一种无籽刺梨总黄酮及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供无籽刺梨总黄酮，无籽刺梨中总黄酮的制备方法及其在制备抗氧化、降血糖和降血脂的药物中的应用。本发明专利技术首次制备出无籽刺梨中的总黄酮，并首次利用体外化学评价法测评其抗氧化活性，并运用了斑马鱼为实验动物模型评价其降血糖和降血脂活性。实验研究表明，本发明专利技术制备出的无籽刺梨中的总黄酮具有很好的抗氧化活性和降血糖活性，且具有显著的降血脂作用。

A seedless Cili flavone and preparation method and application thereof

The invention provides an application of total flavonoids from seed Cili, drug preparation method of total flavonoids from seed in Cili and in the preparation of antioxidant, hypoglycemic and hypolipidemic. The present invention is prepared for the first time of total flavonoids from seed in Cili, and for the first time by in vitro chemical evaluation of its antioxidant activity evaluation method, and the use of zebrafish as animal model to evaluate the hypoglycemic and hypolipidemic activity. Experimental results show that the produced total flavonoids from seed in Cili has good antioxidant activity and hypoglycemic activity, and significant lipid-lowering effect.

【技术实现步骤摘要】
一种无籽刺梨总黄酮及其制备方法与应用
本专利技术属于药物
，具体涉及一种植物有效成分提取制备方法，更具体地，涉及一种无籽刺梨中总黄酮及其制备方法与其在制备抗氧化、降血糖和降血脂药物中的应用。
技术介绍
贵州省特有种无籽刺梨(RosasterilisS.D.Shi)与刺梨(R.roxburghiiTratt)同为蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa)多年生攀援小灌木，别名搭钩刺梨、光枝无籽刺梨和安顺金刺梨等。其果实口感清香爽口，酸甜适度，富含Vc及多种矿物营养元素，其鲜果的Vc含量高达1133mg/100g，比梨高377倍，比苹果高225倍，被誉为“新山珍”，鲜食加工均可。近年来，有关刺梨的化学成分和生物活性的研究报道较多，研究表明黄酮类化合物是刺梨的主要有效成分，具有提高免疫功能、延缓衰老、抗动脉粥样硬化、抗氧化、预防癌症、降血脂等生理活性。近年来，国内学者采用单因素试验或正交试验法，或结合微波辅助提取法和超声辅助提取法对刺梨黄酮提取工艺开展了一些研究，研究发现超声辅助提取法的提取效率明显优于其他传统提取方法。与传统的正交试验法相比较，响应面法作为一种工艺条件优化的有效设计分析方法，在食品、农业、医药和生物等领域得到了广泛应用。近年来高血糖、高血脂等已成为主要威胁我国人民生命健康的问题之一，人体代谢产生的自由基对机体机能造成的损伤，引发衰老、癌症等问题也越来越引起极大的重视。目前对无籽刺梨研究主要集中在其形态学与分类、繁殖、亲缘关系、光合生理、果实营养成分及挥发性成分等方面，而对无籽刺梨黄酮等有效成分的研究尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术存在的上述不足之处，提供一种以无籽刺梨为原料，经过优选工艺分离得到精制总黄酮的方法及其在制备抗氧化、降血糖和降血脂药物中的应用。本专利技术所述的无籽刺梨中的总黄酮具有抗氧化活性，可以用于抗氧化治疗，可应用于制备抗氧化药物；所述的无籽刺梨中的总黄酮具有降血糖和降血脂活性，可应用于制备降血糖药物及降血脂药物。为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术采取的技术方案为：本专利技术提供一种无籽刺梨总黄酮，其是通过以下方法制备所得到的：(1)将无籽刺梨果实洗净自然晾干后置于50℃烘箱烘干至恒重，粉碎过40目筛后备用；(2)取步骤(1)制备得到的无籽刺梨粉末，采用超声辅助提取工艺进行提取，收集提取液，合并，于50℃减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；(3)取步骤(2)制备得到的浓缩液，用色谱柱吸附，以蒸馏水洗脱去杂后，用乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经减压浓缩干燥，得到无籽刺梨总黄酮提取物。如所述的一种无籽刺梨总黄酮，其中无籽刺梨总黄酮提取物纯化后的总黄酮含量为116.21±0.05mg/g。如所述的一种无籽刺梨总黄酮，其中所述的超声辅助提取无籽刺梨总黄酮采用提取时间50‐70min、料液比1:20‐1:25、乙醇体积分数40％‐60％、提取次数3‐5次。本专利技术同时提供一种无籽刺梨总黄酮的制备方法，所述的制备方法包括下述步骤：(1)将无籽刺梨果实洗净自然晾干后置于50℃烘箱烘干至恒重，粉碎过40目筛后备用；(2)取步骤(1)制备得到的无籽刺梨粉末，采用超声辅助提取工艺进行提取，收集提取液，合并，于50℃减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；(3)取步骤(2)制备得到的浓缩液，用色谱柱吸附，以蒸馏水洗脱去杂后，用乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经减压浓缩干燥，得到无籽刺梨总黄酮提取物。如所述的一种无籽刺梨总黄酮的制备方法，其中通过单因素试验和采用响应面法分析优化无籽刺梨总黄酮超声辅助提取工艺，步骤(2)中超声辅助提取无籽刺梨总黄酮采用提取时间50‐70min、料液比1:20‐1:25、乙醇体积分数40％‐60％、提取次数3‐5次。如所述的一种无籽刺梨总黄酮的制备方法，其中步骤(3)所述的色谱柱为大孔树脂色谱柱，洗脱液为70％‐90％的乙醇。本专利技术另外还提供了一种无籽刺梨总黄酮在制备抗氧化药物、降血糖药物和降血脂药物中的应用。本专利技术通过单因素试验和采用响应面法分析优化无籽刺梨总黄酮超声辅助提取工艺，优选出步骤(2)中最佳的超声辅助提取无籽刺梨总黄酮的工艺为：提取时间50‐70min、料液比1:20‐1:25、乙醇体积分数40％‐60％、提取次数3‐5次，可最大程度上提取出无籽刺梨中的黄酮类化合物。作为优选方案，步骤(3)所述的色谱柱为大孔树脂色谱柱，同时，本专利技术通过大量实验优选出最佳体积浓度的乙醇洗脱液为70％‐90％的乙醇，采用该浓度的乙醇洗脱液，可最大程度上将黄酮类化合物洗脱，杂质少。本专利技术制备得到的无籽刺梨总黄酮具有很好的抗氧化活性和降血糖活性，且具有显著的降血脂作用，可用于制备抗氧化药物、降血糖药物及降血脂药物。与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：本专利技术所述的无籽刺梨总黄酮的制备方法简单，避免采取回流提取等加热提取方法，制备出的无籽刺梨总黄酮活性强。且采用了响应面法分析优化无籽刺梨总黄酮超声辅助提取工艺，提取效率高；并通过大量实验优选出利用大孔树脂柱吸附，并采用优选洗脱液洗脱，分离得到的精制总黄酮纯度高，杂质含量少。所述的无籽刺梨总黄酮的制备及其在制备抗氧化和降血糖、降血脂药物中的应用，其特征在于：所述无籽刺梨总黄酮，利用体外化学评价法测评其抗氧化活性，结果表明无籽刺梨总黄酮具有抗氧化活性，同时运用了斑马鱼为实验动物模型评价其降血糖和降血脂活性，实验研究表明，无籽刺梨中的总黄酮具有很好的降血糖活性，且具有显著的降血脂作用。附图说明图1为无籽刺梨总黄酮对DPPH自由基清除作用曲线。图2为无籽刺梨总黄酮对ABTS自由基清除作用曲线。图3为无籽刺梨总黄酮提取物配制成的水溶液(3μg/mL)和阿卡波糖降糖率与模型对照组比较图4为无籽刺梨总黄酮提取物配制成的水溶液处理后斑马鱼血脂降低率与模型对照组比较具体实施方式为了更好的理解本专利技术，下面结合附图，用本专利技术的实施例对本专利技术作进一步说明。下述实施例是说明性的，不是限定性的，不以下述实施例来限定本专利技术的保护范围。实施例1无籽刺梨中总黄酮的制备：(1)将无籽刺梨果实洗净自然晾干后置于50℃烘箱烘干至恒重，粉碎过40目筛后备用；(2)精确称取步骤(1)制备得到的无籽刺梨粉末15g，采用超声辅助提取工艺进行提取，提取时间60min、料液比1:25、乙醇体积分数50％、提取次数4次，在此条件下提取无籽刺梨总黄酮，收集提取液，合并，于50℃减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；(3)取步骤(2)制备得到的浓缩液，用大孔树脂色谱柱DiaionHP20(35×550mm)吸附，以蒸馏水洗脱去杂后，用80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经减压浓缩干燥，得到无籽刺梨总黄酮提取物。纯化后的总黄酮含量为116.21±0.05mg/g。实施例2无籽刺梨总黄酮体外化学评价法测评其抗氧化活性：取实施例1制备得到的无籽刺梨总黄酮提取物分别用70％乙醇溶解配制成不同浓度的溶液，并各取2mL不同质量浓度的溶液于棕色小瓶中，分别加入0.2mmol/L的DPPH乙醇溶液2mL，在避光条件下混均，反应20min后，在波长517nm处测定吸光度。以70％乙醇调零，用70％乙醇2mL加入0.2mmol/L的DPPH乙醇溶液2mL作为空白对照。以Vc作为阳性对照，DPPH自由基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种无籽刺梨总黄酮，其特征在于，所述的无籽刺梨总黄酮是通过以下方法制备所得到的：(1)将无籽刺梨果实洗净自然晾干后置于50℃烘箱烘干至恒重，粉碎过40目筛后备用；(2)取步骤(1)制备得到的无籽刺梨粉末，采用超声辅助提取方法进行提取，收集提取液，合并，于50℃减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；(3)取步骤(2)制备得到的浓缩液，用色谱柱吸附，以蒸馏水洗脱去杂后，用乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经减压浓缩干燥，得到无籽刺梨总黄酮提取物。

