用于检测与严重的急性呼吸综合征(SARS)相关的冠状病毒的肽及其混合物制造技术

本发明专利技术涉及用于检测人和动物的与严重急性呼吸综合征相关的冠状病毒（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）感染的新肽及其混合物。因此，本发明专利技术提供ＳＡＲＳ－ＣｏＶ诊断方法和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及有效用于检测人和动物的与严重的急性呼吸综合征相关的冠状病毒(SARS-CoV)感染的新肽及其混合物。
技术介绍
SARS，一种未知病原学的非典型肺炎，在2003年2月末被世界卫生组织(World Health Organization)认可。在2003年4月，世界范围内的科学家证实了以前未被认识的冠状病毒(SARS-CoV)可能是SARS的起因(Drosten et al.，2003；Ksiazek et al，2003；Peiris et al，2003)。迄今为止，已开发的对于SARS-CoV的血清学诊断测试极少(Drostenet al.，2003；Ksiazek et al，2003；Peiris et al，2003)。首选引入的是间接免疫荧光测定(IFA)(Drosten et al.，2003；Ksiazek et al，2003；Peiris et al，2003)，紧随其后的是ELISA(Ksiazek et al，2003；Peiris et al，2003)。所述IFAs都基于SARS-感染细胞的固定，随后的人抗-SARS抗体的结合和用荧光抗-人抗体对它们进行的标记。开始的ELISA基于使用全病毒裂解物(WVL)，即从组织培养物中富集的病毒的制备物。然而，如已在其它病毒中经历过的，全病毒裂解物纯度的缺乏通常导致测定中的更高背景水平，因为直接针对全病毒裂解物的污染物的抗体也将被捕获。这种纯度的缺乏减少了测定的敏感性并将检测不到许多显示低抗-SARS-CoV抗体水平的患者。因为相同的原因，这些全病毒裂解物分析的特异性也是不能接受得低。将具有高抗体水平的患者检测为SARS-阳性病例，所述抗体直接针对全病毒裂解物制备物的污染物。事实上，由于现存文献的首先应用，大量公开物已经报道了合成肽和重组蛋白质对于抗-SARS-CoV抗体的特异性检测的有效性(Ho et al.，2004；；Wang et al，2003；Wu et al.，2004)。因此，存在对于开发诊断SARS-CoV感染的更敏感和更特异的测试的明确需要。专利技术简述本专利技术涉及用于开发SARS-CoV诊断方法和试剂盒的特异性SARS-CoV肽及其混合物。更精确地，本专利技术的一个目标是提供一种分离的肽及其类似物，所述肽包括选自由SEQ ID NOS1-4，6-16，18-22，24-33，35-41，43-62，64-73，75-77，79-81，83-100，102-105，107-113，115-118，120-127和129-140组成的组中的氨基酸序列。本专利技术的另一个目标是提供具有式a--X--c--Z--b的分离的肽及其类似物，其中X和Z具有的氨基酸序列与独立地选自由下列组成的组中的氨基酸序列具有85％同一性SEQ ID NOS1-4，6-16，18-22，24-33，35-41，43-62，64-73，75-77，79-81，83-100，102-105，107-113，115-118，120-127和129-140，并且其中a是有效促进肽的偶联或增加肽的免疫原性或抗原活性或促进与支持基质的附着的氨基端，1-8个氨基酸或取代物；b是有效促进肽的偶联或增加肽的免疫原性或抗原活性或促进与支持基质的附着的羧基端，1-8个氨基酸或取代物；和c是有效促进串联排列的两个肽的偶联或提高串联的肽的免疫原性或抗原活性或促进与支持基质的附着的一个或两个氨基酸或取代物的接头。本专利技术的另一个目标涉及包括如上所述的至少两种肽或其类似物的混合物。另一个目标涉及特异性结合于本专利技术的肽或其类似物的抗体或特异性结合于肽的抗体的混合物或特异性结合于如上所述的肽的混合物的抗体的混合物。