一种具有ACE抑制和抗氧化功能的甲鱼蛋白肽及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种具有ACE抑制和抗氧化功能的甲鱼蛋白肽及其制备方法，属于水产品食品加工技术领域。本发明专利技术的甲鱼蛋白肽的制备方法包括：(1)超声处理去脂的甲鱼肉浆液；(2)加入复合蛋白酶进行二步法酶解，酶解过程无需添加酸或碱调节pH值；(3)对酶解液离心并取上清液通过二步超滤法处理；(4)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。本发明专利技术方法操作简单，适于产业化生产，制备过程无需添加酸或碱调节pH值，且不添加任何添加剂，较好地保持产品的功能特性，产品得率高，风味好，所制得的甲鱼蛋白肽具有优异的ACE抑制功能，IC50小于0.4mg/mL，且具有较好的抗氧化功能，广泛应用于特需食品和营养食品的制造。

Turtle protein peptide with ACE inhibition and anti-oxidation function and preparation method thereof

The invention provides a turtle protein peptide with ACE inhibition and antioxidation function and a preparation method thereof, which belongs to the technical field of aquatic product food processing. Including the preparation method of soft shelled turtle protein peptide of the present invention: (1) the ultrasonic treatment of fat turtle meat slurry; (2) adding compound proteinase two step enzyme solution without adding acid or alkali to adjust the pH value of enzymatic hydrolysis process; (3) the enzymolysis liquid centrifuged and supernatant by two step ultrafiltration treatment; (4) the filtrate column separation, elution peak, i.e.. The method of the invention has the advantages of simple operation, suitable for industrial production, preparation process without adding acid or alkali to adjust the pH value, and does not add any additives, good functional properties of products, high product yield, good flavor, made of soft shelled turtle protein peptide has excellent ACE inhibitory function, IC50 is less than 0.4mg/mL, and has good anti-oxidation function, widely used in special food and nutrition food manufacturing.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及水产食品加工
，具体地涉及一种具有ACE抑制和抗氧化功能的甲鱼蛋白肽及其制备方法。
技术介绍
高血压是对人类健康危害极大的一种疾病，潜伏期长。高血压的早期阶段，一般没有明显不适症，直至发生临床迹象心脏病发作、脑血管破裂而导致死亡。血管紧张素转化酶(AngiotensinIconvertingenzyme，ACE)为肾素-血管紧张素系统的关键酶。血管紧张素原在肾素的作用下转化为血管紧张素I，血管紧张素I在ACE的作用下转化为血管紧张素II，刺激血管收缩，造成血压上升。抑制ACE的活性对降低血压有着积极的作用，因而开发有效的ACE抑制剂引起人们的极大关注。虽然来源于食物的ACE抑制肽比人工合成的ACE抑制剂作用弱，但是它有其独特的优点，不会产生降压过度的问题，安全性高，无副作用，除降压功能外，往往同时具有免疫促进、易消化吸收等功能。由于药物疗法存在副作用，天然食物中的降血压功能因子的开发利用将成为今后高血压非药物治疗的重要部分。现有技术中关于ACE抑制肽开发的报道，主要是通过酶解的方法从水产动物体或牛乳乳清蛋白源获得ACE抑制肽，酶解过程通常都需要通过添加酸或碱来调节体系的pH值，这无疑影响了获得的ACE抑制肽产品的功能特性，且增加了操作的繁琐程度；还有的ACE抑制肽的制备方法在酶解后还有脱苦脱味的步骤，以改善水产动物的腥味等不适口的味道，这些方法均不同程度地增加了操作步骤和生产成本，制约了产业化规模化ACE抑制肽的生产及蛋白肽的得率。另一方面，现有技术从水生生物中获得的具有ACE抑制功能的肽往往仅具有ACE抑制功能，未发现有其他的生物活性功能，即产品性能单一。目前国内外专利中未见利用甲鱼肉资源制备血管紧张素转化酶抑制肽的专利文献报道。本专利技术针对目前甲鱼蛋白产品开发的现状，利用甲鱼肉为原料，通过对甲鱼肉的超声波等预处理，在不添加任何酸和碱条件下，利用多种蛋白酶复合酶解，通过膜分离和凝胶分离技术，开发了同时具有特定降压和抗氧化功能的甲鱼蛋白肽，建立一套简单高效的多功能的甲鱼蛋白肽的制备方法。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的是在于提供一种具有ACE抑制和抗氧化功能的甲鱼蛋白肽。本专利技术的另一目的在于提供上述甲鱼蛋白肽的制备方法。本专利技术的再一个目的在于提供上述甲鱼蛋白肽的应用。为了实现上述技术目的，本专利技术提供了一种具有ACE抑制和抗氧化功能的甲鱼蛋白肽及其制备方法，包括以下步骤:(1)超声处理去脂的甲鱼肉浆液；(2)加入复合蛋白酶进行二步法酶解，酶解过程无需添加酸或碱调节pH值；(3)对酶解液离心并取上清液通过二步超滤法处理；(4)滤液过柱层析分离，收集洗脱峰，即得。步骤(1)所述的甲鱼肉浆液通过以下方式获得：新鲜甲鱼放血宰杀，取甲鱼肉，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗,鱼肉清洗后在95℃水中保温5-10分钟，然后在甲鱼肉中加入2.0～4.0倍的水，用打浆机将甲鱼肉打成浆，通过6000～8000g离心10～15min，去上层脂肪，得到去脂的甲鱼鱼肉浆液。其中，步骤(1)超声处理方法为将去脂的甲鱼肉浆液温度调至55-65℃，25-30kH的超声频率处理15-25min。本专利技术通过大量实验发现，甲鱼肉浆液温度调至55-65℃进行超声处理，效果最好，能够较好地改变甲鱼肉蛋白的组织结构，使下面酶解步骤缩短酶解时间和较少的用酶量，就能够获得优质的蛋白肽。在上述方法的步骤(2)二步法酶解中，第一步酶解加入的复合蛋白酶为碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，二者质量比为1-2:1，且加入的复合蛋白酶质量为甲鱼肉质量的0.1％-0.3％。优选地，第一步酶解条件为55-65℃酶解1-2h。在上述方法的步骤(2)二步法酶解中，第二步酶解加入的复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和风味蛋白酶，二者质量比为1:1-2，且加入的复合蛋白酶质量为甲鱼肉质量的0.1％-0.3％。优选地，第二步酶解条件为50-60℃酶解1-2h。第二步酶解结束之后于90-95℃下保温3-5min，冷却至室温。上述方法中，步骤(3)的两步超滤法为先用孔径大于5000D的膜超滤，再用孔径为3000D的膜超滤，得到分子量小于3000D的蛋白肽。在本专利技术的实施例中，两步超滤法为利用孔径为10000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于10000的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为3000道尔顿的膜将分子量小于3000道尔顿的蛋白肽分离出来。本专利技术甲鱼蛋白肽的制备方法步骤(4)，是取分子量为小于3000的蛋白肽液，再经过凝胶分离，收集洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到分子量为小于3000D的具有较好血管紧张素转化酶(ACE)抑制和抗氧化功能的甲鱼肉蛋白肽。在本专利技术的实施例中，是取分子量为小于3000的蛋白肽液，经过SephadexG-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，流速为1.8-2.8mL/min，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到分子量为小于3000具有较好血管紧张素转化酶(ACE)抑制和抗氧化功能的甲鱼肉蛋白肽。上述制备方法制备得到的甲鱼蛋白肽属于本专利技术的保护范围。本专利技术通过实验发现，本专利技术上述方法制备得到的甲鱼蛋白肽具有优异的ACE抑制和抗氧化功能。进而，本专利技术提供了该甲鱼蛋白肽在制备降血压或抗氧化药物中的应用。含有本专利技术方法制得的甲鱼蛋白肽的食品、保健品或药物也属于本专利技术的保护范围。本专利技术的优点在于：(1)本专利技术开发的甲鱼肉蛋白肽制备方法简单，整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。(2)开发的蛋白肽具有较好的血管紧张素转化酶(ACE)活性抑制的功能，其IC50值为小于0.4mg/mL，1.2mg/mL样品浓度的ACE抑制率达到90％以上，同时具有较好的抗氧化功能。能广泛应用于特需食品和营养食品的制造。(3)本专利技术利用特定频率超声波技术处理一定温度(55-65℃)的甲鱼肉蛋白浆，可以明显改善甲鱼肉蛋白的结构，缩短酶解时间，提高甲鱼肉蛋白肽的功能和产品的得率。(4)本专利技术方法制备得到的甲鱼蛋白肽食用安全，本专利技术采用多种食品级复合蛋白酶(碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶)，经在温和条件下，经过适度酶解获得特定分子量的甲鱼肉蛋白肽，不加任何添加剂，为100％甲鱼肉蛋白肽，产品具有良好的风味，较高的得率。(5)本专利技术开发甲鱼蛋白肽中分子量小于1000D的肽的比例为90％以上，易于机体消化和吸收。具体实施方式除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本专利技术的保护范围。除有特别说明，本专利技术中用到的各种试剂、原料均为可以从市场上购买的商品或者可以通过公知的方法制得的产品。实施例1具有ACE抑制和抗氧化功能的甲鱼肉蛋白肽的制备方法(1)取甲鱼肉100克，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗，鱼肉清洗后在95℃水中保温10分钟，然后在甲鱼肉中加入2.0倍的水200克，用打浆机将甲鱼肉打成浆，通过6000g离心10min，去上层脂肪，得到去脂的甲鱼鱼肉浆液。(2)将去脂甲鱼肉浆液的温度调整到55℃，于超声波发生器中经超声波频率为30kH处理15分钟，改变甲鱼肉蛋白的组织结构。(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有ACE抑制和抗氧化功能的甲鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)超声处理去脂的甲鱼肉浆液；(2)加入复合蛋白酶进行二步法酶解，酶解过程无需添加酸或碱调节pH值；(3)对酶解液离心并取上清液通过二步超滤法处理；(4)滤液过柱层析分离，收集洗脱峰，即得。

【技术特征摘要】
1.一种具有ACE抑制和抗氧化功能的甲鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)超声处理去脂的甲鱼肉浆液；(2)加入复合蛋白酶进行二步法酶解，酶解过程无需添加酸或碱调节pH值；(3)对酶解液离心并取上清液通过二步超滤法处理；(4)滤液过柱层析分离，收集洗脱峰，即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)超声处理方法为将去脂的甲鱼肉浆液温度调至55-65℃，25-30kH的超声频率处理15-25min。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)二步法酶解中，第一步酶解加入的复合蛋白酶为碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，二者质量比为1-2:1，且加入的复合蛋白酶质量为甲鱼肉质量的0.1％-0.3％。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：第一步酶解条件为55-65℃酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：张恒，罗永康，
申请(专利权)人：安徽国肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34