对ＨＥＲ２具有结合亲和力的多肽制造技术

本发明专利技术提供了一种多肽，该多肽具有ＨＥＲ２亲和结合力，并与葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）的一个结构域相关，即该多肽的序列对应于ＳＰＡ结构域序列，但具有１到大约２０个取代突变。本发明专利技术还提供了编码该多肽的核酸，以及表达该多肽的表达载体及宿主细胞。本发明专利技术还提供了该多肽作为一种药物和一种靶向试剂引导与其缀合的物质至过表达ＨＥＲ２的细胞的用途。本发明专利技术还提供了该多肽的使用方法及用于实施该方法的试剂盒，该方法及试剂盒都基于所述多肽与ＨＥＲ２的结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种结合人表皮生长受体因子2(以下称为HER2)的新多肽。该多肽与葡萄球菌A蛋白(SPA)的一个结构域相关，其中该多肽的序列对应于SPA结构域的序列，具有至少一个取代突变。本专利技术也涉及这种HER2结合多肽作为一种药物的应用，更特别地涉及其在制备一种治疗以过表达HER2为特征的癌症的药物中的用途。
技术介绍
Affibody分子该分子与Z蛋白有关，来源于葡萄球菌A蛋白(SPA)的B结构域(Nilsson B et al(1987)Protein Engineering 1，107-133)，是通过使用不同的相互作用靶分子从该类分子的随机文库中选择出来的(参见WO95/19374；WO00/63243；Nord K et al(1995)Prot Eng 8601-608；Nord K et al(1997)Nature Biotechnology 15，772-777)。不同的靶分子被用来选择Z蛋白的衍生物，例如Nord K et al所述(1997，如上)。该论文描述的实验概述了针对给定靶选择Z蛋白衍生物的普通技术原理，而不是为了获得用于特殊的治疗和生物技术用途的具有足够高亲和力的分子这一明确的目的。HER2及其在癌症疾病中的作用HER2原癌基因编码一个185kD的细胞表面受体蛋白，被称为HER2蛋白或受体(Hynes NE et al(1994)Biochim Biophys Acta1198165-184)。该基因有时也被称为neu、HER2/neu或c-erbB-2。neu最早在被乙基亚硝基尿处理过的大鼠中发现，并且表现出该基因的突变类型(Shih C et al(1981)Nature 290261-264)。这种neu的突变类型能够产生一种具有组成型活性形式的受体，并且形成一种能够在低拷贝数下转化细胞的强力癌基因(Hynes NE et al，如上)。正常细胞在其质膜上以组织特异形式表达少量的HER2蛋白。目前还没有已知的HER2配体被阐明，但是HER2可以和在与配体形成复合体的HER1(表皮生长因子受体，EGFR)、HER3和HER4形成异源二聚体。这种异源二聚体的形成导致激活的HER2受体将生长信号从胞外传到核，从而控制正常细胞的生长和分裂(Sundaresan S et al(1999)Curr Oncol Rep 116-22)。在肿瘤细胞中，DNA复制系统的错误可导致在一条染色体上的一个基因出现多个拷贝，这种现象也称为基因扩增(geneamplification)。HER2基因的扩增导致这种基因转录的增加。这提高了HER2的mRNA的水平，并伴随着HER2蛋白合成的增加，导致HER2蛋白在这些肿瘤细胞表面过表达。这种过表达可以导致HER2蛋白质水平比临近的正常细胞高10-100倍。这进而导致细胞分裂增加并伴随更高速的细胞生长。HER2基因扩增也暗示正常细胞向癌症表型的转化(Hynes NE et al，如上；Sundaresan S et al如上)。HER2蛋白的过表达被认为能导致HER2同源二聚体的形成，进而导致形成组成型活性受体(Sliwkowski MX et al(1999)Semin Oncol26(4 Suppl 12)60-70)。在这种情况下，在不存在配体时，生长促进信号不停的传送到细胞中。结果，多种胞间信号传导途径被激活，导致无法控制的细胞生长，并且在某些情况下导致致癌性转化(HynesNE et al，如上)。因此，由生长因子受体介导的信号转导机制对于抑制细胞复制和肿瘤生长而言是重要的靶。