一种含有式Ⅰ的氨基酸序列的ＧＬＰ－２肽 Ｈｉｓ－Ｘ↑［２］－Ｘ↑［３］－Ｇｌｙ－Ｘ↑［５］－Ｐｈｅ－Ｘ↑［７］－Ｘ↑［８］－Ｘ↑［９］－Ｘ↑［１０］－Ｘ↑［１１］－Ｘ↑［１２］－Ｘ↑［１３］－Ｘ↑［１４］－Ｘ↑［１５］－Ｘ↑［１６］－Ｘ↑［１７］－Ｘ↑［１８］－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｘ↑［２１］－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｘ↑［２４］－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ｘ↑［２８］－Ｔｈｒ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ｘ↑［３３］ （式Ⅰ） 或其片段；其中Ｘ↑［２］是Ａｌａ，Ｖａｌ或Ｇｌｙ；Ｘ↑［３］是Ａｓｐ或Ｇｌｕ；Ｘ↑［５］是Ｓｅｒ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［７］是Ｓｅｒ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［８］是Ａｓｐ，Ｇｌｕ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［９］是Ａｓｐ，Ｇｌｕ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［１０］是Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ或正亮氨酸；Ｘ↑［１１］是Ａｓｎ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［１２］是Ｔｈｒ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［１３］是Ｉｌｅ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［１４］是Ｌｅｕ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［１５］是Ａｓｐ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［１６］是Ａｓｎ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［１７］是Ｌｅｕ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［１８］是Ａｌａ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［２１］是Ａｓｐ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［２４］是Ａｓｎ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［２８］是Ｇｌｎ或Ｌｙｓ；Ｘ↑［３３］是Ａｓｐ，Ｇｌｕ或Ｌｙｓ。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新人胰高血糖素样肽-2(GLP-2)肽及其衍生物，其具有延长的作用曲线。本专利技术还涉及制备和利用所述GLP-2肽和衍生物，以及编码所述GLP-2肽的多核苷酸构建体和含有并表达GLP-2肽的宿主细胞的方法，药物组合物，用于制备所述制剂的方法，用途及治疗方法。
技术介绍
胰高血糖素肽-2(GLP-2)是在肠L-细胞中产生的33个氨基酸残基的肽，在营养物摄入后释放。人GLP-2肽的氨基酸序列见附图说明图1。GLP-2肽是胰高血糖素原基因的产物。胰高血糖素原主要在胰腺和肠中表达，且在一定程度上在位于脑中的特定神经元中表达。然而，胰高血糖素原在胰腺和肠中的翻译后加工并不相同(图2)。在胰腺中，胰高血糖素原主要被加工成高血糖素相关胰腺多肽(GRPP)、胰高血糖素和主要胰高血糖素原片段。相反，在肠中的加工得到肠高血糖素、胰高血糖素样肽1(GLP-1)和胰高血糖素样肽2(GLP-2)。GLP-2肽在种间相当保守，尽管存在序列差异(图3)。例如，猪GLP-2肽与人GLP-2相比具有4个替换。有意思的是，小鼠的GLP-2与人GLP-2相比仅有两个替换。GLP-2从小肠和大肠的L细胞中分泌。分泌由营养物摄入调控。正常饥饿受试者中GLP-2的血浆浓度是约15pM，在混合饮食后增加至约60pM。GLP-2的作用由最近克隆的胰高血糖素样肽-2受体转导。GLP-2受体代表G蛋白偶联的7TM受体超家族的一个新成员。GLP-2R以高度组织特异性方式主要在胃肠道中表达(图4)，且GLP-2R的激活与增加的腺苷酸环化酶活性相偶联。表达GLP-2R的细胞应答于GLP-2，但是不应答于胰高血糖素家族的其他肽(胰高血糖素、GLP-1和GIP)。在大鼠中，GLP-2R业已报道在脑中，或更具体的，在丘脑背内侧核中表达。脑的该部分通常认为参与饲喂行为，且已经显示当直接注射入脑时，GLP-2抑制食物摄入。也证实了GLP-2对肠上皮增生的诱导(Drucker，D.J.等人，(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 937911-7916)，并公开了通过在含有GLP-2的培养基中生长的细胞冶疗胃肠道疾病(Drucker，D.J和Keneford，J.R.