一种SARS病毒DNA疫苗pVPS2制造技术

本发明专利技术涉及医药生物工程技术领域，是一种用于预防严重急性呼吸道综合征的ＳＡＲＳ病毒ＤＮＡ疫苗ｐＶＰＳ２。它由ＳＡＲＳ病毒Ｓ蛋白抗原决定簇编码序列与纤溶酶原激活剂ＴＰＡ的信号肽编码序列组成的分泌型Ｓ蛋白抗原决定簇编码序列Ｓ２－Ｐ，插入真核表达载体所构成。该重组质粒转化感受态大肠杆菌ＤＨ５α就成ｐＶＰＳ２工程菌，可用于制备疫苗ｐＶＰＳ２。由于其表达的抗原蛋白能分泌到细胞外，从而增强了体液免疫，起到更好的预防ＳＡＲＳ病毒感染的作用。本发明专利技术ＤＮＡ疫苗制备工艺简单，成本低廉，可在真核细胞中表达Ｓ２－Ｐ抗原并可激活淋巴细胞。故可作为预防严重急性呼吸道综合征的ＤＮＡ疫苗。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及医药生物工程
，是一种用于预防严重急性呼吸道综合征SARS病毒的DNA疫苗pVPS2。
技术介绍
世界卫生组织将严重急性呼吸道综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome；SARS)简称萨斯病，并确认是一种SARS病毒(SARS coronavirus)引起的传染性疾病。目前尚无针对SARS病毒的特效药，研制有效的预防性疫苗势在必行。DNA疫苗，是近年兴起的新型疫苗，具有抗体效价维持时间长和交叉保护效果好等优点。此外DNA疫苗还具有以下突出优点(1)能诱发体液及细胞全方位免疫应答，起到预防作用；(2)免疫保护时间长；(3)生产工艺简单、成本低廉、稳定性好且贮运方便。
技术实现思路
本专利技术提供一种SARS病毒DNA疫苗pVPS2，可用于预防人严重急性呼吸道综合征。其作用机理为将SARS病毒表面抗原S2抗原编码序列插入真核表达载体，将其注射于肌肉组织，使其在肌细胞中表达病毒表面抗原，经过抗原提呈过程，可激活体内的体液免疫系统和细胞免疫系统。激活的体液免疫系统可产生特异的抗体，消除游离在血液中的病毒，预防SARS病毒的入侵；而激活的细胞免疫系统可产生细胞毒淋巴细胞(CTL)，攻击已被感染的细胞，消除隐藏的SARS病毒。目前已知，S蛋白是存在于SARS病毒表面的糖蛋白，参与病毒入侵细胞时的受体结合、细胞融合，是病毒的主要抗原。已知的SARS病毒CUHK-W1(GENEBANKnumberAY278554)、HKU-39849(GENEBANK numberAY278491)、BJ01(GENEBANKnumberAY278488)、BJ02(GENEBANK numberAY278487)、BJ03(GENEBANK numberAY278490)、BJ04(GENEBANK numberAY279354)、GZ01(GENEBANK numberAY278489)等株中的基因具有极高的同源性。它们的S基因基本结构为全长3768bp，编码1255个氨基酸的成熟蛋白。本专利技术选择S蛋白中的部分编码序列S2作为插入的外源DNA序列，其结构为TCTACTGAATGTGCTAATTTGCTTCTCCAATATGGTAGCTTTTGCACACAACTAAATCGTGCACTCTCAGGTATTGCTGCTGAACAGGATCGCAACACACGTGAAGTGTTCGCTCAAGTCAAACAAATGTACAAAACCCCAACTTTGAAATATTTTGGTGGTTTTAATTTTTCACAAATATTACCTGACCCTCTAAAGCCAACTAAGAGGTCTTTTATTGAGGACTTGCTCTTTAATAAGGTGACACTCGCTGATGCTGGCTTCATGAAGCAATATGGCGAATGCCTAGGTGATATTAATGCTAGAGATCTCATTTGTGCGCAGAAGTTCAATGGACTTACAGTGTTGCCACCTCTGCTCACTGATGATATGATTGCTGCCTACACTGCTGCTCTAGTTAGTGGTACTGCCACTGCTGGATGGACATTTGGTGCTGGCGCTGCTCTTCAAATACCTTTTGCTATGCAAATGGCATATAGGTTCAATGGCATTGGAGTTACCCAAAATGTTCTCTATGAGAACCAAAAACAAATCGCCAACCAATTTAACAAGGCGATTAGTCAAATTCAAGAATCACTTACAACAACATCAACTGCATTGGGCAAGCTGCAAGACGTTGTTAACCAGAATGCTCAAGCATTAAACACACTTGTTAAACAACTTAGCTCTAATTTTGGTGCAATTTCAAGTGTGCTAAATGATATCCTTTCGCGACTTGATAAAGTCGAGGCGGAGGTACAAATTGACAGGTTAATTACAGGCAGACTTCAAAGCCTTCAAACCTATGTAACACAACAACTAATCAGGGCTGCTGAAATCAGGGCTTCTGCTAATCTTGCTGCTACTAAAATGTCTGAGTGTGTTCTTGGACAATCAAAAAGAGTTGACTTTTGTGGAAAGGGCTACCACCTTATGTCCTTCCCACAAGCAGCCCCGCATGGTGTTGTCTTCCTACATGTCACGTATGTGCCATCCCAGGAGAGGAACTTCACCACAGCGCCAGCAATTTGTCATGAAGGCAAAGCATACTTCCCTCGTGAAGGTGTTTTTGTGTTTAATGGCACTTCTTGGTTTATTACACAGAGGAACTTCTTTTCTCCACAAATAATTACTACAGACAATACATTTGTCTCAGGAAATTGTGATGTCGTTATTGGCATCATTAACAACACAGTTTATGATCCTCTGCAACCTGAGCTTGACTCATTCAAAGAAGAGCTGGACAAGTACTTCAAAAATCATACATCACCAGATGTTGATCTTGGCGACATTTCAGGCATTAACGCTTCTGTCGTCAACATTCAAAAAGAAATTGACCGCCTCAATGAGGTCGCTAAAAATTTAAATGAATCACTCATTGACCTTCAAGAATTGGGAAAATAA鉴于人TPA(纤溶酶原激活剂)的信号肽具有将蛋白质前体搬运到细胞膜，之后信号肽被切割，成熟蛋白就分泌到细胞外的功能，故将其接在S2编码序列前端，所组成的SARS病毒分泌型S蛋白抗原决定簇编码序列简称为S2-P，其表达的抗原蛋白能分泌到细胞外从而大大提高体液免疫，起到更好的预防病毒感染的作用。本专利技术SARS病毒DNA疫苗pVPS2的制备方法如下1.人工合成SARS病毒分泌型S2蛋白抗原决定簇编码序列S2-P(见核苷酸序列表1)a)序列特征长度1509bp类型核酸链数双链几何结构线性b)分子类型DNA c)来源人工合成d)序列描述分泌型S蛋白抗原决定簇编码序列S2-P ATGGATGCAATGAAGAGAGGGCTCTGCTGTGTGCTGCTGCTGTGTGGAGCAGTCTTCGTTTCGCCCAGCCAGGAAATCCATGCCCGATTCAGAAGAGGAGCCAGATCTGAATTCTCTACTGAATGTGCTAATTTGCTTCTCCAATATGGTAGCTTTTGCACACAACTAAATCGTGCACTCTCAGGTATTGCTGCTGAACAGGATCGCAACACACGTGAAGTGTTCGCTCAAGTCAAACAAATGTACAAAACCCCAACTTTGAAATATTTTGGTGGTTTTAATTTTTCACAAATATTACCTGACCCTCTAAAGCCAACTAAGAGGTCTTTTATTGAGGACTTGCTCTTTAATAAGGTGACACTCGCTGATGCTGGCTTCATGAAGCAATATGGCGAATGCCTAGGTGATATTAATGCTAGAGATCTCATTT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＳＡＲＳ病毒ＤＮＡ疫苗ｐＶＰＳ２，其特征在于由分泌型Ｓ蛋白抗原决定簇编码序列Ｓ２－Ｐ和真核表达载体构成，Ｓ２－Ｐ的核苷酸序列如下：ＡＡＧＣＴＴＡＴＧＧＡＴＧＣＡＡＴＧＡＡＧＡＧＡＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＴ ＧＧＡＧＣＡＧＴＣＴＴＣＧＴＴＴＣＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＡＡＴＣＣＡＴＧＣＣＣＧＡＴＴＣＡＧＡＡＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＡＴＴＣＴＣＴＡＣＴＧＡＡＴＧＴＧＣＴＡＡＴＴＴＧＣＴＴＣＴＣＣＡＡＴＡＴＧＧＴＡＧＣＴＴＴＴＧＣＡＣ ＡＣＡＡＣＴＡＡＡＴＣＧＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＧＧＴＡＴＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＧＡＴＣＧＣＡＡＣＡＣＡＣＧＴＧＡＡＧＴＧＴＴＣＧＣＴＣＡＡＧＴＣＡＡＡＣＡＡＡＴＧＴＡＣＡＡＡＡＣＣＣＣＡＡＣＴＴＴＧＡＡＡＴＡＴＴＴＴＧＧＴＧＧＴＴＴＴ ＡＡＴＴＴＴＴＣＡＣＡＡＡＴＡＴＴＡＣＣＴＧＡＣＣＣＴＣＴＡＡＡＧＣＣＡＡＣＴＡＡＧＡＧＧＴＣＴＴＴＴＡＴＴＧＡＧＧＡＣＴＴＧＣＴＣＴＴＴＡＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣＡＣＴＣＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＧＣＴＴＣＡＴＧＡＡＧＣＡＡＴＡＴＧＧＣＧＡ ＡＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＡＴＡＴＴＡＡＴＧＣＴＡＧＡＧＡＴＣＴＣＡＴＴＴＧＴＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＧＧＡＣＴＴＡＣＡＧＴＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＡＴＧＡＴＴＧＣＴＧＣＣＴＡＣＡＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＡＧＴＴ ＡＧＴＧＧＴＡＣＴＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＣＴＧＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＡＣＣＴＴＴＴＧＣＴＡＴＧＣＡＡＡＴＧＧＣＡＴＡＴＡＧＧＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡＴＴＧＧＡＧＴＴＡＣＣＣＡＡＡＡＴＧＴＴＣＴＣＴＡ ＴＧＡＧＡＡＣＣＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＣＧＣＣＡＡＣＣＡＡＴＴＴＡＡＣＡＡＧＧＣＧＡＴＴＡＧＴＣＡＡＡＴＴＣＡＡＧＡＡＴＣＡＣＴＴＡＣＡＡＣＡＡＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＴＴＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＣＧＴＴＧＴＴＡＡＣＣＡＧＡＡＴＧＣＴ ＣＡＡＧＣＡＴＴＡＡＡＣＡＣＡＣＴＴＧＴＴＡＡＡＣＡＡＣＴＴＡＧＣＴＣＴＡＡＴＴＴＴＧＧＴＧＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＴＧＴＧＣＴＡＡＡＴＧＡＴＡＴＣＣＴＴＴＣＧＣＧＡＣＴＴＧＡＴＡＡＡＧＴＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＴＡＣＡＡＡＴＴＧＡＣＡＧ ＧＴＴＡＡＴＴＡＣＡＧＧＣＡＧＡＣＴＴＣＡＡＡＧＣＣＴＴＣＡＡＡＣＣＴＡＴＧＴＡＡＣＡＣＡＡＣＡＡＣＴＡＡＴＣＡＧＧＧＣＴＧＣ...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙树汉，郭瀛军，黄力，张术，王开宇，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]