本发明专利技术涉及黄芩苷在制药中的应用。黄芩苷通过上调Ｆｏｘｐ３的表达，促进Ｔ细胞向具有免疫抑制作用的Ｔｒｅｇ的转化；同时黄芩苷抑制具有促炎作用的Ｔｈ１７，抑制Ｔｈ１７介导的血管炎。其抑制Ｔｈ１７的主要机制是通过抑制ＩＬ－６介导的Ｔｈ１７的扩增。同时我们进一步的实验证明黄芩苷作为一种新的免疫调节剂，在治疗红斑狼疮肾炎和类风湿性关节炎中发挥很好的疗效。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及黄芩苷的新用途，尤其涉及在制备预防和治疗红斑狼疮肾炎、类风 湿性关节炎和血管炎的药物中的应用。
技术介绍
自身免疫性疾病是一种免疫细胞介导的危害人类健康的疾病，常伴有多器官和 多系统的损伤，重者威胁到生命。激素等免疫抑制剂作为目前治疗的一线药物，常 因为严重的副作用使病情加重，甚至治疗终止。而随着环境污染和生活工作压力等 的改变，自身免疫性疾病的发病率在逐年增加。寻找安全有效的治疗自身免疫病的 药物已经成为世界范围深入研究的课题。自身免疫性疾病常伴有免疫耐受的破坏。免疫耐受对于维持体内免疫平衡和防 止自身免疫性疾病很重要。胸腺首先会清除自身反应性T细胞，如果胸腺不能完全去 除自身反应性T细胞，牝时健康个体并没有发生自身免疫性疾病，因为存在有外周免 疫耐受。调节性T细胞(Treg)具有免疫抑制作用，在外周免疫耐受中起关键作用， 可防止自身免疫性疾病的发生。越来越多的研究支持自身免疫性疾病如红斑狼疮、 类风湿关节炎等都伴有Treg细胞数量的减低，而促进T细胞向Treg细胞转化的药物 对治疗自身免疫性疾病将会起重要作用。叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Forkhead/ winged helix transcription factor (Foxp3))，是Treg细胞发育过程中的核心转 录因子，调控幼稚性T细胞向Treg细胞转化。Fo邓3基因敲处的小鼠可发生严重的自 身免疫性疾病，说明Foxp3在维持免疫耐受和防止自身免疫性疾病的发生中起重要作 用。目前为止公认的具有上调Foxp3的药物寥寥无几，天然药物至今未有发现。分泌IL-17的CD4+T细胞(Thl7)是新近发现的一新T细胞亚群，其主要通过分泌 白,胞介素-17A (IL-17A),白细胞介素-17F (IL-17F),肿瘤坏死因子-a (TNF-a)和白细胞介素-6 (IL-6)等细胞因子刺激血管内皮细胞分泌粘附分子，介导炎 细胞对组织的浸润和组织的损伤；同时Thl7细胞也可以分泌细胞毒物质直接损伤组 织。越来越多的研究表明Thl7细胞在一些自身免疫性疾病如风湿性关节炎、红斑 狼疮、银屑病和多发性硬化的发病中起关键作用。因此寻找同时能够抑制Thl7细胞3亚群的药物就有可能缓减自身免疫性疾病。黄芩是传统的清热解毒中药，味苦，性 寒，传统医学中用于治疗湿热痞满、肺热咳嗽、痈肿疮毒等症。黄芩苷(7-glucuronic acid-5，6-dihydroxyflavone)是黄芩的主要成份，分子式为C2孔Ab分子量为 446.35，结构式在以往的应用和研究中，已知黄芩苷具有保肝利胆、降压、利尿、抗菌的作用， 但黄芩苷在调控T细胞向Treg和Thl7转化中的作用未见报道，同时在治疗系统性 红斑狼疮肾炎和风湿性关节炎也未见报道。本专利技术的目的是提供黄芩苷在制药中的新用途。为了达到上述目的，本专利技术的技术方案是提供黄芩苷在制备预防和治疗红斑狼 疮肾炎、类风湿性关节炎和Thl7细胞介导的血管炎的药物中的应用。下面用黄芩苷的药理实验和结果来说明其在制药领域中的新用途。黄芩苷体外诱导T细胞向Treg转化，同时抑制向Thl7转化首先我们用流式 细胞仪分选小鼠脾脏中的幼稚T淋巴细胞(CD4+CD25—)， 96孔板中培养，每孔1X106 个细胞，同时加入2^g/ml的anti-CD3和2^g/ml的anti-CD28。加入转化生长因子 (TGF-{3 ) 5ng/ml诱导向Treg细胞转化；加入转化生长因子(TGF-e ) 5ng/ml + 白细胞介素-6 (IL-6) 20ng/ml诱导向Thl7细胞转化。同时在培养液中加入20幽 的黄芩苷(溶解在二甲基亚砜(DMSO))。