包含EpCAM特异构建体的药物组合物制造技术

本发明专利技术提供了包含双特异性单链抗体构建体的药物组合物。所述双特异性单链抗体构建体特征为包含或由至少两个结构域组成，其中所述至少两个结构域之一特异性结合人ＥｐＣＡＭ并包含至少一个含有氨基酸序列ＮＸＤ抗原的ＣＤＲ－Ｈ３区，并且第二个结构域结合人ＣＤ３抗原。本发明专利技术进一步提供了产生本发明专利技术药物组合物的方法，预防、治疗或缓解肿瘤疾病的方法以及所公开的双特异性单链抗体构建体用于预防、治疗或缓解肿瘤疾病的用途和相应方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含双特异性单链抗体构建体的药物组合物。所述双特异性单链抗体构建体特征为包括至少2个结构域或者由至少2个结构域组成，其中所述至少2个结构域之一特异结合至人EpCAM抗原并包含至少一个包含氨基酸序列NXD的CDR-H3区，并且第二个结构域结合至人CD3抗原。本专利技术还提供了生产本专利技术药物组合物的方法，预防、治疗或缓解肿瘤疾病的方法以及所公开的双特异性单链抗体构建体的用途和相应的预防、治疗或缓解肿瘤疾病的方法。整个本说明书引用了各种文件。所述文件公开的内容引入本文作为参考。上皮细胞粘附分子(EpCAM，也称为17-1A抗原、KSA、EGP40、GA733-2、ks1-4或esa)是314个氨基酸的40-kDa膜整合糖蛋白，在某些上皮和一些人类癌瘤中特异性表达(综述于Balzar，J.Mol.Med.1999，77，699-712)。发现了EpCAM并且随后通过其被鼠单克隆抗体17-1A/edrecolomab所识别对其进行了克隆(Goettlinger，Int J Cancer.1986；38，47-53和Simon，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1990；87，2755-2759)。通过用人结肠癌细胞免疫小鼠产生了单克隆抗体17-1A(Koprowski，SomaticCell Genet.1979，5，957-971)。EpCAM的EGF-样重复区显示在同嗜性细胞粘附中介导旁相互作用和交互作用(Balzar，Mol.Cell.Biol.2001，21，2570-2580)并且，因为该原因，EpCAM主要定位于上皮细胞之间(Litvinov，J Cell Biol.1997，139，1337-1348，Balzar，J Mol Med.1999，77，699-712和Trebak，J Biol Chem.2001，276，2299-2309)。EpCAM以定向和高度有序的方式起作用粘附上皮细胞(Litvinov，J Cell Biol.1997，139，1337-1348)。来自使用在其上皮表达人EpCAM的转基因小鼠和大鼠的实验的数据显示正常组织中的EpCAM可能无论如何都不能接近全身施用的抗体(McLaughlin，Cancer Immunol.Immunother.，1999，48，303-311)。一旦上皮细胞恶性转化，快速生长的肿瘤细胞将废弃上皮的高度细胞有序性。结果，EpCAM的表面分布变得较少受约束并且分子更多暴露于肿瘤细胞上。由于其上皮细胞的来源，绝大多数癌瘤的肿瘤细胞仍然在其表面表达EpCAM。在体内，EpCAM的表达与增加的上皮增生相关并负相关于细胞分化(综述见Balzar，1999，J.Mol.Med.77，699-712)。如使用抗-EpCAM单克隆抗体通过免疫组织化学检测，EpCAM的表达基本上见于全部主要癌瘤(综述于Balzar，J Mol Med.1999，77，699-712)。使用非小细胞肺癌(DeBree，Nucl Med Commun.1994，15，613-27)和前列腺癌(Zhang，ClinCancer Res.1998，4，295-302)观察到最好的EpCAM表达，在那里100％肿瘤患者样本显示阳性EpCAM染色。在这些研究中，还报道了均匀染色的肿瘤组织，表明该抗原表达于给定肿瘤的大部分细胞上。由于其广泛表达，EpCAM称为“泛癌瘤”抗原。在不同研究中已经显示EpCAM在多种癌瘤的诊断和治疗中是有益的。此外，在一些例子中，观察到肿瘤细胞比其亲代上皮细胞或更低侵袭形式的所述癌瘤更高程度表达EpCAM。例如，显示EpCAM的表达在瘤组织上和腺癌中显著高于正常前列腺上皮细胞(n＝76；p＜0.0001)，表明增加的EpCAM表达代表前列腺癌发育中的早期事件(Poczatek，J Urol.，1999，162，1462-1644)。另外，在大多数子宫颈鳞状细胞癌和腺癌中强EpCAM表达与增加的增殖和终末分化标志物的消失相关(Litvinov，Am.J.Pathol.1996，148，865-75)。一个例子是乳腺癌，其中EpCAM在肿瘤细胞上的过表达是存活预测器(Gastl，Lancet.2000，356，1981-1982)。而且，EpCAM已经描述为在患有头部、颈部和肺部鳞状细胞癌的患者中检测弥散肿瘤细胞的标志物(Chaubal，Anticancer Res 1999，19，2237-2242，Piyathilake，HumPathol.2000，31，482-487)。如在真皮、口腔、会厌、咽、喉和食管中发现的那样，正常鳞状上皮细胞不显著表达EpCAM(Quak，Hybridoma，1990，9，377-387)。除了上述癌瘤外，EpCAM已经显示表达于大多数原发的、转移的和弥散的NSCLC(非小细胞肺癌细胞)上(Passlick，Int J Cancer，2000，87，548-552)，胃和胃-食管连接处腺癌上(Martin，J Clin Pathol 1999，52，701-4)和来源于结肠直肠癌、胰腺癌和乳腺癌的细胞系中(Szala，Proc Natl AcadSci USA 1990，87，3542-6，Packeisen，Hybridoma，1999，18，37-40)。临床试验已经显示直接针对17-1A(EpCAM)的抗体用于治疗外科手术完全切除结肠直肠癌瘤的患者的用途导致关于总存活率和远端转移频率的显著有利性(Riethmller，Lancet，1994，343，1177-1183)。发现鼠抗EpCAM单克隆抗体可降低患有轻微后遗症的患者的5-年死亡率(Riethmller，Lancet，1994，343，1177-1183)或7-年死亡率(Riethmller，Proceedings of the American Society of Clinical Oncology，1996，15，444)。识别EpCAM的鼠单克隆抗体的例子是Edrecolomab(Panorex)(Koprowski，Somatic Cell Genet.1979，5，957-971和Herlyn，Cancer Res.，1980，40，717-721)。然而，结肠癌佐剂免疫治疗期间首次施用Panorex导致韦格纳氏肉芽肿的形成和恶化，这表明mAb 17-1A应谨慎地应用于患有自身免疫性疾病的患者(Franz，Onkologie，2000，23，472-474)。Panorex的局限性是快速形成人抗小鼠抗体(HAMA)，这限制了通过其鼠IgG2a Fc段与人免疫效应机制相互作用的能力并且在循环中呈现短半寿期(Frodin，Cancer Res.，1990，50，4866-4871)。此外，一旦在患者中重复注射，鼠抗体引起立即型变态反应和过敏反应(Riethmller，Lancet.1994，343，1177-1183，Riethmller，J Clin Oncol.，1998，16，1788-1794和Mellstedt，Annals New York Academy of Sciences.2000，91本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含双特异性单链抗体构建体的药物组合物，其中所述构建体包含或由至少两个结构域组成，其中所述结构域之一结合人ＥｐＣＡＭ抗原并且第二个结构域结合人ＣＤ３抗原，其中对ＥｐＣＡＭ特异的所述结合结构域包含至少一个ＣＤＲ－Ｈ３区，ＣＤＲ－Ｈ３区优选地在ＳＥＱＩＤＮＯ：８０，８８和９６的１０２－１０４位置或者优选地在ＳＥＱＩＤＮＯ：８４和９２的１０６－１０８位置包含氨基酸序列ＮＸＤ，其中Ｘ是芳香族氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：P库弗，M贝里，S奥夫纳，K布里施魏因，A沃尔夫，T劳姆，B科勒伊森，U伦凯里许茨，P博伊尔勒，
申请(专利权)人：麦克罗梅特股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[]