本发明专利技术涉及一种菠萝酵素及其作为酪氨酸酶抑制剂的应用，本发明专利技术提供的菠萝酵素依靠菠萝果皮或菠萝叶表面的野生酵母菌、或菠萝蛋白酶，在葡萄糖存在下，自然发酵得到的，具有原料廉价易得，变废为宝的特点，本发明专利技术不仅解决了菠萝加工产生的副产物——菠萝果皮资源浪费、对环境造成污染的问题，而且通过自然发酵技术还得到了具有抑制酪氨酸酶作用的菠萝酵素，可用于化妆品领域作为美白剂，天然无刺激。
Pineapple enzyme and its use as tyrosinase inhibitor
The invention relates to a pineapple enzyme and its application as a tyrosinase inhibitor, the invention provides the pineapple enzyme on pineapple peel or pineapple leaf surface of wild yeast, or bromelain, in the presence of glucose by natural fermentation, is cheap and easily available raw materials, waste characteristics, the invention not only solves the processing of pineapple the byproduct of pineapple peel waste of resources, pollute the environment, but also through the natural fermentation technology has been inhibited tyrosinase function can be used for pineapple enzyme, cosmetics as a natural whitening agent, no stimulation.
【技术实现步骤摘要】
一种菠萝酵素及其作为酪氨酸酶抑制剂的应用
本专利技术属于化妆品领域，具体涉及一种菠萝酵素及其制备方法与抑制酪氨酸酶的用途。
技术介绍
黑色素(melanin)主要由人体的黑色素细胞产生，它能减少紫外线对皮肤的伤害；然而黑色素的异常蓄积会造成色素沉着过度，容易引起雀斑、老年斑、黑斑病等。研究者发现酪氨酸酶在黑色素的生物合成过程中有重大作用。在黑色素生物合成过程中，酪氨酸酶起着十分重要的催化作用。酪氨酸酶能够促进L-酪氨酸转化为L-多巴，L-多巴又经过氧化而转化为多巴醌，多巴醌多聚生成黑色素。菠萝果肉属于菠萝的食用部位，含有丰富的营养物质；但是菠萝果皮及菠萝叶是不可食用部分，是菠萝加工产生的副产物，若不加以处理及利用，会对环境造成污染和资源浪费。本专利技术的目的是研究菠萝果肉、果皮及叶对酪氨酸酶的抑制作用，若有一定作用，在今后的生产生活中就不会造成资源浪费，同时也会减少对环境的污染。
技术实现思路
本专利技术提供一种菠萝酵素，其特征在于所述菠萝酵素由如下方法制备，所述方法包括如下步骤：取一定质量的原料，经预处理后，置于经无菌处理的发酵罐中，然后加入原料质量的20％-35％质量的葡萄糖后，将发酵罐密封，于15-25℃下，自然发酵，25-35天。所述原料为新鲜菠萝果皮、菠萝果肉或菠萝叶；所述预处理包括如下步骤：将原料用自来水冲洗2-3次，然后用蒸馏水冲洗1-2次，再用无菌水冲洗1-2次，再用75％的乙醇冲洗2次，紫外灯照射5分钟，最后将其切碎。本专利技术提供的菠萝酵素依靠菠萝果皮或菠萝叶表面的野生酵母菌、或菠萝蛋白酶，在葡萄糖存在下，自然发酵得到的，具有原料廉价易得，变废为宝的特点，本专利技术不仅解决了菠萝加工产生的副产物——菠萝果皮资源浪费、对环境造成污染的问题，而且通过自然发酵技术还得到了具有抑制酪氨酸酶作用的菠萝酵素，可用于化妆品领域作为美白剂，天然无刺激。本专利技术提供一种菠萝酵素的制备方法，其特征在于包括如下步骤：取一定质量的原料，经预处理后，置于经无菌处理的发酵罐中，然后加入原料质量的20％-35％质量的葡萄糖后，将发酵罐密封，于15-25℃下，自然发酵，25-35天。所述原料为新鲜菠萝果皮、菠萝果肉或菠萝叶；所述预处理包括如下步骤：将原料用自来水冲洗2-3次，然后用蒸馏水冲洗1-2次，再用无菌水冲洗1-2次，再用75％的乙醇冲洗2次，紫外灯照射5分钟，最后将其切碎。本专利技术制备方法中“75％的乙醇冲洗2次，紫外灯照射5分钟”是为了杀灭细菌，酵母菌基本不受影响。本专利技术提供一种菠萝酵素在制备美白剂中的用途，所述菠萝酵素选自菠萝果皮酵素、菠萝果肉酵素或菠萝叶酵素。本专利技术提供一种菠萝酵素在抑制酪氨酸酶方面的应用，所述菠萝酵素选自菠萝果皮酵素、菠萝果肉酵素或菠萝叶酵素。附图说明图1黑色素的吸光值与温度(A-T)图图2黑色素的吸光值与反应时间(A-t)图图3黑色素的吸光值与L-酪氨酸物质的量浓度(A-C)图图4黑色素的吸光值与L-酪氨酸用量(A-V)图图5黑色素的吸光值与土豆质量/缓冲溶液体积图图6菠萝果皮酵素浓度与酪氨酸酶抑制率的关系图图7菠萝果肉酵素浓度与酪氨酸酶抑制率的关系图图8菠萝叶酵素浓度与酪氨酸酶抑制率的关系图图9熊果苷酵素浓度与酪氨酸酶抑制率的关系图具体实施方案本专利技术中涉及的酪氨酸酶是可按文献的方法(李好样，吕海燕，董金龙.