含细胞自噬抑制剂的制剂及其在治疗气道粘液高分泌中的用途制造技术

本发明专利技术提供了含细胞自噬抑制剂的制剂及其用途。具体地，本发明专利技术提供细胞自噬抑制剂在用于制备治疗气道粘液高分泌制剂中的用途，以及含有细胞自噬抑制剂作为有效成分的制剂。本发明专利技术的实验表明，细胞自噬抑制剂可以显著地降低动物模型中粘液蛋白MUC5AC的表达，进而显著缓解气道粘液高分泌。

The use of preparations containing autophagy inhibitors and in the treatment of airway mucus hypersecretion in

The present invention provides formulations containing autophagy inhibitors and uses thereof. Specifically, the invention provides the autophagy inhibitor in preparation for therapeutic use of airway mucus hypersecretion in the preparation, and the preparations containing autophagy inhibitor as the active ingredient. The experiment of the invention indicates that autophagy inhibitors can significantly reduce the expression of MUC5AC mucin in animal models, and relieve the airway mucus hypersecretion.

【技术实现步骤摘要】
含细胞自噬抑制剂的制剂及其在治疗气道粘液高分泌中的用途
本专利技术设计药物领域，具体的涉及细胞自噬抑制剂的治疗气道粘液高分泌的制剂及其用途。
技术介绍
细胞自噬(autophagy)是机体一种重要的防御和保护机制。细胞可以通过自噬和溶酶体，消除、降解和消化受损、变性、衰老和失去功能的细胞器和变性蛋白质与核酸等生物大分子，为细胞的重建、再生和修复提供必须原料，实现细胞的再循环和再利用。从本义上讲，细胞自噬是机体保持内稳态和适应微环境改变的一种重要的自我调节和保护机制。然而，在某些特定的条件下，细胞器和各种生物大分子的过量消耗最终会导致细胞自噬死亡。因此，细胞自噬最终促进细胞存活还是死亡，将根据不同的细胞，不同的微环境，不同的诱导条件而异。最新的研究表明细胞自噬过程的分子机制至少与30种以上的“Atg”基因和蛋白相关。其中，Beclin1(BECN1,Atg6)能调控最初的双层膜结构的分离和形成，而在该双层膜结构捕获细胞器和生物大分子形成细胞自噬体的过程中，LC3B在Atg5-Atg12-Atg16等蛋白酶的作用下，被脂质化(lipidation)并被加成到细胞自噬体双层膜上。因而这些分子在自噬发生过程中起关键调控作用。气道粘液是一种脂质、糖复合物以及蛋白质的稀释溶液，粘液蛋白MUC5AC是气道粘液的主要成分之一。气道粘液高分泌是哮喘等慢性气道疾病的特征性病理生理改变，主要表现为杯状细胞化生和粘液产生增多。吸烟、过敏原以及其他外界刺激性因子均可引起肺内炎症细胞募集和炎症介质释放，激活多种信号通路和转录因子，促进MUC5AC等粘液蛋白的高表达。气道粘液高分泌是哮喘以及囊性肺纤维化等慢性气道疾病急性发作并加重的重要原因，但其调控的分子机制尚未明确。目前临床上对气道粘液高分泌尚缺乏有效的治疗手段。综上所述，本领域迫切需要开发有效治疗或缓解气道粘液高分泌的制剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够有效治疗或缓解气道粘液高分泌的制剂。在本专利技术的第一方面中，提供了一种细胞自噬抑制剂的用途，用于制备一制剂，所述制剂用于治疗气道粘液高分泌或用于抑制粘液蛋白的表达。在另一优选例中，所述的细胞自噬抑制剂选自下组：(i)巴弗洛霉素A1(BafilomycinA1)、氯喹(Chloroquine)、或其组合；(ii)特异性抑制自噬相关蛋白的表达和/或活性的拮抗剂；(iii)上述(i)和(ii)的任意组合。在另一优选例中，所述的拮抗剂包括iRNA、siRNA、shRNA、或其组合。在另一优选例中，所述的拮抗剂包括抗体。在另一优选例中，所述制剂为药物组合物、或食品组合物。在另一优选例中，所述组合物包含(a)细胞自噬抑制剂；和(b)药学上可接受的载体、或食品学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的制剂含有(1)巴弗洛霉素A1(BafilomycinA1)和/或氯喹(Chloroquine)以及(2)含有用于阻断细胞自噬的干扰RNA。在另一优选例中，所述干扰RNA选自下组：Beclin-1siRNA、LC3BsiRNA、ATG5siRNA、ATG12siRNA、或其组合。在另一优选例中，所述的粘液蛋白包括MUC5AC。在另一优选例中，所述的气道粘液高分泌由选自下组的因素所诱导的：烟雾、大气污染颗粒PM、和/或过敏原(如屋尘螨)。在另一优选例中，所述的气道为人或非人哺乳动物的气道。