本发明专利技术涉及Ｐ６Ａ相关序列的保护中间体化合物以及脱保护产物的化合物，涉及将脱保护产物的化合物与咔啉羧酸的羧基偶联并脱保护生成相应的拟肽，以及将脱保护产物的化合物与咔啉羧酸的仲氨基偶联并脱保护生成相应的拟肽；涉及它们的制备方法，以及进一步涉及它们在医学中的应用，例如作为溶血栓剂的应用。本发明专利技术的化合物表现了较强的溶栓活性。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
,它们的合成及在医学上的应用的制作方法
本专利技术涉及P6A相关序列的保护中间体化合物以及脱保护产物的化合物，涉及将脱保护产物的化合物与咔啉羧酸的羧基偶联并脱保护生成相应的拟肽，以及将脱保护产物的化合物与咔啉羧酸的仲氨基偶联并脱保护生成相应的拟肽；涉及它们的制备方法，以及进一步涉及它们在医学中的应用，例如作为溶血栓剂的应用。本专利技术按图2所示的路线采用正交策略从Boc保护的L-氨基酸出发采用液相方法逐步接肽，制得通式(2)的保护寡肽中间体。其中Boc-AA3OH共同为OBzl或AA3为Ala残基。本专利技术按图3所示的路线在HF的作用下将通式(1)的化合物脱保护得通式(3)的化合物；在HCl的作用下将通式(1)的化合物脱保护得通式(4)的化合物；在NaOH的作用下将通式(1)的化合物脱保护得通式(5)的化合物。其中AA1和AA2的定义同附图说明图1，AA1’和AA2’共同为H；或AA1’为A，G，Q，K，R，N，或AA2’为Arg残基；或AA1’为H，AA2’为Arg残基。如图4所示，将通式(4)的化合物与N-Boc-咔啉羧酸的羧基缩合，缩合产物经HF脱保护得通式(6)的化合物。其中AA1和AA2的定义同图1，AA1’和AA2’共同为H；或AA1’为A，G，Q，K，R，N，或AA2’为Arg残基；或AA1’为H，AA2’为Arg残基。如图5所示，将通式(5)的化合物与咔啉羧酸苄酯的氨基缩合，缩合产物经HF脱保护得通式(7)的化合物。其中AA1和AA2的定义同图1，AA1’和AA2’共同为H；或AA1’为A，G，Q，K，R，N，或AA2’为Arg残基；或AA1’为H，AA2’为Arg残基。本专利技术按图6所示的路线在HF的作用下将通式(2)的化合物脱保护得通式(8)的化合物；在HCl的作用下将通式(2)的化合物脱保护得通式(9)的化合物；在NaOH的作用下将通式(2)的化合物脱保护得通式(10)的化合物。其中AA3的定义同图2，AA3为Ala残基或AA3缺失。如图7所示，将通式(9)的化合物与N-Boc-咔啉羧酸的羧基缩合，缩合产物经HF脱保护得通式(11)的化合物。其中AA3的定义同图2，AA3为Ala残基或AA3缺失。如图8所示，将通式(10)的化合物与咔啉羧酸苄酯的氨基缩合，缩合产物经HF脱保护得通式(12)的化合物。其中AA3的定义同图2，AA3为Ala残基或AA3缺失。图2是P6A代谢产物的合成路线。图3是P6A相关系列的保护多肽脱Boc、皂化，以及脱保护。图4是通式(4)的保护多肽与N-Boc-咔啉羧酸偶联、脱保护。图5是通式(5)的保护多肽与咔啉羧酸苄酯偶联、脱保护。图6是P6A代谢产物的保护多肽脱Boc、皂化，以及脱保护。图7是通式(9)的保护多肽与N-Boc-咔啉羧酸偶联、脱保护。图8是通式(10)的保护多肽与咔啉羧酸苄酯偶联、脱保护。本专利技术采用大鼠动静脉旁路模型评价了通式(3)，(6)，(7)，(8)，(11)和(12)的化合物的溶血栓活性。结果表明，本专利技术提供的拟肽不仅具有优秀的溶栓作用，而且这种溶栓作用有明确的结构依赖性。为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。在化学实施例中，使用的保护氨基酸均为L构型，中间体和产物的纯度以TLC确认，FAB-MS用英国VG公司生产的ZAB-MS型高分辨GC/MS/DS联用仪测定。电喷雾质谱由美国HP公司生产的ES-5989X型质谱仪测定。旋光用Schmidt+Haensch公司生产的旋光仪(Polartronic D型)测定。熔点用显微熔点仪测定，温度计未校正。层析用硅胶由青岛海洋化工厂生产。Sephadex购自Sigma公司。实施例1.Boc-Lys(ClZ)-OBzl的制备160mg(0.491mmol)Cs2CO3溶于蒸馏水，加入到400mg(0.966mmol)Boc-Lys(ClZ)-OH的无水乙醇溶液中，40min后减压除去溶剂，残留物置干燥器过夜，得白色固体，该固体溶于无水DMF，滴加0.112ml(0.98mmol)溴苄，于50℃搅拌16hr后，滤除CsBr沉淀，滤液减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解后，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液、5％硫酸氢钾水溶液洗涤。