人体蛋白CD2上糖链的甘露八糖的简易合成制造技术

本发明专利技术涉及生物体内起重要生物学作用的甘露八糖α－Ｄ－甘露糖－（１→２）－α－Ｄ－甘露糖－（１→３）－｛α－Ｄ－甘露糖－（１→２）－α－Ｄ－甘露糖－（１→３）－［－α－Ｄ－甘露糖－（１→２）－α－Ｄ－甘露糖－（１→６）］－α－Ｄ－甘露糖－（１→６）｝－ａ－Ｄ－甘露糖的简便化学合成法。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于有生物活性的寡糖的制备领域，特别是涉及能用于药物筛选的寡糖的合成方法。人体重要的，有防卫作用的蛋白CD2含有与天冬酰胺连接的寡糖链，具有如下的结构 这个寡糖由八个甘露糖分子与两个乙酰氨基葡萄糖分子组成，研究表明这个寡糖链对蛋白CD2的生物功能非常重要，去掉糖链的蛋白CD2不再具有黏附和抗体的功能(见M.A.Recny，等J.Biol.Chem.1992，267，22428-22434；A.R.N.Arulanandam，等Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1993，90，11613-11620).因此糖链的结构对蛋白的功能影响很大。以上结构式的括弧中所示的即是这个甘露八糖，制备这个甘露八糖对研究整个糖链至关重要，且这个甘露八糖本身就可能具有重要的生物活性，本专利将首次报道它的简明制备。其特点是用部分保护的糖为受体，通过高区选糖基化的方法来制备。本专利技术的合成方法在于以1，2-乙叉基-β-D-甘露糖苷(1)，3，4，6-三-O-苯甲酰基-1，2-O-烯丙氧基乙叉基-β-D-甘露糖(7)，4，6-O-苄叉基-α-D-甘露糖烯丙基苷(9)为起始物进行甘露八糖的简易合成。以甘露糖苷1为糖基受体，以α1→2连接的甘露双糖三氯乙酰亚胺酯2为糖基供体，一步法缩合成3，6位连接的甘露五糖3，脱掉乙叉基再乙酰化，选择性地脱掉1位乙酰基然后用三氯乙睛活化即得到五糖供体4。如下反应式所示 Bz＝苯甲酰基，Ac＝乙酰基α1→2连接的甘露双糖三氯乙酰亚胺酯的糖基供体2由甘露糖原酸酯7缩合，得到α1→2连接的甘露双糖8，脱掉烯丙基后再用三氯乙睛活化1位即得到2，而糖的原酸酯7由乙酰基溴代甘露糖5制备，如下反应式所示 Bz＝苯甲酰基，Ac＝乙酰基All＝烯丙基使4，6-O-苄叉基-α-D-甘露糖烯丙基苷与双糖供体2缩合，选择性地得到3位连接的三糖，将三糖的苄叉基水解，即得到4，6位为游离羟基的三糖受体，如下反应式所示 五糖供体4与三糖受体12选择性地在12的6位缩合，得到保护的八糖13，用碱脱掉乙酰基即得到八糖15，如下反应式所示 下面结合实施例对本专利技术进行详细的说明。(1)保护的甘露核心五糖3的合成将1，2乙叉基甘露糖1(1.03克，5毫摩尔)，α1→2连接的甘露双糖三氯乙酰亚胺酯的糖基供体2(11.5克，10毫摩尔)溶于100毫升二氯甲烷中，冷却至-10℃，在搅拌下加入三甲基硅三氟甲磺酸酯100微升，然后使反应物自然升温到室温，五小时后加200微升三乙胺结束反应，减压下蒸掉溶剂，柱层析分离后得中间物3(16.5克，77％)。m.p141-144℃；D-11.5°(c1.1，CHCl3)；1H NMRδ 7.98-7.25(m，60H，Bz-H)，5.67(dd，1H，J 3.0Hz，J 1.7Hz)，5.64(dd，1H，J 3.1Hz，J 1.7Hz)，5.53(s，1H)，5.26(q，1H，CH3-CH)，5.20(s，1H)，5.12(d，1H，J 1.6Hz)，5.08(d，1H，J 1.7Hz)，5.05(d，1H，J 1.7Hz)，2.01(s，3H，CH3CO)，2.00(s，3H，CH3CO)，1.50(d，3H，CH3-CH).(2)甘露五糖供体4的合成将保护的甘露核心五糖3(2186毫克，1毫摩尔)溶于10毫升90％的三氟乙酸中，在室温下搅拌，用TLC(乙酸乙酯/石油醚1/1)监测反应，反应完成后减压下蒸掉溶剂，柱层析分离后得中间物，将此中间物溶于10毫升吡啶中，加入乙酸酐5毫升，五小时后反应完成，减压下蒸掉溶剂，两步反应后得到的全酰化的产品2201毫克，收率94％，将此产品(2244毫克，1毫摩尔)溶于二氯甲烷(20毫升)中，加入CCl3CN(0.1毫升，1毫摩尔)及DBU(14微升，0.1毫摩尔)反应混合物搅拌2小时后完成，浓缩混合物，用柱层析法精制(2/1石油醚/乙酸乙酯)，得到结晶的五糖供体4(2150毫克，90％)M.p.135-137℃； (c＝1.3 in CHCl3)；1H NMR δ＝(400MHz，CDCl3，25℃，TMS)9.03，8.10-7.26，6.35，6.05，5.96，5.91，5.88，5.85，5.80，5.74，5.68-5.66，5.64，5.45，5.43，5.17，5.09，4.61-4.43，4.33，4.30，4.22-4.18，3.89-3.84，3.59-3.56，2.26，2.10，2.02，2.00；元素分析计算值(％)C124H108O42NCl3C 62.30，H 4.52；实测值 C 62.45，H 4.40.(3)3，4，6-三-O-苯甲酰基-β-D-甘露糖1，2-烯丙基原酸酯(7)将2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-甘露糖溴(8.22克，20毫摩尔)加入到烯丙醇(40mL)中，在搅拌下加入2，4-二甲基吡啶(2.3毫升，20毫摩尔)，反应在室温下进行，用TLC检测(1∶1石油醚/乙酸乙酯)。反应完成后，减压下浓缩，残余物悬浮于无水甲醇中MeOH(20毫升)，加入甲醇钠的甲醇溶液(2摩尔，0.4毫升)，混合物搅拌过夜，反应完成。将反应液减压浓缩，残余物用柱层析分离，得到粉末状6(4.72克，90％)。将6溶于吡啶(30毫升)中，在搅拌下滴加苯甲酰氯(8.2毫升，70毫摩尔)。三小时后反应完成，用常规方法对反应液进行后处理，用柱层析(3/1石油醚/乙酸乙酯)精制。得到结晶的化合物7(10.33克，～100％)。(4)2-O-乙酰基-3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖烯丙基苷(8)化合物7在高真空下干燥二小时，然后溶于二氯甲烷(80毫升)中，在-42℃氮气保护下滴加TMSOTf(100微升)，2小时后，TLC(3/1石油醚/乙酸乙酯)指示反应完成。用三乙胺中和，减压浓缩，柱层析精制得到固体的8(6.72克，66％).m.p 148-150℃；D+3.0°(c 1.3，CHCl3)；1HNMR δ 8.07-7.33，5.99，5.90-5.85，5.70，5.28-5.18，5.16，5.11，4.61-4.47，4.39-4.36，4.15-4.13，3.95-3.92，2.03.计算值C59H52O18C，67.56；H，4.96实测值C，67.60；H，4.92.(5)2-O-乙酰基-3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖三氯乙酰亚胺酯(2)将化合物8(524毫克，0.5毫摩尔)加入到含乙酸钠(293毫克，3毫摩尔)的90％乙酸(10毫升)中，再加入PdCl2(89毫克，0.5毫摩尔)，混合物在室温下搅拌12小时，TLC(2/1石油醚/乙酸乙酯)指示反应完成，用二氯甲烷(30毫升)稀释，用水、饱和碳酸氢纳溶液洗涤，减压浓缩有机相，用柱层析精制，得到2-O-乙酰基-3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖(456毫克)，将其溶于二氯甲烷(20毫升)中，加入CCl3CN(0.1毫升，2毫摩尔)及本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以１，２－乙叉基－β－Ｄ－甘露糖苷（１），３，４，６－三－Ｏ－苯甲酰基－１，２－Ｏ－烯丙氧基乙叉基－β－Ｄ－甘露糖（７），４，６－Ｏ－苄叉基－α－Ｄ－甘露糖烯丙基苷（９）为起始物的简易甘露八糖合成法。其特征在于：以甘露糖苷１为糖基受 体，以α１→２连接的甘露双糖三氯乙酰亚胺酯２为糖基供体，一步法缩合成３，６位连接的甘露五糖３，脱掉乙叉基再乙酰化，选择性地脱掉１位乙酰基然后用三氯乙睛活化即得到五糖供体４。如下反应式所示：＊＊＊Ｂｚ＝苯甲酰基，Ａｃ＝乙酰基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孔繁祚，朱玉亮，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]