GLP-1类似物制造技术

本发明专利技术提供了ＧＬＰ－１类似物，该类似物是ＧＬＰ－１的改构多肽，该多肽具有降低血糖作用，性质比母体ＧＬＰ－１高效、稳定，可用于治疗Ⅱ型糖尿病。另外，本发明专利技术还提供了制备上述多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及GLP-1类似物，具体地本专利技术涉及GLP-1改构多肽，该多肽具有降低血糖作用，性质比母体GLP-1高效、稳定，可用于治疗II型糖尿病。本专利技术还提供了通过化学合成和重组DNA生产工艺生产这些多肽的方法。
技术介绍
世界各国糖尿病患者人数逐年增多，现在中国有4000万，印度6000万，美国1800万，日本600万，糖尿病患者分为两种，一是胰岛素依赖型糖尿病(I型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(II糖尿病)。其中，II型糖尿病占糖尿病患者的90％以上。II型糖尿病患者表现了许多特征，如餐后胰岛素分泌量不足，胰岛素分泌时间滞后，高血糖等。肥胖II型糖尿病患者周边细胞胰岛素受体敏感性降低，因而产生血糖高，血液中胰岛素水平也高的情况，糖化血红蛋白，HbAlc在8％以上(正常为4～6％)。接着就会产生糖尿病并发症，如心脏病及肾功能衰竭等。如今，控制糖尿病的有6类药物●促胰岛素分泌类磺酰脲类，melitioneds类●非胰岛素促分泌药物胰岛素，α-葡萄糖苷酶抑制剂，双胍类及Thioagolinediones。根据英国UKPDS对数千名II型糖尿病患者的6年跟踪研究报告指出上述6类药物对II型糖尿病患者皆无能为力，不能遏制胰脏β-细胞的不断进行性的恶化，不能降低HbAlc水平，也不能阻止糖尿病的并发症如心脏病、肾衰竭。因此需要研究新的II型糖尿病治疗药物。1985年发现了一种肠激素GLP-1(7-36)-NH2，其是小肠L-细胞分泌的一种多肽，能促进胰岛素分泌，降低血糖。外源给予GLP-1能使II型糖尿病患者的血糖水平正常化(Diabetes Care(1992)15，270-276；Lancet(2002)359，824-830；Endoer.Rev(1996)16，390-410；Diabetologia(1985)28，565-573)。GLP-1具有下列功能●能促进胰岛素原的合成，促胰岛素分泌，降低血糖●改善β-细胞功能，增加β-细胞量●增加周边细胞胰岛素受体的敏感性●降低HbAlc(Diabetes(2002)51，1443-1452；Diabetologia(2002)45，1263-73；Diabetes 525-529(2001)；Diabetes(2001)50，725；Diabetes(2003)52，365-371；Recent Prog.Hormne Res.(2001)56，377-399；Disbetologia(1996)39，1546-1553；Am.J.Physicl Endocrinol.Metab.(2001)281，E242-247；J.Clin.Endocrinology and Metabolism(2003)88，3082-3089；Diabetes(2002)Diabetes Care(2002)22403-408(United KingdomProspective Diabetes Study)(UKPDS Reports 57)；N.Engl.J.Med，UKPDS Reports；Diabetes Care(2000)2364-69；Lancet(2002)152072-2077；Diabetes S12796-2803；U.S.patent 477967，478017，478425；Diabetes Care(1999)22403-408；J.Clin.Endocrinology andMetabolism(2003)883082-3089；Diabetes(1995)44，1295；RestoregenReport July 5，2001)。另外，GLP-1在脑神经细胞中也存在受体，GLP-1通过脑屏障进入脑中与受体结合GLP-1，对老年痴呆症(Alzheimer’s disease)有疗效，使促糊精状β-多肽(Amyloid-β-peptide)含量降低，并能修饰其前体-糊精蛋白前体(Amyloid Protein Precursor，APP)，特别是GLP-1，Exendin4能保护神经原细胞不被氧化剂或谷氨酸作用而凋亡(J.Pharmaceology & Experimental Therapeutics(2002)302881-888；J.Nearosa Res.(2003)72603-612；J.Biol.Chem.(2003)278471-478；J.Alzheimer’s Disease(2002)487-496)。GLP-1对减肥也起重要作用(J.Nutr.(2003)1332326-2330；Inter.J.Obesity(2001)25781-792；J.Chin.Invest.(1998)101515-520；Eur.J.Pharmacology(2002)440269-279)。在血液中，GLP-1受二肽酶(DPPIV)的作用切除N-端二肽而迅速分解，因此很多人都研究能抵抗二肽酶降解的其改变结构(美国专利No.5118,666；PCT/US 87101005；WO 87/06941；WO 90/11296；PCT/US 89101121)。1、修饰GLP-1(7-36)的C-端和分子中的氨基酸残基GLP-1(7-36)是由人的小肠L-细胞分泌的多肽，其结构为H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg。由于GLP-1在血液中受二肽酶(DPPIV)作用迅速降解为GLP-1(9-36)，失去降糖作用，因此为了延长GLP-1的半衰期(t1/2)，世界上很多实验室开展多方面的研究，一种是研究DPPIV的抑制剂如NN2211，有的置换GLP-1分子中的氨基酸残基，如Gly8-GLP-1(7-36)，可以抵抗DDPPIV的降解，但Gly8-GLP-1(7-36)的促胰岛素分泌和降血糖作用比母体GLP-1大为降低，有的将GLP-1(7-37)的AA8置换成D-型氨基酸，如，Ala8-GLP-1，或AA9-GLP-1，结果促胰岛素分泌作用都远远低于母体GLP-1(7-36)。另外，还有将GLP-1的C-端加上6个Lys残基，即GLP-1(7-36)-(Lys)6。还有的将Gly8-GLP-1(7-36)的C-端加上Exendin4的C-端的Ex4(31-33)，Ex4(31-36)和Ex4(31-39)，其中，GLP-1端加Ex4C的9个氨基酸残基的，Gly8-GLP-1(7-36)Ex4-(31-39)恢复到母体GLP-1活性水平能抵抗DPPIV的降解作用。这样GLP-1(7-36)由30个氨基酸残基变成39个与Exendin4肽链长度相同(J.Chin.Endocrinol.Melab.(1995)80952-957；Trend in Pharmacilogical Sci.(2003)24377-383；RegulatoryPeptides(2003)114153-158；WO 03/011892 A2，本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＧＬＰ－１类似物，其具有如下结构式：ＨＸ↓［１］ＦＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＬＡＷＬＶＫＧＰＰＳＸ↓［２］Ｘ↓［１］＝Ａｌａ或Ｇｌｙ，Ｘ↓［２］＝Ａｒｇ－ＯＨ，ＯＨ或ＮＨ↓［２］。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙玉琨，张培璋，周波，
申请(专利权)人：上海华谊生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]