罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种通过正负电荷相互作用制备稳定高效的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物的方法。通过本发明专利技术制备得到的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物组织相容性好，制备方法简单，具有更高的生物利用度高的优点。

Preparation method of bluish acid acidic polysaccharide oral peptide insulin nano composite

The invention discloses a method for preparing a stable and efficient Apocynum acid polysaccharide membrane penetrating peptide through oral and negative charges interaction and an oral insulin nano composite. The apocynum acid polysaccharide oral membrane compound prepared by the invention has the advantages of good histocompatibility, simple preparation method and high bioavailability.

【技术实现步骤摘要】
罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物的制备方法
本专利技术涉及生物医药
，更具体地，涉及一种罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物的制备方法。
技术介绍
随着社会的发展，人们的生活水平不断提高，肥胖和糖尿病等“富贵病”在社会中呈现快速增长趋势。为了有效治疗这些富贵病，科研人员进行了大量的理论研究和药物开发，现阶段胰岛素仍然是应用最广泛最有效的降血糖药物。由于胰岛素的蛋白属性，口服给药无法发挥降血糖的生物活性，多数糖尿病患者需要每天频繁注射用药，给患者的日常生活带来诸多不便，而且还存在一定的过敏反应、感染等风险，严重的降低了糖尿病患者的生活质量。与传统胰岛素皮下注射给药，胰岛素口服给药是相对安全、方便、无痛的给药方式，同时，口服给药经肠道吸收后，由门静脉循环进入肝脏，更加符合胰岛素的正常生理状态。近年来，大量的文献报道了利用多糖、聚丙烯酸、聚乳酸、磷脂等载体材料构建的口服胰岛素纳米传递系统。壳聚糖作为多糖中的一种，具有非常好的载药性和小肠吸收效率，在近期被广泛的研究和报道。但是，壳聚糖作为一种氨基多糖，本身显碱性，在制备口服胰岛素纳米复合物的过程中，对胰岛素活力产生不可逆的破坏，严重降低胰岛素的生物利用度。纵观现有的口服胰岛素纳米体系，主要存在着生物利用度低，口服胰岛素起效慢，吸收效率不稳定等需要改进的问题。因此，开发生物相容性好的高效口服胰岛素纳米复合物，提高其生物利用度，提高口服胰岛素纳米复合物的吸收效率具有重要研究意义和临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术拟采用改进的离子凝胶法，通过正负电荷相互作用的机理，制备稳定高效的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物。罗布麻酸性多糖是从罗布麻叶中提取得到的一种酸性多糖，具有羧基残基COO-,带负电荷。先前的研究表明罗布麻酸性多糖具有改善胰岛细胞活力的生物功能（一种罗布麻酸性多糖在治疗糖尿病药物中的应用，专利号ZL2013101362880）。罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物的具体制备方法为：S1：罗布麻酸性多糖溶液，置于磁力搅拌装置上，同时滴加胰岛素溶液和穿膜肽溶液，制备得到罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物溶液；S2：将制备的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物溶液中加入冻干保护剂，冷冻干燥；S3：将冻干得到的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物粉末分装到肠溶胶囊中备用。罗布麻酸性多糖溶液，蒸馏水配制，浓度为0.1mg/mL至0.3mg/mL；磁力搅拌装置的转速为800至1500rpm；胰岛素溶液，胰岛素包括猪胰岛素、牛胰岛素等动物源胰岛素，或者人工重组制备的胰岛素，用蒸馏水配制，浓度为0.5至1.0mg/mL，用0.1MHCl调节pH值，pH值在3.5-4.6之间；穿膜肽溶液，蒸馏水配制，浓度为0.05至0.2mg/mL；穿膜肽为九聚精氨酸寡肽。胰岛素溶液滴加速度为1mL/min至10mL/min。穿膜肽溶液滴加速度为1mL/min至10mL/min。投药量比例（质量比）为罗布麻酸性多糖：胰岛素：穿膜肽=1：（4至8）：（0.5至2）。冻干保护剂选用5%（w/v）海藻糖。