等，疏通经络，促进气血津液的布散，濡养脑窍，从而治疗缺血性脑卒中。文献研究发现，清热药黄芩、梔子对脑缺血作用研究较多，集中于黄芩苷、黄芩茎叶总黄酮对大鼠脑缺血\再灌注损伤的保护作用，梔子苷与黄芩苷配伍防治脑缺血损伤，机理研究多通过改善炎性损伤、兴奋性氨基酸毒性、能量代谢障碍等。前期研究发现，梔子和黄芩配伍(3 7)对双侧结扎小鼠脑缺血损伤有保护作用8，可能通过减少炎性因子分泌对大脑中动脉堵塞脑缺血大鼠具有保护作用9。因此，观察黄芩和梔子苷配伍(3 7)对脑缺血急性期和恢复早期半胱氨酸白三烯受体(CysLT2R)在海马表达的调控作用，探讨黄芩梔子配伍防治脑缺血炎性损伤的物质基础及机制有着重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种脑缺血损伤急性期和恢复早期药物，该药物治疗效果好。本专利技术涉及梔子苷和黄芩苷在制备脑缺血损伤急性期和恢复早期药物中的应用，其特征在于所述药物包括9mg梔子苷提取物单剂量和21mg黄芩苷提取物单剂量的活性成分，其中活性成分梔子苷和黄芩苷在提取物中的质量百分含量在80%以上。。在本专利技术的ー个优选实施方式中，所述的药物不含有其它活性成分。在本专利技术的另ー个优选实施方式中，所述的药物为ロ服制剂。本专利技术另一方面还涉及评价脑缺血损伤急性期和恢复早期治疗效果的试剂盒，其特征为半胱氨酸白三烯受体CysLT2R、RNA提取试剂以及PCR扩增试剂，其中PCR扩增试剂中包括旦-actin 引物5' -TAG GAG CCA GGG CAG TAA TCT-3'，5' -CGT TGA CAT CCG TAA AGA CCT C-3'；CysLT2R 引物:5' -CTG CAT CCC ATG TGA CCA AG-3'，5' -AGA GGA AGG CAC TGA CCA CTA TC-3'。附图说明图I :脑缺血急性期大鼠海马组织CysLT2R的表达；图2 :脑缺血恢复期大鼠海马组织CysLT2R的表达。具体实施例方式以下结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明。实施例II. I试验药物桅子苷和黄岑苷，陕西中鑫生物技术有限公司生产，批号110831和110623，HPLC检测桅子苷含量80. 23 %，黄芩苷含量82. 50 %。I. 2实验动物雄性SD大鼠，，体重250±20g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(陕)2007-001。I. 3试剂CysLT2R，santa公司(批号sc_27918) ;HRP标记山羊抗兔，KPL公司；牛 血清白蛋白(BSA), Roche 公司；Tween_20, Amresco 公司;0. 45umPVDF 膜，Millipore 公司；蛋白marker (10-170kDa), Fermentas公司；SDS_PAGE凝胶制备试剂盒,细胞总蛋白提取试剂盒，磷酸化蛋白酶抑制剂，PMSF(IOOmM)，蛋白上样缓冲液，丽春红染液，考马斯亮兰G-250染液，ECL液，抗体洗脱液，显影、定影液谷歌生物等均由谷歌生物公司购买；胶片，Kodak公司；RNA 提取试剂盒，Invitrogen Life Technologies 公司；RT-PCR 试剂盒由 T0Y0B0THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix公司提供；三氯甲烷、异丙醇、无水こ醇购自国药集团化学试剂有限公司；无核糖核酸酶(RNase)去离子水,超纯水湿热灭菌40min。I. 4仪器752-P紫外分光光度计，上海现科仪器有限公司；PL_203电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；TGL-16c台式离心机，上海安亭科学仪器厂；AJC-0501-P纯水仪，重庆艾科浦；79-1磁力搅拌器，常州澳华仪器有限公司；WD-9405A脱色摇床，北京六一仪器厂；DYY-6C电泳仪，北京六一仪器厂；TL-420D水浴锅，姜堰市天カ医疗器械厂有限公司；AX- II暗匣，广东粤华医疗器械厂有限公司；PF PF-S-200封ロ机，温州市江南机械厂；Forma-86C ULT超低温冰箱,美国热电公司；Neofuge 15R台式高速冷冻离心机，HealForce公司；SW_CJ-1FD医用净化工作台，苏州净化设备公司；PCR仪，上海宏石医疗科技有限公司。2 方法2. I分组及给药56只雄性SD大鼠，随机分为假手术组，脑缺血急性期和恢复期模型组(缺血24h和缺血72h),桅子苷加黄岑苷组(15mg+15mg),醒脑静注射液组10ml/kg,姆组7只。各组均灌胃给药，给药体积0. 50mL/100g，l次/d，连续4天。假手术组和模型对照组给予等体积的1%的吐温溶液，其余各组药物皆用1%的吐温溶液溶解。2. 2造模方法及取材末次给药30min后，采用线栓法制备大脑中动脉局灶性脑缺血模型。与前期实验相同，分别于缺血24h和72h处死大鼠，剥离患侧大脑的海马组织，液氣中保存。2. 3 wester-blot法检测大鼠海马组织CysLT2R的表达2. 3. I样品制备组织块用冷TBS洗涤2_3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。加入10倍组织体积本试剂(使用前数分钟内加入cooktail+磷酸化蛋白酶抑制剂)冰上彻底匀浆。将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。采用Bradford方法进行样品浓度測定，计算上样量，在蛋白标本中加入适当体积的5*蛋白上样缓冲液，沸水浴5分钟。2. 3. 2电泳及转膜SDS-PAGE电泳，浓缩胶电压75V，约15分钟，分离胶用120V至溴酚蓝刚跑出即可终止电泳，进行转膜，200mA，lh。将转好的膜于室温下脱色摇床上用5%的脱脂牛奶(0. 5% TBST配)，封闭lh。稀释ー抗(TBS-T溶解的5%脱脂牛奶)，4°C过夜。用TBST在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。将ニ抗用TBST稀释3000倍，室温下孵育30min后，用TBST在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。2. 3. 3显色及分析将A和B两种试剂各I. 5ml在离心管中等体积混合，将膜蛋白面朝上与此混合液充分接触，2min后，去尽残液，包好，放入X-光片夹中曝光。将胶片进行扫描存档，Alpha软件处理系统分析目标带的光密度值。2. 4Real Time-PCR 检测大鼠脑组织 CysLT2RmRNA 的表达2. 4. IReal Time-PCR 特异引物合成由 Invitrogen Biotechnology Co.,LTD 中国公司合成，分别为 旦-actin 引物5' -TAG GAG CCA GGG CAG TAA TCT-3'，5' -CGT TGA CAT CCG TAA AGA CCT C-3'(扩增长度 IlObp)CysLT2R 引物5' -CTG CAT CCC AT本文档来自技高网...
【技术保护点】
栀子苷和黄芩苷在制备脑缺血损伤急性期和恢复早期药物中的应用，其特征在于所述药物包括9mg栀子苷提取物单剂量和21mg黄芩苷提取物单剂量的活性成分，其中活性成分栀子苷和黄芩苷在提取物中的质量百分含量在80％以上。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李敏，王斌，唐志书，侯建平，孙建宁，
申请(专利权)人：陕西中医学院，
类型：发明
国别省市：
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