一种火麻油中四氢大麻酚检测的前处理方法技术

本发明专利技术公开了一种火麻油中四氢大麻酚检测的前处理方法，属于分析测定技术领域。本发明专利技术的方法采用乙腈提取，冷冻处理和分散固相萃取剂的方法对提取液进行净化，过滤后用于仪器分析。本发明专利技术弥补了现有安全标准中前处理方法基质共提取物含量过高的不足，操作简便，重现性好，提取液中基质共提取物的含量降至1.90mg/mL，基质共提取物去除率达81.5％，四氢大麻酚的相对标准偏差为1.8％～4.7％，有效保证了四氢大麻酚的回收率，同时净化有效去除了样品提取液中的杂质，减少了对检测仪器的污染。

【技术实现步骤摘要】
一种火麻油中四氢大麻酚检测的前处理方法
本专利技术涉及一种火麻油中四氢大麻酚检测的前处理方法，属于分析测定

技术介绍
火麻又名大麻、汉麻，是一种一年生草本植物，广泛分布于我国广西、云南、甘肃、黑龙江等地，极具食用和药用价值。火麻籽含20～25％蛋白、20～30％碳水化合物、25～35％脂质、10～15％纤维以及丰富的矿物质。火麻油中多不饱和脂肪酸含量高达近80％，其中亚油酸与亚麻酸的比例平衡，达到3:1左右，符合国际卫生组织推荐的小于等于4:1最佳比值的特点，有益于人体健康。火麻油具有延缓动脉硬化、预防心脑血管疾病的功效，是值得推荐的长寿油料。丰富的γ-亚麻酸还赋予了火麻油很高的工业价值，如制备护肤品等等。火麻油虽然具有极高的营养价值，但也含有一些不利于人体健康的物质，其中δ9-四氢大麻酚为一种毒性成分，作用于心血管系统和中枢神经系统，导致人产生松弛欣快的幻觉或沉睡昏迷，长期摄入可导致精神堕落，甚至丧失工作能力。在现有的检测技术中，参考社会公共安全标准GA/T206-99中的检测方法，火麻油样品通过正己烷溶解后直接进样色谱仪器中，没有萃取及除杂的过程，形成严重的基质干扰且污染色谱柱、检测器等部位。而现有的一些其它的检测方法通常采用固相萃取小柱作为净化基质的方法，前处理操作时间长(通常除杂过程所需的时间长达1～2h)，并且存在成本高、洗脱所用溶剂量大(产生50～150mL的废弃溶液)等缺点。因此，优化对火麻油中四氢大麻酚检测的前处理过程对于获得更加精准的检测结果是非常有必要的。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术提供一种火麻油中四氢大麻酚检测的前处理方法，所述方法包括萃取、吸附除杂、氮吹、复溶和过滤；所述吸附是以氧化铝为除杂剂，按照20～30mg氧化铝/g火麻油的量向火麻油中加入氧化铝，震荡50～70s。在本专利技术的一种实施方式中，所述萃取是以乙腈为萃取溶剂，按1g：8～12mL的比例向火麻油中加入乙腈，在20～25℃进行萃取，再于-10～30℃冷冻60～240min。在本专利技术的一种实施方式中，所述萃取条件为：准确称取1.00g火麻油，加入8～12mL乙腈溶液，涡旋振荡50～70s。在本专利技术的一种实施方式中，所述吸附是将萃取后的液体按2.5～3.5mL：20～30mg的比例加入氧化铝，震荡50～70s后离心2～4min。在本专利技术的一种实施方式中，所述氮吹是用N2将液体吹干。在本专利技术的一种实施方式中，所述复溶是加入三苄胺-正己烷混合物将氮吹后的物质进行复溶。在本专利技术的一种实施方式中，所述三苄胺-正己烷混合物浓度为30μg三苄胺/mL正己烷。在本专利技术的一种实施方式中，所述过滤是用0.22μm有机滤膜进行过滤。在本专利技术的一种实施方式中，所述前处理包括以下步骤：(1)称取1.0g火麻油于50mL离心管中，加入8～12mL乙腈溶液进行萃取，涡旋振荡混匀，静置；(2)将步骤(1)中装有火麻油及乙腈溶液的离心管水平于-30～-10℃静置110～130min；(3)将步骤(2)中静置分层后的上层溶液移至装有20～30mg中性氧化铝的离心管中，20～25℃下震荡50～70s，离心；(4)将步骤(3)中离心后的上清液转移至离心管中，在N2下吹干至无乙腈溶液残留，加入0.5mL内标溶液(30μg三苄胺/mL正己烷)溶解；(5)将步骤(4)中得到的样品液经0.22μm有机滤膜转移到进样瓶中。本专利技术的第二个目的是提供一种火麻油中四氢大麻酚的检测方法，所述方法包括如下步骤：(1)应用所述前处理方法对火麻油进行前处理；(2)按每2.5～3.5mL萃取液吹干后加入0.5mL的比例加入内标溶液；(3)，气相色谱检测。在本专利技术的一种实施方式中，所述检测条件如下：采用HP-5(30m×0.32mm×0.25μm)色谱柱：升温程序：80℃保持1min，以30℃/min速率升至230℃，再以5℃/min的速率升至280℃，保持10min；进样口温度：250℃，检测器温度：300℃；载气为氮气，流速1.2mL/min；进样量：1μL；分流比：10：1。本专利技术还提供所述前处理方法在含四氢大麻酚及其衍生物的产品检测方面的应用。有益效果：本专利技术在火麻油中四氢大麻酚检测的前处理方法简化了前处理步骤，并可有效去除火麻油中甘油三酯及色素等干扰成分，提取液中基质共提取物的含量降至1.90mg/mL，基质共提取物去除率达81.5％，四氢大麻酚的相对标准偏差为1.8％～4.7％，同时具有操作简单、节约溶剂、节能环保等优点，产生的废弃溶液不到10mL、前处理用时短，前处理后的样品满足检测的要求。