【技术特征摘要】
1.一种无籽刺梨总黄酮，其特征在于，所述的无籽刺梨总黄酮是通过以下方法制备所得到的：(1)将无籽刺梨果实洗净自然晾干后置于50℃烘箱烘干至恒重，粉碎过40目筛后备用；(2)取步骤(1)制备得到的无籽刺梨粉末，采用超声辅助提取方法进行提取，收集提取液，合并，于50℃减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；(3)取步骤(2)制备得到的浓缩液，用色谱柱吸附，以蒸馏水洗脱去杂后，用乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经减压浓缩干燥，得到无籽刺梨总黄酮提取物。2.如权利要求1所述的一种无籽刺梨总黄酮，其特征在于，无籽刺梨总黄酮提取物纯化后的总黄酮含量为116.21±0.05mg/g。3.如权利要求1所述的一种无籽刺梨总黄酮，其特征在于，所述的超声辅助提取无籽刺梨总黄酮方法是提取时间为50‐70min，料液比为1:20‐1:25，乙醇体积分数为40％‐60％，提取次数为3‐5次。4.一种无籽刺梨总黄酮的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括下述步骤：(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：李永钦，赵平，张德国，罗旭璐，但汉龙，
申请(专利权)人：贵州绿荫河农业发展有限公司，西南林业大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52