，WO 96/32414)。WO 97/31943涉及GLP-2肽类似物以及某些GLP-2肽类似物用于食欲抑制或饱满诱导的用途。WO 98/08872涉及GLP-2衍生物，其包含亲脂性取代基。WO 96/32414和WO 97/39031涉及特定的GLP-2肽类似物。WO 98/03547涉及特定的GLP-2肽类似物，其显示拮抗剂活性。虽然多数注意都集中在GLP-2化合物的药理学性质，对其理化性质和溶液结构性质知之甚少。这类知识是在例如制备、纯化和制剂工作中合理处理的先决条件，对于理解其延长机制的结构基础尤其重要。对于许多蛋白质基的药物而言，由于内在的大分子不稳定性，在储存(货架期)中确保其较长的稳定性是重要的技术挑战。因为，与许多小分子不同，蛋白质对于物理和化学降解均敏感。化学降解涉及共价键，如水解、消旋、氧化或交联。物理降解涉及相对于天然结构的构象改变，其包括较高有序结构的丧失，聚集，沉淀或吸附至表面。已知GLP-2由于聚集而倾向于不稳定。上述两种降解途径可最终导致蛋白质药物的生物活性丧失。GLP-2与GLP-2类似物及其片段尤其在治疗胃肠道疾病中特别有用。但是，溶解度限制和相对于内源性二氨基肽酰肽酶的低稳定性限制了这类化合物的用途，因此，需要在该领域改善。在WO 99/43361中，公开了某些包含具有亲脂性取代基的GLP-2的药物组合物。在WO 01/49314中，公开了包含GLP-2或GLP-2类似物的药物组合物，其中所述GLP-2或GLP-2类似物在含有L-组氨酸和选自甘露醇和蔗糖的容积剂的生理溶液中，pH5.5-7.9。GLP-2肽及其衍生物在治疗胃肠道疾病中有用。但是，高清除率限制了这类化合物的用途，因此，在该领域需要改善。因此，本专利技术的一个目的是提供GLP-2肽及其衍生物，其具有相对于天然GLP-2而言延长的作用曲线，同时仍保持GLP-2活性。本专利技术的又一目的是提供一种含有本专利技术化合物的药物组合物，以及本专利技术化合物用于提供所述组合物的用途。此外，本专利技术的一个目的在于提供一种治疗胃肠道疾病的方法。专利技术概述业已显示本专利技术的GLP-2衍生物通过细胞增殖的刺激和调亡的抑制对小肠和大肠有营养性作用。本专利技术的GLP-2衍生物也可刺激肠细胞的葡萄糖转运，降低肠透过性，抑制胃排空和胃酸分泌。最广义的方面，本专利技术涉及GLP-2肽的衍生物。根据本专利技术的衍生物具有感兴趣的药理学性质，特别是其具有比亲本GLP-2肽延长的作用曲线。术语“亲本GLP-2肽”，如此处所用，是指GLP-2衍生物的氨基酸序列骨架。下面采用简单的体系描述GLP-2肽、其片段、类似物和衍生物。因此，例如R20K-GLP-2(1-31)是指GLP-2的片段，其从GLP-2衍生而来，方法是删除SEQ ID NO1的位置32和33的氨基酸残基，并用赖氨酸取代SEQ ID NO1位置20的天然存在的氨基酸残基精氨酸。类似的，R20K(Nε-十四烷酰基)/K30R-GLP-2(1-33)是指GLP-2肽类似物的衍生物，其从GLP-2衍生而来，方法是用精氨酸残基交换SEQ ID NO1位置30的天然存在的氨基酸残基赖氨酸，用赖氨酸残基交换SEQ IDNO1位置20的天然存在的氨基酸残基精氨酸，且将相对于SEQ IDNO1.氨基酸序列的位置20的赖氨酸残基的ε-氨基十四烷酰基化。类似的，L17K(3-(十六烷酰基氨基)丙酰基)/K30R-GLP-2(1-33)是指GLP-2肽类似物的衍生物，其从GLP-2衍生而来，方法是用精氨酸残基交换SEQ ID NO1位置30的天然存在的氨基酸残基赖氨酸，用赖氨酸残基交换SEQ ID NO1位置17的天然存在的氨基酸残基亮氨酸，和将相对于SEQ ID NO1.氨基酸序列的位置17的赖氨酸残基的ε-氨基通过间隔基β-丙氨酸的方式十六烷酰基化(图5和6)。在第一方面，本专利技术涉及GLP-2肽，其含有式I的氨基酸序列；His-X2-X3-Gly-X5-Phe-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-Ala-Arg-X21-Phe-Ile-X24-Trp-Leu-Ile-X28-Thr-Arg-Ile-Thr-X33(式I)；或其片段；其中X2是Ala，Val或Gly；X3是Asp或Glu；X5是Ser或Lys；X7是Ser或Lys；X8是Asp，Glu或Lys；X9是Asp，Glu或Lys；X10是Met，Lys，Leu，Ile或正亮氨酸；X11是Asn或Lys；X12是Thr或Lys；X13是Ile或Lys；X14是Leu或Lys；X15是Asp或Lys；X16是Asn或Lys；X17是Leu或Lys；X18是Ala或Lys；X21是Asp或Lys；X24是Asn或Lys；X28是Gln或Lys；X33是Asp，Glu或Lys。在第二方面，本专利技术涉及编码GLP-2肽的多核苷酸构建体，所述GLP-2肽含有式I的氨基酸序列；His-X2-本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：L·蒂姆，S·邦，M·施莱因，N·C·卡尔肖尔姆，D·K·恩格伦德，A·S·尼尔森，N·L·约翰森，K·马森，M·曾德尔，P·蒂格森，
申请(专利权)人：诺沃挪第克公司，
类型：发明
国别省市：
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