改进的免疫球蛋白可变结构域制造技术

VH结构域，其中：(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(hi)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且其中所述VH结构域包含C‑端延伸(X)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改进的免疫球蛋白可变结构域本专利技术涉及改进的重链免疫球蛋白可变结构域。本专利技术特别地涉及这样的改进的重链免疫球蛋白可变结构域，其具有暴露的C-端区域或末端(如本文中进一步描述的；也参见WO12/175741)或被用于(或意在用于)这样的应用，其中它们具有暴露的C-端区域或末端(同样，如本文中进一步描述的)。前者的一些优选的而非限制性的实例是免疫球蛋白单可变结构域(在本文中也被称为“ISV”或“ISVD”)如纳米抗体(包括VHH，人源化的VHH和骆驼源化的VH如骆驼源化的人VH)，作为VH结构域或来源于VH结构域的(单结构域)抗体，和作为VH结构域或来源于VH结构域的dAb。后者的一些优选的而非限制性的实例是用于(或意在用于)单链FV(ScFv)或双抗体的VH结构域。本专利技术还涉及包含(一个或多个)如本文中所述的本专利技术的改进的重链免疫球蛋白可变结构域或基本上由(一个或多个)如本文中所述的本专利技术的改进的重链免疫球蛋白可变结构域组成的蛋白质、多肽和其他构建体、分子或化学实体；涉及用于表达/制备本专利技术的改进的重链免疫球蛋白可变结构域和/或用于表达/制备包含其的蛋白质、多肽和其他构建体、分子或化学实体的方法；涉及包含本专利技术的改进的重链免疫球蛋白可变结构域和/或含有本专利技术的改进的重链免疫球蛋白可变结构域的蛋白质、多肽和其他构建体、分子或化学实体的组合物和产品(如药物组合物和产品)；涉及编码本专利技术的改进的重链免疫球蛋白可变结构域和/或编码包含本专利技术的改进的重链免疫球蛋白可变结构域的蛋白质或多肽的核苷酸序列和核酸；并且涉及本专利技术的改进的重链免疫球蛋白可变结构域和包含其的蛋白质、多肽和其他构建体、分子或化学实体的用途(并且特别是治疗、预防和诊断用途)。由本文中的进一步描述，本专利技术的进一步的方面、实施方案、优点、应用和用途将变得清楚。在本申请中，免疫球蛋白重链可变结构域中的氨基酸残基/位置将根据Kabat的编号来指示。为了方便，图1给出了列出了本文中将具体提及的一些氨基酸位置及其根据一些备选编号系统(如Aho和IMGT。注意：对于本申请的说明书和权利要求，Kabat编号是决定性的；给出其他编号系统仅作为参考)的编号的表。此外，在本专利技术中，当免疫球蛋白可变结构域不与恒定结构域(如CH1结构域)结合或连接时，称其具有“暴露的C-端末端或区域”。参考本文中引用的相关现有技术。特别地，如WO12/175741中所述，C-端区域(当本文中也使用该术语时)是ISV上的推定表位的一部分，除了其他残基以外，所述表位还包括位置14处的氨基酸残基(以及氨基酸序列中与其紧邻/接近的氨基酸残基，如位置11、13和15)并且还可以包括位置83处的氨基酸残基(以及氨基酸序列中与其紧邻/接近的氨基酸残基，如位置82、82a、82b和84)和/或位置108处的氨基酸残基(以及氨基酸序列中与其紧邻/接近的氨基酸残基，如位置107)。如在WO12/17574中，该推定表位在本文中也被统称为“C-端区域”，要理解的是该C-端区域至少包括C端序列VTVSS(即位置109、110、111、112和113中的每个)和位置14处的氨基酸残基，并且还可以包括位置83和108处的氨基酸残基，并且还可能包括位置13、15、82b、83、84和107处的氨基酸残基。作为研究单链Fv或"ScFv"(其是包含与ISVD类似地不与恒定结构域相结合的免疫球蛋白可变结构域的构建体)的结果，本领域中已经描述了，免疫球蛋白可变结构域的C-末端包含疏水片(patch)，所述疏水片在常规全尺寸抗体中被埋在可变结构域和恒定结构域之间的界面中但是当可变结构域不与恒定结构域相结合时其暴露于溶剂(参见例如Nieba等,ProteinEngineering,10,435-444(1997)和Harmsen等,MolecularImmunology(2000),579-590)。还已知，通常埋在蛋白质结构内的表位(也被称为“新表位”或“隐蔽表位”)在其暴露于溶剂(例如由于所涉及的蛋白质的降解、错误折叠或聚集所致)后可以触发免疫系统。例如，在生物分子的埋藏的疏水部分(所谓的“hyppos”)的情况中，已经提示，在hyppos暴露于溶剂后，所述疏水部分形成导致先天免疫系统应答的与总体损伤相关联的分子模式的一部分(参见例如Seong和Matzinger，NatureReviews2004,469)，并且本领域中已经描述了触发免疫应答的之前埋藏的疏水片的多种实例(参见例如David等,JBC,2001,6370-6377；Matsuura等,InternationalImmunology,2000,1183-1192；Rasheed等,LifeSciences79(2000),2320-2328)。更加一般性地，本领域中也已知的是，疏水氨基酸倾向于成为B细胞表位的一部分(参见例如WO11/07586，第10页；和Kolaskar,FEBS276,172-174(1990))。类似地，已经描述的是，重链可变结构域的C-末端处的疏水片(如以上的Nieba等和Harmsen等所述的)可以形成B-细胞表位，所述表位可以使(新出现的和/或预先存在的)抗药抗体出现和/或与其相互作用(WO11/07586)。因为该原因，已经提出对形成可变结构域的C-末端的部分的氨基酸残基中的一些进行突变以减小疏水性和/或除去B-细胞表位。例如，Nieba等提出突变VH区域的位置11、14、41、84、87和/或89(根据Kabat编号)，而在WO11/07586中建议的是突变VL结构域的位置99，101和/或148(AHo编号)或VH结构域的位置12、97、98、99、103和/或144(同样是AHo编号-这些位置对应于根据Kabat的位置11、83、84、85、89和103)。