乳腺癌是美国妇女中最普遍的恶性肿瘤，在2001年就有192200个新病例出现(Greenlee R et al(2001)CA Cancer J Clin 5115-36)。在大约25％的乳腺癌患者中，由于HER2基因扩增导致HER2基因的过表达(Slamon DJ et al(1989)Science 244707-712)。HER2蛋白的过表达与一些不利预后变数有关，包括雌激素受体阴性状态、高S期比例(S phase fraction)、阳性淋巴结状态(positive nodal status)、突变的p53及高核分级(high nuclear grade)(Sjogren S et al(1998)J Clin Oncol 16(2)462-469)。根据Slamon et al(如上)的报道，发现HER2基因的扩增与无疾病存活期的缩短和阳性淋巴结患者的总体存活期的缩短有很大的相关性。基于以上原因，进一步研究HER2在乳腺癌发病机理和治疗中的作用不尽是现在，以后也仍将是一个重要的目标。与HER2相互作用的分子的鉴定也成为上述努力的一部分。临床前体外研究研究了抑制HER2活性是否会影响肿瘤细胞的生长。与用对照单克隆抗体治疗相比，用一种鼠抗HER2单克隆抗体4D5治疗过表达HER2蛋白的SK-BR-3型乳腺癌细胞确实能抑制肿瘤细胞增殖。将4D5施用给携带过表达HER2的人乳腺癌和卵巢癌的小鼠(异种移植)延长了它们的无肿瘤存活时间。类似的研究也证实了抗HER2单克隆抗体能够抑制小鼠体内人胃癌细胞异种移植物的生长(Pietras RJ et al(1994)Oncogene 91829-1838)。在用抗体抑制大量存在于肿瘤细胞表面的HER2蛋白的方法中，近年来有一种治疗方法开始商业应用。因此，单克隆抗体4D5或trastuzumab为这一目的已经被Hoffman-La Roche和Genentech以Herceptin的商品名市场化。尽管用抗体治疗特征在于过表达HER2蛋白的癌症具有明显的优势，但是一些因素也是潜在地能够降低抗体的效能(参见例如ReillyRM et al(1995)Clin Pharmacokinet 28126-142)。这包括(1)限制抗体穿透大的实体瘤或者进入致命区域，如脑；(2)降低由于血管透性降低而导致的抗体在靶位点的外渗；(3)抗体的交叉反应和抗体对正常组织的非特异性结合，降低了靶向效果；(4)异质肿瘤的吸收产生未治疗区；(5)注入的抗体代谢提高，降低了治疗效果；及(6)HAMA和人抗人抗体的迅速形成，使治疗性抗体失活。此外，毒素效应已经成为发展针对癌症的治疗性抗体的主要障碍(Carter P(2001)Nat Rev Cancer 1118-129；Goldenberg DM(2002)J Nucl Med 43693-713；Reichert JM(2002)Curr Opin Mol Ther 4110-118)。与健康组织的交叉反应可导致非缀合(裸露)抗体的实质性副作用，这种副作用在抗体与毒素或放射性同位素缀合时可能会被加强。免疫介导的并发症包括来源于肺部毒素效应的呼吸困难，偶发性中枢和外周神经系统并发症，及肝和肾功能降低。偶然情况下，可以观察到无法预期的毒性并发症，如与HER2靶向抗体trastuzumab(Herceptin)相关的心脏毒素效应(Schneider JW et al(2002)SeminOncol 29(3 suppl 11)22-28)。用同位素缀合抗体进行放射性免疫治疗也会导本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽，其对ＨＥＲ２具有结合亲和力，且与葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）的一个结构域相关，所述多肽的序列对应于ＳＰＡ结构域的序列，但具有１至约２０个取代突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：约根卡尔松，斯特凡斯托尔，托弗埃里克松，埃琳贡内里乌松，弗雷德里克尼尔松，
申请(专利权)人：阿菲博迪公司，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]