马铃薯中酪氨酸酶的提取及其活性的研究[J].光谱实验室，2008，25(6)：1040-1043)从土豆中提取的；或按下列方法提取：将土豆洗净削皮，切块后放置于冰箱冷冻层，冷冻过夜。需用时取出称重，与相应比例的缓冲溶液[土豆质量：缓冲溶液体积＝1：5(g/mL)]共置于搅拌机中搅拌；将所得溶液进行离心，离心速率为4000r/min，离心时长为5min，取上清液为实验所用(即土豆提取液)。本专利技术所述的缓冲溶液为pH＝6.86的混合磷酸盐缓冲溶液。本专利技术从菠萝的不同部位(果皮、果肉、叶)中提取出酵素，测定其对土豆中酪氨酸酶活性的抑制作用，通过计算抑制率来反映抑制作用。用熊果苷作为阳性对照，比较IC50的大小(任红荣，单承莺，姜洪芳，等.香水莲花提取物抑制酪氨酸酶活性的研究[J].天然产物研究与开发，2011，23(06)：1122-1126；叶孝兆，龚盛昭，廖国俊，等.当归提取物对酪氨酸酶的抑制作用[J].日用化学工业，2010，40(02)：98-100)。抑制率计算公式：[1-(T2-T1)/(C2-C1)]×100％C1表示只有底物(土豆提取液和缓冲溶液的混合溶液)的吸光度值，C2表示含有底物和L-酪氨酸的吸光度值，C2-C1表示在扣除底物的吸光度后生成的黑色素的吸光度值。T1表示含有底物和样品的吸光度值，T2表示含有底物、L-酪氨酸和样品的吸光度值，T2-T1表示经过样品的抑制，在扣除样品和底物的吸光度后剩余的黑色素的吸光度值。实施例1酪氨酸酶促进L-酪氨酸生成黑色素的最佳活性条件的确定(1)温度对酪氨酸酶最佳活性的影响取10mL干净干燥的棕色容量瓶8个，分为4组，每组2个，分别标记为C1和C2。按照表1加入各试液：表1体系组成及各试剂加入量按照上表给4组容量瓶加入对应量的缓冲溶液和L-酪氨酸溶液作为反应体系的底物，然后加入对应量的土豆提取液，将4组溶液分别置于0℃、10℃、30℃、40℃下，反应35min后，立即进行吸光度的测量(测量波长为475nm为最好)。如图1。(2)体系反应时间对酪氨酸酶最佳活性的影响取100mL干净干燥的棕色容量瓶两个，标记为C1和C2，按照表2加入各试液：表2体系组成及各试剂加入量按照上表给2个容量瓶加入对应量的缓冲溶液和L-酪氨酸溶液作为反应体系的底物，然后加入对应量的土豆提取液，将容量瓶置于10℃水浴，每隔5min测量一个吸光度，反应总时长为90min(测量波长为475nm)。如图2。(3)L-酪氨酸物质的量浓度对酪氨酸酶最佳活性的影响用电子天平准确称取0.0181g的L-酪氨酸粉末，用缓冲溶液溶解定容于100ml的容量瓶中,可得1mmol/L的L-酪氨酸溶液。取6个10mL干净干燥的容量瓶，分别加入上述溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL，用缓冲溶液定容至刻度线，即得物质的量浓度分别为0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.5mmol/L、0.6mmol/L的L-酪氨酸溶液。另取10mL干净干燥的棕色容量瓶12个，分为6组，每组2个，分别标记为C1和C2。按照表3加入各试液：表3体系组成及各试剂加入量按照上表给4组容量瓶加入对应量的缓冲溶液和不同物质的量浓度的L-酪氨酸溶液作为反应体系的底物，然后加入对应量的土豆提取液。将容量瓶置于10℃水浴，反应35min后，立即测量吸光度(测量波长为475nm)。如图3。(4)L-酪氨酸用量对酪氨酸酶最佳活性的影响取10个10mL干净干燥的容量瓶，分为5组，每组2个，分别标记为C1和C2。按照表4加入各试液：表4体系组成及各试剂加入量表中x为1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL，对应y为8.0mL、7.5mL、7.0mL、6.5mL、6.0mL，向5组容量瓶加入对应量的缓冲溶液和不同量的L-酪氨酸溶液(浓度为0本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种菠萝酵素，其特征在于所述菠萝酵素由如下方法制备，所述方法包括如下步骤：取一定量的原料，经预处理后，置于经无菌处理的发酵罐中，然后加入原料质量的20％‑35％质量的葡萄糖后，将发酵罐密封，于15‑25℃下，自然发酵，25‑35天。
【技术特征摘要】
1.一种菠萝酵素，其特征在于所述菠萝酵素由如下方法制备，所述方法包括如下步骤：取一定量的原料，经预处理后，置于经无菌处理的发酵罐中，然后加入原料质量的20％-35％质量的葡萄糖后，将发酵罐密封，于15-25℃下，自然发酵，25-35天。2.权利要求1所述的菠萝酵素，其特征在于所述原料为新鲜菠萝果皮、菠萝果肉或菠萝叶。3.权利要求1-2任一项所述的菠萝酵素，其特征在于所述预处理包括如下步骤：...
【专利技术属性】
技术研发人员：纪明慧，郭飞燕，陈光英，吕纪行，
申请(专利权)人：海南师范大学，
类型：发明
国别省市：海南,46
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。