类似地，Harmsen等建议突变位置12和101(IMGT编号；这些是根据Kabat的位置11和89)以抵偿CH1结构域的缺失；并且其还鉴定了含有作为用于在这些位置处取代的合适候选物的氨基酸的VHH的具体亚家族(被称为“VHH4”)。现有技术(参见例如WO12/175741和接下来的段落中引用的文献)已经描述了获得自人受试者的生物学样品可以包含能够与免疫球蛋白可变结构域的暴露的C-端区域或末端(例如，ISVD或ScFv或双抗体中的VH或VL结构域的C-端区域或末端)结合的(原始)蛋白质或因子。例如，WO2013/024059记载了“在来自一些健康的首次用于实验的(naive)人受试者的血清中，出现可以结合VH结构域抗体和VHH分子的预先存在的(pre-existing)抗-VH自身抗体以及可以结合VL分子的抗-VL(例如Vκ(VK))自身抗体。”，以及“结合VHdAb的预先存在的ADA与抗-铰链抗体的类似之处在于其结合IgG片段但是不结合在完整IgG上原位发现的那些相同序列。”Holland等,J.Clin.Immunol.2013,33(7):1192-203描述了约半数的正常健康人类的血液含有不同水平的一类新的抗-IgG自身抗体，其可以结合全长人VH结构域抗体的框架序列(也被Holland等称为“HAVH自身抗体”)。Holland等还提及了这些自身抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
VH结构域，其中：(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且其中所述VH结构域包含C‑端延伸(X)

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.16 US 61/994,552;2014.06.18 US 62/014,015;1.VH结构域，其中：(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。2.根据权利要求1所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。3.根据权利要求2所述的VH结构域，其是纳米抗体。4.VH结构域，其中位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个。5.根据权利要求4所述的VH结构域，其包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。6.根据权利要求4或5所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。7.根据权利要求6所述的VH结构域，其是纳米抗体。8.VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是T，并且其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。9.根据权利要求8所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。10.根据权利要求9所述的VH结构域，其是纳米抗体。11.VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个。12.根据权利要求11所述的VH结构域，其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。13.根据权利要求11或12所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。14.根据权利要求13所述的VH结构域，其是纳米抗体。15.VH结构域，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个。16.根据权利要求15所述的VH结构域，其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。17.根据权利要求15或16所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。18.根据权利要求17所述的VH结构域，其是纳米抗体。19.VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是L并且位置11处的氨基酸残基是V。20.根据权利要求19所述的VH结构域，其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。21.根据权利要求19或20所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。22.根据权利要求21所述的VH结构域，其是纳米抗体。23.VH结构域，其中：-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且其中所述VH结构域任选地包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。24.根据权利要求23所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。25.根据权利要求23或24所述的VH结构域，其是纳米抗体。26.根据权利要求23至25中任一项所述的VH结构域，其中位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个。27.根据权利要求23至25中任一项所述的VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是T。28.根据权利要求23至25中任一项所述的VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个。29.根据权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛丽安格·比斯，卡罗·布东，
申请(专利权)人：埃博灵克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE