物质封入方法及检测靶分子的方法技术

本发明专利技术作为将多个珠粒或核酸、蛋白质、病毒、细胞、脂质膜复合物等物质有效地封入阵列中的技术，提供一种物质封入方法，包括：物质导入工序，向利用侧壁相互隔开地形成能够收容物质的多个收容部的基板上，导入含有该物质的第一溶剂；物质收容工序，在所述物质导入工序之后，将比重大于所述第一溶剂的第二溶剂导入所述第一溶剂上。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】物质封入方法及检测靶分子的方法
本专利技术涉及物质封入方法及检测靶分子的方法。
技术介绍
作为通过以分别识别蛋白质、核酸等生物分子的方式来观察而进行各种测定的方法，已知有单分子测定。已知有若干种用于进行该单分子测定的方法。专利文献1中，记载有单分子酶活性检测中所用的微室。该微室具有可以将液滴封入、且该液滴能够填充的容量为1000fL(飞升)以下的容器部。容器部是通过使第一构件与第二构件贴合而至少由第一构件或第二构件所具有的凹处构成。通过在该液滴中进行酶反应，即使反应产物的分子数极少，也可以提高浓度，因此可以检测出酶单分子的活性。非专利文献1中记载有如下的方法，即，液滴被油所覆盖，使用能够从外部直接接近液滴的飞升级的液滴阵列，进行单分子酶测定。该阵列中，通过在亲水性表面形成高17nm的疏水性区域，而形成亲水性区域的图案。非专利文献2中，记载有使用单分子的酶联免疫吸附测定(ELISA)来检测蛋白质的方法。该方法中，利用由蛋白质特异性抗体覆盖的微细的珠粒捕捉微量的蛋白质，并利用荧光标记珠粒与蛋白质的复合物。利用离心力将含有该复合物的珠粒导入反应室中，通过计数捕捉到蛋白质的珠粒的个数，而对蛋白质进行定量测定。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2004－309405号公报非专利文献非专利文献1：S.Sakakihara等，LabChip，2010，10，3355－3362非专利文献2：DavidMRissin等，NatureBiotechnology:doi:10.1038/nbt.1641
技术实现思路
专利技术所要解决的问题为了检测出低浓度的疾病标记等，早期发现疾病、感染症等，要求生物传感技术的进一步高灵敏度化。例如，在标记蛋白从体积1mm3的肿瘤中所含的100万个癌细胞(每个细胞各100个分子)分泌到5L的血中时，该蛋白质的血液中浓度为30aM左右。因而希望有能够检测出此种非常低浓度的靶分子的技术。为了检测出此种靶分子，可以考虑使用上述的单分子酶测定以单分子单位的灵敏度进行检测的方法。即为如下的方法：将靶分子特异性地封入飞升级的液滴(超微小液滴)中后，将由酶标记了的抗体等与靶分子连接，利用上述的方法检测出标记酶的活性。作为将靶分子特异性地封入超微小液滴中的方法，可以考虑使用与靶分子特定结合的由其他抗体等标记了的珠粒等的方法。该方法中，在使靶分子与珠粒结合后，将珠粒封入超微小溶液中。此处，为了有效地检测出溶液中仅极微量地存在的靶分子、例如如上所述的30aM左右的靶分子等，需要准备100万个左右的非常多的超微小液滴阵列，在该阵列中捕捉珠粒。但是，非专利文献2中记载的方法中，需要利用强离心力将珠粒导入阵列中，需要花费时间和劳力。另外，非专利文献2中记载的方法中所用的阵列的个数为5万个左右，极难应用于100万个左右的阵列。因此，非专利文献2中记载的方法中，难以将大量珠粒有效地封入阵列中。另外，专利文献1及非专利文献1中，没有记载解决此种问题的方法。本专利技术的目的在于，提供一种将珠粒或核酸、蛋白质、病毒、细胞、脂质膜复合物等物质大量地有效地封入阵列中的技术。用于解决问题的方法为了解决上述的问题，本专利技术提供以下的物质封入方法等。[1]一种物质封入方法，包括：物质导入工序，向利用侧壁相互隔开地形成能够收容物质的多个收容部的基板上，导入含有该物质的第一溶剂；和物质收容工序，在所述物质导入工序之后，将比重大于所述第一溶剂的第二溶剂导入到所述第一溶剂上。[2]根据[1]中记载的物质封入方法，其中，所述第一溶剂及第二溶剂的至少一方含有表面活性剂。[3]根据[2]中记载的物质封入方法，其中，所述第一溶剂中的所述表面活性剂的浓度为0.01％～1％。[4]根据[2]或[3]中记载的物质封入方法，其中，所述表面活性剂为TWEEN20或TritonX－100。[5]根据[1]～[4]中任一项记载的物质封入方法，其中，所述第二溶剂是选自饱和烃、不饱和烃、芳香族烃、硅油、六氟环氧丙烷系聚合物、具有氢氟醚结构的聚合物、全氟聚醚、三氟氯乙烯聚合物及具有全氟碳结构的聚合物中的至少1种或含有它的混合物。