在本专利技术的第二方面，提供了一种用于治疗气道粘液高分泌的制剂，所述制剂包含(a)细胞自噬抑制剂，所述的细胞自噬抑制剂为巴弗洛霉素A1和氯喹；和(b)药学上可接受的载体、或食品学上可接受的载体。在另一优选例中，所述组合物中含有0.001-99wt％，较佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％的细胞自噬抑制剂，按组合物的总重量计。在另一优选例中，所述的制剂包括药物组合物、或食物组合物。在另一优选例中，所述的制剂还含有用于阻断细胞自噬的干扰RNA。在另一优选例中，所述干扰RNA选自下组：Beclin-1siRNA、LC3BsiRNA、ATG5siRNA、ATG12siRNA、或其组合。在本专利技术的第三方面，提供了一种非治疗性的、体外抑制粘液蛋白表达的方法，包括步骤：在细胞自噬抑制剂存在下，培养气道上皮细胞，从而抑制所述气道上皮细胞表达粘液蛋白。在另一优选例中，所述的粘液蛋白包括MUC5AC。在另一优选例中，所述的气道上皮细胞为人气道上皮细胞。在另一优选例中，所述细胞自噬抑制剂巴弗洛霉素A1(BafilomycinA1)和氯喹(Chloroquine)的浓度分别为10nM、10μM。在另一优选例中，所述的细胞自噬抑制剂选自下组：巴弗洛霉素A1(BafilomycinA1)、氯喹(Chloroquine)、或其组合在另一优选例中，所述的细胞自噬抑制剂为干扰RNA，其选自下组：Beclin-1siRNA、LC3BsiRNA、ATG5siRNA、ATG12siRNA、或其组合。在本专利技术的第四方面，提供了一种非治疗性的缓解气道粘液高分泌的方法，包括步骤：(a)给需要的对象施用细胞自噬抑制剂。在另一优选例中，所述的对象包括非人哺乳动物。在另一优选例中，所述的对象包括啮齿动物，如小鼠、大鼠。在另一优选例中，所述对象是经烟雾暴露诱导、大气污染颗粒PM诱导、或屋尘螨提取物诱导的动物模型。在另一优选例中，所述的方法还包括步骤：(b)检测所述对象中MUC5AC的mRNA表达、和/或免疫荧光检测MUC5AC。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了阻断HBE细胞中的细胞自噬可以显著降低香烟烟雾提取物诱导的MUC5AC表达。其中图1A显示了MUC5AC的mRNA表达。图1B显示了免疫荧光检测MUC5AC。图2显示了应用细胞自噬抑制剂可以显著降低香烟烟雾提取物诱导的MUC5AC表达。其中图2A显示了MUC5AC的mRNA表达。图2B显示了免疫荧光检测MUC5AC。图3显示了阻断HBE细胞中的细胞自噬可以显著降低大气污染颗粒PM诱导的MUC5AC表达。其中图3A显示了MUC5AC的mRNA表达。图3B显示了免疫荧光检测MUC5AC。图4显示了细胞自噬相关基因缺陷能有效缓解香烟烟雾暴露诱导的气道粘液高分泌。其中图4A和4C分别显示了LC3B小鼠和Beclin-1小鼠烟雾暴露后气道粘液分泌的代表性图片。图4B和4D分别显示了各组小鼠PAS染色的半定量分析结果。图5显示了细胞自噬相关基因缺陷可以显著降低PM干预诱导的气道粘液高分泌和MUC5AC表达。其中图5A显示了各组小鼠PM干预后气道粘液分泌的代表性图片。图5B显示了各组小鼠PAS染色的半定量分析结果。图5C显示了小鼠肺组织MUC5AC的mRNA表达水平。图6显示了细胞自噬相关基因缺陷可以显著降低HDM干预诱导的气道粘液高分泌。图6A显示了各组小鼠HDM干预后气道粘液分泌的代表性图片。图6B显示了各组小鼠PAS染色的半定量分析结果。各图中，“CTL”或“control”表示对照。具体实施方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现细胞自噬抑制剂能够非常有效地治疗气道粘液高分泌。实验表明，通本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞自噬抑制剂的用途，其特征在于，用于制备一制剂，所述制剂用于治疗气道粘液高分泌或用于抑制粘液蛋白的表达。

【技术特征摘要】
1.一种细胞自噬抑制剂的用途，其特征在于，用于制备一制剂，所述制剂用于治疗气道粘液高分泌或用于抑制粘液蛋白的表达。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的细胞自噬抑制剂选自下组：(i)巴弗洛霉素A1(BafilomycinA1)、氯喹(Chloroquine)、或其组合；(ii)特异性抑制自噬相关蛋白的表达和/或活性的拮抗剂；(iii)上述(i)和(ii)的任意组合。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的拮抗剂包括iRNA、siRNA、shRNA、或其组合。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述制剂为药物组合物、或食品组合物。5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的制剂含有(1)巴弗洛霉素A1(BafilomycinA1)和/或氯喹(Chloroquine)以及(2)含有用于阻断细胞自噬的干扰RNA。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志华，沈华浩，周杰森，李雯，吴银芳，赵昀，应颂敏，
申请(专利权)人：沈华浩，陈志华，周杰森，李雯，吴银芳，赵昀，应颂敏，
类型：发明
国别省市：浙江,33