具体实施方式2014气相色谱仪，日本岛津公司；中性氧化铝，100～200目，武汉伟琪博星生物科技有限公司。试剂：三苄胺，百灵威科技有限公司；乙腈，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；标准物质：四氢大麻酚的甲醇标准溶液，均为1mg/mL，美国Sigma公司。实施例1(1)前处理：准确称取1.0g(精确至0.01g)火麻油于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋振荡混匀60s，静置。将离心管在-20℃冰箱中水平放置120min后，将3mL上层溶液移至含有30mg中性氧化铝的15mL离心管中，震荡60s，在4000rpm的条件下离心3.0min，取2mL上清液于N2下吹干，用0.5mL内标(30μg三苄胺/mL正己烷)溶液溶解。所得溶液即为分析溶液，经0.22μm聚四氟乙烯的滤膜过滤后，样品液待测定，测得样品液中基质共提取物质量为1.90mg/mL，重复性RSD为1.25％。(2)样品的检测：将不同梯度的标准溶液分别注入气相色谱中，以内标法进行定量分析，即以四氢大麻酚与内标物质的色谱峰面积之比对四氢大麻酚浓度进行回归分析，得到标准曲线。在相同的条件下将样品提取液注入气相色谱进行测定，测得样品液中四氢大麻酚与内标物的色谱峰面积之比，带入标准曲线，得到样品液中四氢大麻酚含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中四氢大麻酚的含量。其中色谱条件为：色谱柱：HP-5(30m×0.32mm×0.25μm)；升温程序：80℃保持1min，以30℃/min速率升至230℃，再以5℃/min的速率升至280℃，保持10min；进样口温度：250℃，检测器温度：300℃；载气为氮气，流速1.2mL/min；进样量：1μL；分流比：10：1。以四氢大麻酚与内标物质的色谱峰面积之比对四氢大麻酚浓度进行回归分析，得到标准曲线：y＝(0.0225±7.51e-5.0)x+(0.0089±0.0094)，相关系数为0.9975。选取火麻油样品，分别添加30、60、90μg/g浓度水平的四氢大麻酚标准溶液，并按照上述处理步骤进行残留量测定，将测定浓度与四氢大麻酚理论添加浓度进行比较，得到四氢大麻酚添加回收率，每个添加水平平行测定6次，得其相对标准偏差。四氢大麻酚回收率92.3％～94.9％，相对标准偏差为1.8％～4.7％。以3倍信噪比(S/N)对应的样品中目标物浓度作为检出限，以10倍信噪比(S/N)对应的样品中目标物浓度作为定量限，四氢大麻酚的检出限为0.72μg/mL。实施例2准确称取1.0g(精确至0.01g)火麻油于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋振荡混匀60s，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种火麻油中四氢大麻酚检测的前处理方法，其特征在于，依次包括如下步骤：萃取、冷冻处理、吸附除杂、氮吹、复溶和过滤；所述萃取是以有机溶剂萃取；所述冷冻处理是在‑10～30℃冷冻60～240min；所述吸附除杂是以氧化铝为除杂剂，按照20～30mg氧化铝/g火麻油的量向火麻油中加入氧化铝进行除杂吸附。

【技术特征摘要】
1.一种火麻油中四氢大麻酚检测的前处理方法，其特征在于，依次包括如下步骤：萃取、冷冻处理、吸附除杂、氮吹、复溶和过滤；所述萃取是以有机溶剂萃取；所述冷冻处理是在-10～30℃冷冻60～240min；所述吸附除杂是以氧化铝为除杂剂，按照20～30mg氧化铝/g火麻油的量向火麻油中加入氧化铝进行除杂吸附。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述萃取是以乙腈为萃取溶剂，按1g火麻油：8～12mL乙腈的比例加入乙腈，在20～25℃条件下涡旋振荡50～70s。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，向萃取后的液体中加入氧化铝，震荡50～70s。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，用N2将吸附除杂后的液体吹干。5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，加入三苄胺-正己烷混合物将氮吹后的物质复溶。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述三苄胺-正己烷混合物浓度为20～30μg三苄胺...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘元法，刘天毅，李进伟，王远鹏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32