细胞培养3天后，通过流式细胞仪检测 CD4+Fo邓3+和CD4+IL-17+的T细胞在CD4+细胞中的百分率，结果如图1所示。该图说 明了黄芩苷能够体外调控T细胞向Treg和Thl7细胞的转化。、黄芩苷上调Fo邻3 mRNA的表达首先我们用流式细胞仪分选小鼠脾脏中的幼稚 T淋巴细胞，96孔板中培养，每孔1X1(T个细胞，设三复孔。同时加入2^g/ml的 anti-CD3和2Pg/ml的anti-CD28。单独加入转化生长因子(TGF-P ) 5ng/ml、 20, 的黄芩苷或两者同时加。细胞培养3天后，通过实时定量聚合酶联反应(实时定量 PCR)检测Foxp3 mRNA的表达，结果如图2所示。该图说明了黄芩苷能够上调Foxp
技术实现思路
4mRNA的表达。黄芩苷改善自发性狼疮小鼠的肾脏损伤12只五月龄自发性狼疮小鼠(MRL/lpr)购自中国科学院上海生命科学研究院上海斯莱克实验动物有限公司。治 疗组腹腔注射100mg/kg/天黄芩苷(溶解在生理盐水，保存在-2(TC的冰箱)，连续 治疗9周。分别在第O周、3周、6周和9周收集小鼠24小时尿液，检测尿蛋白含 量，计算相对尿蛋白增加=待测时间尿蛋白-第0周尿蛋白。如图3所示，*〈0.001， 说明黄芩苷能够改善狼疮小鼠的24小时尿蛋白。第9周处死动物，取肾脏做病理苏 木素一伊红(HE)和Masson三色染色了解肾脏损伤情况，如图4所示，说明黄芩苷 能够改善狼疮小鼠的肾脏损伤。取脾细胞检测黄芩苷是否能促进T细胞向Treg细胞 的转化，如图5所示，说明黄芩苷能够促进狼疮小鼠体内T细胞向Treg转化。黄芩苷缓解佐剂性关节炎小鼠关节损伤18只8周龄雄性C57BL/6小鼠购自中 国科学院上海生命科学研究院上海斯莱克实验动物有限公司。造模使用100ri含有 热休克的10mg/ml的结核杆菌的完全佛式佐剂免疫小鼠后足，小鼠2周后关节炎症 状到达高峰，此时开始腹腔注射100mg/kg/天的黄芩苷1周。取关节组织行病理切 片评价治疗效果，如图6所示，说明黄芩苷能够改善关节炎小鼠的关节损伤，取小 鼠关节组织通过实时定量PCR检测黄芩苷对白细胞介素-17 (IL-17) mRNA的影响， 如图7所示，说明黄芩苷能够抑制关节炎小鼠关节组织中IL-17mRNA的表达。黄芩苷抑制IL-17诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)炎症因子的表达 HUVEC培养在6孔板中，待细胞至80%融合时，加入50ng/ml IL-17和20幽黄苳苷， 并继续培养24小时后，收集细胞，通过实时定量PCR检测黄芩苷对细胞间粘附分 子-l(ICAM-1)，血管内皮细胞间粘附分子-1 (VCAM-1)和IL-17 mRNA表达的影响， 并以18SrRNA作为内参。结果如图8所示，说明黄芩苷能够抑制IL-17诱导的粘附 分子mRNA的表达。黄芩苷抑制IL-17诱导的T细胞对人脐静脉血管内皮细胞的粘附人脐静脉血 管内皮细胞培养在12孔板中，待细胞至80%融合时，加入50 ng/ml IL-17和20MM 黄芩苷，并继续培养24小时后；然后以5:1的比例加入人白血病淋巴细胞(Jurkat)， 继续培养24小时。培养结束后以生理盐水洗去未粘附的淋巴细胞，显微镜下观察粘 附细胞。如图9所示，说明黄芩苷能够抑制IL-17诱导的T细胞内皮细胞的粘附。本专利技术以调控T细胞转化为靶点，发现黄芩苷调控T细胞转化在治疗自身免疫性 疾病中的应用，其具体优点如下1、 本专利技术对已知化合物黄芩苷发掘了新的医疗用途，开本文档来自技高网...
【技术保护点】
黄芩苷在制备治疗或预防红斑狼疮肾炎的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.黄芩苷在制备治疗或预防红斑狼疮肾炎的药物中的应用。2. 黄芩苷在制备治疗或预防类风...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨骥，李明，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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