分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩，得标题化合物480mg(98.5％)，为无色油状物。实施例2.HCl·Lys(ClZ)-OBzl的制备100mg(0.2mmol)Boc-Lys(ClZ)-OBzl溶于3ml 4mol/L无水氯化氢/乙酸乙酯溶液，室温搅拌，20min后有白色沉淀生成，2hr后TLC(氯仿/甲醇，40/1)显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解，并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水乙醚研磨，抽去乙醚，得白色固体，该固体用石油醚(60-90℃)浸泡，倾去石油醚，如此反复数次后抽干得标题化合物，直接用于下一步反应。实施例3.Boc-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制备38mg(0.2mmol)Boc-Ala-OH溶于3ml无水THF中，冰浴下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和45mg(0.22mmol)DCC。混合33min后待用。将88mg(0.2mmol)HCI·Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应4hr，TLC(氯仿/甲醇，30/1)显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液、5％硫酸氢钾水溶液洗涤。分出的有机层用无水硫酸镁干燥。过滤，滤液在37℃减压浓缩至干，得到标题化合物112mg(98％)，mp94-96℃，FAB-MS(m/e)5 75+，475+。实施例4.HCl·Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制备115mg(0.2mmol)Boc-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于4ml 4mol/L无水氯化氯/乙酸乙酯溶液，室温搅拌，2hr后TLC(氯仿/甲醇，30/1)显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水乙醚研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。实施例5.Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制备280mg(1.3mmol)Boc-Pro-OH溶于30ml无水THF中，冰浴下加入170mg(1.26mmol)N-羟基苯并三氮唑和270mg(1.31mmol)DCC，混合30min后待用。将657mg(1.28mmol)HCI.Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应6hr，TLC(氯仿/甲醇，20/1)显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液、5％硫酸氢钾水溶液洗涤，分出的有本文档来自技高网...
【技术保护点】
通式（１）、（３）、（４）和（５）的Ｐ６Ａ相关序列多肽，是通过液相法逐步接肽，或者进一步脱保护制得： Ｂｏｃ－ＡＡ↓［１］－ＡＡ↓［２］－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（ＣｌＺ）－ＯＢｚｌ （１） Ｈ－ＡＡ↓［１］’－ＡＡ↓［２］’－Ｐｒｏ－Ａｌａ－ＬｙｓＯＨ （３） ＨＣｌ.ＡＡ↓［１］－ＡＡ↓［２］－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（ＣｌＺ）－ＯＢｚｌ （４） Ｂｏｃ－ＡＡ↓［１］－ＡＡ↓［２］－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（ＣｌＺ）ＯＨ （５） 其中ＡＡ↓［１］和ＡＡ↓［２］共同为Ｈ，或ＡＡ↓［１］为Ａ、Ｇ、Ｑ、Ｋ、Ｎ或Ｒ，ＡＡ↓［２］为Ａｒｇ（Ｔｏｓ）残基；ＡＡ↓［１］’和ＡＡ↓［２］’共同为Ｈ；或ＡＡ↓［１］’为Ａ、Ｇ、Ｑ、Ｋ、Ｒ或Ｎ，ＡＡ↓［２］为Ａｒｇ残基；或ＡＡ↓［１］’为Ｈ，ＡＡ↓［２］’为Ａｒｇ残基。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，王超，吴艳芬，
申请(专利权)人：广州白云山制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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