本专利技术制备的罗布麻酸性多糖-穿膜肽-胰岛素纳米复合物有以下几方面优势：1）罗布麻酸性多糖本身具有改善胰岛细胞活力的功能（一种罗布麻酸性多糖在治疗糖尿病药物中的应用，专利号ZL2013101362880），辅助胰岛素的降血糖功效，提高糖尿病治疗效率；2）罗布麻酸性多糖主链上的羧基残基（COO-），可以为胰岛素提供酸性微环境，对碱性的小肠液起到缓冲作用，保持胰岛素的活力；3）穿膜肽（精氨酸九聚体）不仅作为纳米材料制备过程中的交联剂，还是一种小肠吸收促进剂，可以显著提高纳米复合物的小肠吸收效率；4）另外，本专利技术拟通过肠溶胶囊灌胃给药，避开药物在胃液中的失活与损失，直接到达小肠部位被吸收，可以提高药物的有效吸收，提高口服胰岛素的生物利用度。通过本专利技术制备得到的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物组织相容性好，制备方法简单，具有更高的生物利用度高的优点。附图说明图1为纳米复合物粒径测定结果图。图2为罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物降低SD糖尿病大鼠血糖结果图，其中曲线A为生理盐水对照组，曲线B为胰岛素溶液口服对照组，曲线C为胰岛素溶液皮下对照组，曲线D为纳米复合物给药组。具体实施方式（一）罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物的制备：10mL罗布麻酸性多糖水溶液，0.1mg/mL，放在磁力搅拌器上，加入转子，同时缓慢加入pH=4的0.8mg/mL胰岛素溶液和0.1mg/mL的穿膜肽溶液，加入速度1mL/min，滴加完毕，继续搅拌5min。取1mL溶液100k超滤管离心，测定胰岛素包封率，结果显示胰岛素包封率达到98%。取1mL溶液在马尔文粒径仪上测定纳米粒径，结果如图1所示，粒径为60nm。（二）罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物的降血糖效果评价：成年雄性SD大鼠注射55mg/kg链脲佐菌素溶液，当大鼠血糖浓度高于16.7mmol/L时，糖尿病大鼠模型诱发成功。将大鼠随机分为5组（n=6），给药前禁食过夜，各组给药方案如表格1所示：表格1体内治疗实验分组和给药方案组别给药方案给药途径胰岛素剂量A生理盐水对照组胶囊灌胃0IU/kgB胰岛素溶液口服对照组胶囊灌胃10IU/kgC胰岛素溶液皮下对照组皮下注射1IU/kgD纳米复合物给药组胶囊灌胃10IU/kg分别在给药后不同时间点（0、1、2、4、6、8、10h）测定血糖浓度。根据各时间点血糖水平相对于初始值的百分率变化评价降血糖效果，以0h时血糖浓度作为100%，绘制血糖相对浓度-时间变化曲线。结果如图2所示，生理盐水对照组（曲线A）于胰岛素溶液口服对照组（曲线B）均没有明显的降低血糖的效果，而胰岛素溶液皮下对照组（曲线C）作为阳性对照具有很好的降低血糖的效果，但是当时间超过6小时后，大鼠血糖开始上升；纳米复合物给药组（曲线D）在2小时过后开始显著降低大鼠血糖，药效持续到10小时之久。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物的制备方法，其特征在于采用如下步骤：S1：将罗布麻酸性多糖溶液置于磁力搅拌装置上搅拌，同时滴加胰岛素溶液和穿膜肽溶液，搅拌制备得到罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物溶液；S2：将制备的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物溶液中加入冻干保护剂，冷冻干燥；S3：将冻干得到的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物粉末分装到肠溶胶囊中备用。

【技术特征摘要】
1.一种罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物的制备方法，其特征在于采用如下步骤：S1：将罗布麻酸性多糖溶液置于磁力搅拌装置上搅拌，同时滴加胰岛素溶液和穿膜肽溶液，搅拌制备得到罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物溶液；S2：将制备的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物溶液中加入冻干保护剂，冷冻干燥；S3：将冻干得到的罗布麻酸性多糖穿膜肽口服胰岛素纳米复合物粉末分装到肠溶胶囊中备用。2.根据权利1要求所述的制备方法，其特征在于，罗布麻酸性多糖溶液，用蒸馏水配制，浓度为0.1mg/mL至0.3mg/mL。3.根据权利1要求所述的制备方法，其特征在于，磁力搅拌装置的转速为800至1500rpm。4.根据权利1要求所述的制备方法，其特征在于，胰岛素溶液中，胰岛素包括猪胰岛素、牛胰岛素等动物源胰岛素，或者人工重组制备的胰岛素。5.根据权利1要求所述的制备方法，其特征在于，胰...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙成新，刘利新，陈永明，何治宇，刘志佳，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44