[6]根据[1]～[5]中任一项记载的物质封入方法，其中，所述第一溶剂是选自水、亲水性醇、亲水性醚、酮、腈系溶剂、二甲亚砜、以及N，N－二甲基甲酰胺中的至少1种或含有它的混合物。[7]根据[5]或[6]中记载的物质封入方法，其中，所述侧壁具有包含氟系高分子树脂的疏水性的上表面，所述第二溶剂是具有全氟碳结构的聚合物。[8]根据[7]中记载的物质封入方法，其中，所述氟系高分子树脂是无定形氟树脂。[9]根据[1]～[8]中任一项记载的物质封入方法，其中，所述基板的包含所述收容部的区域被向外部开放。[10]根据[1]～[9]中任一项记载的物质封入方法，其中，所述物质是选自珠粒、核酸、蛋白质、病毒、细胞及脂质膜复合物中的1种以上。[11]一种检测靶分子的方法，包括：反应工序，使特异性地捕捉靶分子的珠粒与该靶分子反应；珠粒封入工序，在所述反应工序之后，使用所述珠粒实施[1]～[9]中任一项记载的物质封入方法；和检测工序，在所述珠粒封入工序之后，检测是否在各个所述收容部中收容有捕捉到所述靶分子的珠粒。[12]根据[11]中记载的检测靶分子的方法，其中，在所述珠粒上，结合有与所述靶分子特异性结合的分子。[13]一种物质封入方法，是通过向形成于基板上的收容部导入含有物质的亲水性溶剂、并将导入所述收容部的含有所述物质的亲水性溶剂用疏水性溶剂覆盖而将所述物质封入所述收容部内的方法，所述物质封入方法包括：物质导入工序，向所述利用侧壁相互隔开地形成能够收容物质的多个收容部的基板上，导入含有所述物质的亲水性溶剂；和物质收容工序，在所述物质导入工序之后，将比重大于所述亲水性溶剂的疏水性溶剂导入到所述亲水性溶剂上。[14]根据[13]中记载的物质封入方法，其中，所述亲水性溶剂及所述疏水性溶剂的至少一方含有表面活性剂。[15]根据[14]中记载的物质封入方法，其中，所述亲水性溶剂中的所述表面活性剂的浓度为0.01％～1％。[16]根据[14]或[15]中记载的物质封入方法，其中，所述表面活性剂为TWEEN20或TritonX－100。[17]根据[13]～[16]中任一项记载的物质封入方法，其中，所述疏水性溶剂是选自饱和烃、不饱和烃、芳香族烃、硅油、六氟环氧丙烷系聚合物、具有氢氟醚结构的聚合物、全氟聚醚、三氟氯乙烯聚合物及具有全氟碳结构的聚合物中的至少1种或含有它的混合物。[18]根据[13]～[17]中任一项记载的物质封入方法，其中，所述亲水性溶剂是选自水、亲水性醇、亲水性醚、酮、腈系溶剂、二甲亚砜、以及N，N－二甲基甲酰胺中的至少1种或含有它的混合物。[19]根据[17]或[18]中记载的物质封入方法，其中，所述侧壁具有包含氟系高分子树脂的疏水性的上表面，所述疏水性溶剂是具有全氟碳结构的聚合物。[20]根据[19]中记载的物质封入方法，其中，所述氟系高分子树脂是无定形氟树脂。[21]根据[13]～[20]中任一项记载的物质封入方法，其中，所述基板的包含所述收容部的区域被向外部开放。[22]根据[13]～[21]中任一项记载的物质封入方法，其中，所述物质是选自珠粒、核酸、蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种物质封入方法，包括：物质导入工序，向利用侧壁相互隔开地形成能够收容物质的多个收容部的基板上，导入含有该物质的第一溶剂；和物质收容工序，在所述物质导入工序之后，将比重大于所述第一溶剂的第二溶剂导入到所述第一溶剂上。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.08 JP 2014-1407001.一种物质封入方法，包括：物质导入工序，向利用侧壁相互隔开地形成能够收容物质的多个收容部的基板上，导入含有该物质的第一溶剂；和物质收容工序，在所述物质导入工序之后，将比重大于所述第一溶剂的第二溶剂导入到所述第一溶剂上。2.根据权利要求1所述的物质封入方法，其中，所述第一溶剂及第二溶剂的至少一方含有表面活性剂。3.根据权利要求2所述的物质封入方法，其中，所述第一溶剂中的所述表面活性剂的浓度为0.01％～1％。4.根据权利要求1～3中任一项所述的物质封入方法，其中，所述第二溶剂是选自饱和烃、不饱和烃、芳香族烃、硅油、六氟环氧丙烷系聚合物、具有氢氟醚结构的聚合物、全氟聚醚、三氟氯乙烯聚合物及具有全氟碳结构的聚合物中的至少1种或含有它的混合物。5.根据权利要求1～4中任一项所述的物质封入方法，其中，所述第一溶剂是选自水、亲水性醇、亲水性醚、酮、腈系溶剂、二甲亚砜、以及N，N－二甲基甲酰胺中的至少1种或含有它的混合物。6.根据权利要求4或5所述的物质封入方法，其中，所述侧壁具有包含氟系高分子树脂的疏水性的上表面，所述第二...

【专利技术属性】
技术研发人员：野地博行，山内里纱，
申请(专利权)人：国立研究开发法人科学技术振兴机构，
类型：发明
国别省市：日本,JP