本专利技术的另一个目标是提供检测指示SARS-CoV的抗体的存在或缺乏的体外诊断方法，所述抗体结合于按照本专利技术的肽或其类似物以形成免疫复合物，所述方法包括如下步骤a)使按照本专利技术的肽或其类似物与生物样品接触一段时间并在足够形成免疫复合物的条件下；和b)检测在a)中形成的免疫复合物的存在或缺乏。本专利技术的另一个目标是提供一种用于检测指示SARS-CoV的抗体的存在或缺乏的诊断试剂盒，所述试剂盒包括-按照本专利技术的肽或其类似物；和-检测肽-抗体免疫复合物的试剂；其中所述肽或其类似物和试剂以足够进行所述检测的量存在。本专利技术的另一个目标是提供检测指示SARS-CoV的肽或蛋白质的存在或缺乏的体外诊断方法，所述肽或蛋白质结合于按照本专利技术的抗体以形成免疫复合物，所述方法包括如下步骤a)使按照本专利技术的抗体与生物样品接触一段时间并在足够形成免疫复合物的条件下；和b)检测在a)中形成的免疫复合物的存在或缺乏。本专利技术的另一个目标是提供一种用于检测指示SARS-CoV的肽或蛋白质的存在或缺乏的诊断试剂盒，所述试剂盒包括-按照本专利技术的抗体；和-检测肽-抗体免疫复合物的试剂；其中所述抗体和试剂以足够进行所述检测的量存在。本专利技术的肽及其混合物对于筛选SARS-CoV感染的血液和体液是有用的。例如，本文描述的肽及其混合物在用于检测针对SARS-CoV的抗体的广泛多种的特异性结合测定以及作为用于激发检测SARS-CoV抗原的抗体的免疫原是有用的。附图简述附图说明图1描述基于由BCCA基因组科学中心(BCCA Genome SciencesCenter)在2003年4月13日提供的序列(Protein ID NP_828858.1；422AA)的推定SARS-CoV的核壳体(N)蛋白质的Kyle-Doolittle分析(亲水性图)和Jameson-Wolf(抗原指数)和Emini(表面或然率)图谱。图2显示本专利技术预期的肽的氨基酸序列，并将其鉴定为SEQ ID NOS1-140。专利技术详述本专利技术提供对应于SARS-CoV的推定的刺突(S)，核壳体(N)和基质(M)基因产物的免疫显性区域的新肽及其类似物。本专利技术还提供这些肽和类似物的混合物和化学组合(串联排列)。如将在下面的描述中所解释的，这些肽、类似物、混合物和串联排列在关于SARS-CoV及由其造成的感染的广泛多种的诊断方法和试剂盒中是有用的。本专利技术的肽优选地在对SARS-CoV蛋白质分析的基础上进行选择，如图1所示以预测亲水图(Kyle-Doolittle)，表面或然率图(Emini)和抗原指数(Jameson-Wolf)的3个公式进行所述分析。对于这三个参数显示阳性指数的氨基酸的区域具有作为免疫原并随后形成可用于检测抗-SARS-CoV抗体的线性表位的良好或然率。分析下列SARS-CoV蛋白质S(刺突；NP_828851.1)，N(核壳体；NP_828858.1)，M(基质；NP_828855.1)，E(小包膜；NP_828854.1)，NSP1(非结构蛋白1；NP_828862.1)NSP2(NP_828863.1)，NSP3(NP_828864.1)，NSP4(NP_828865.1)，NSP5(NP_828866.1)，NSP6(NP_828867.1)，NSP7(NP_828868.1)，NSP9(NP_828869.1)，NSP10(NP_828870.1)，NSP11(NP_828871.1)，NSP12(NP_828872.1)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的肽，所述肽包括选自ＳＥＱＩＤＮＯＳ：１－４，６－１６，１８－２２，２４－３３，３５－４１，４３－６２，６４－７３，７５－７７，７９－８１，８３－１００，１０２－１０５，１０７－１１３，１１５－１１８，１２０－１２７和１２９ －１４０的氨基酸序列，及其类似物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M霍德，JM拉克鲁瓦，
申请(专利权)人：亚特斯公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]