本发明专利技术公开了一种分散液液微萃取‑高效液相色谱测定食用油中酚类抗氧化剂种类和含量的方法。它包括如下步骤：1)将待测食用油与分散剂混合，然后加入萃取剂混合，收集萃取相；2)采用高效液相色谱法分析测定所述萃取相中各个成分的保留时间和含量，经与酚类抗氧化剂标准品的保留时间与含量的对比与计算，即得到食用油中酚类抗氧化剂的种类和含量。本发明专利技术具有快速灵敏、使用有机溶剂少的特点，能检测量少的食用油待测样品即能测定其中酚类抗氧化剂的含量和种类；并能应用于多种食用油中酚类抗氧化剂的检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种分散液液微萃取-高效液相色谱测定食用油中酚类抗氧化剂种类和含量的方法，属于分析化学领域。
技术介绍
酚类合成抗氧化剂作为一种食品添加剂，已被广泛的用来阻止或延缓运输贮藏过程中油脂的氧化变质。国际上常用的酚类合成抗氧化剂有没食子酸丙酯(PG)、特丁基对苯二酚(TBHQ)、丁基羟基茴香醚(BHA)、没食子酸十二酯(DG)、没食子酸辛酯(OG)及2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)，它们可以单独使用或者复合使用。然而，很多研究表明，这些物质具有一定的毒性及致癌作用，过量摄入有害于人们的身体健康。因此，合成抗氧化剂在食品中的用量受到严格控制，并且不同国家的限量值不同。如，TBHQ在美国允许使用，但在欧洲却禁止使用。一般来说，合成抗氧化剂单独或者混合使用的使用值范围为100-200mg kg-1。植物油是油不饱和脂肪酸和甘油化合而成的复杂化合物，是从植物的种子、果实、胚芽中得到的油脂。它是人类日常摄取油脂及矿物质的主要来源，因此植物油的质量控制非常重要。常用检测食用油中的抗氧化剂的方法有高效液相色谱法(HPLC)，高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱法联用(GC-MS)、伏安法、毛细管电泳色谱法。然而，这些方法常常耗时长，在萃取过程中使用大量的有机溶剂并且需要大量的样品。因此，建立一种快速灵敏、节约有机溶剂、减少样品量的分析食用油中的合成抗氧化剂的方法是必要且迫切的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种分散液液微萃取-高效液相色谱测定食用油中酚类抗氧化剂种类和含量的方法。本专利技术具有快速灵敏、使用有机溶剂少的特点，能检测量少的食用油待测样品即能测定其中酚类抗氧化剂的含量和种类；并能应用于多种食用油中酚类抗氧化剂的检测。本专利技术提供的分散液液微萃取-高效液相色谱测定食用油中酚类抗氧化剂种类和含量的方法，包括如下步骤：1)将待测食用油与分散剂混合，然后加入萃取剂混合，收集萃取相；2)采用高效液相色谱法分析测定所述萃取相中各个成分的保留时间和含量，经与酚类抗氧化剂标准品的保留时间与含量的对比与计算，即得到食用油中酚类抗氧化剂的种类和含量。上述的方法中，所述待测食用油为芝麻油、橄榄油、葡萄籽油、棉籽油、花生油、大豆油、玉米油和向日葵油中的至少一种。上述的方法中，所述分散剂为正己烷、异丙醇和丙酮中的至少一种，分散剂有利于增加样品的流动性，扩大接触面积及加速相分离，分散剂必须同时与食用油及萃取剂相容。；所述萃取剂为甲醇、乙腈和乙醇中的至少一种。上述的方法中，所述待测食用油的质量与所述分散剂的体积比可为25mg：200μL～1mL，具体可为25mg：0.5mL或25mg：400μL～0.8mL；所述待测食用油的质量与所述萃取剂体积比可为25mg：200μL～1mL，具体可为25mg：0.5mL或25mg：300μL～0.7mL。上述的方法中，所述酚类抗氧化剂为没食子酸丙酯、特丁基对苯二酚、丁基羟基茴香醚、没食子酸十二酯、没食子酸辛酯和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚中的至少一种。上述的方法中，所述待测食用油与所述分散剂和所述萃取剂的混合依次采用超声处理和离心处理。上述的方法中，所述超声处理的时间为0～7min，具体可为2min或1～6min，超声有利于加速待测食用油与萃取剂之间的质量传递，增加接触面积缩短萃取时间；所述离心处理的时间可为0～10min，具体可为2min或1～8min；所述离心处理的转速可为1000～6000r/min，具体可为3000r/min或2000～5000r/min。本专利技术中，步骤2)高效液相色谱法测定酚类合成抗氧化剂的条件与现有技术中相同；高效液相色谱分析条件具体如下：流动相为乙腈(A)及含1％乙酸的水(B)。梯度洗脱程序为：0～9min，30％-90％(A)；9～13min，90％-100％(A)；流速为1.5mL/min，柱温为25℃，进样量为10μL，检测波长为280nm。每次结束后，用甲醇/水冲洗柱子至少30min。本专利技术具有以下优点：采用分散液液萃取技术结合高效液相色谱法对酚类合成抗氧化剂进行富集、检测的方法。整个预处理步骤仅消耗了待测食用油和有机溶剂的量少，具体可为25mg样品，1mL有机溶剂(0.5mL乙腈及0.5mL正己烷)，通过微萃取及离心分离两步完成。本专利技术采用乙腈作为萃取剂，有效的降低了实际待测食用油样品中所含成分种类的复杂程度，保护了色谱柱。本专利技术通过回收率实验及精密度实验，说明本专利技术方法适用于食用油中抗氧化剂含量的质量控制。附图说明图1为本专利技术中萃取剂种类对萃取效率的影响。图2为本专利技术中分散剂种类对萃取效率的影响。图3为本专利技术中分散剂体积对萃取效率的影响。图4为本专利技术中超声时间对萃取效率的影响。图5为本专利技术中实验测得的色谱图，其中图5a是空白食用油色谱图；图5b是加入100mg/L混合标准样品的色谱图。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中，PG、TBHQ、BHA、DG、OG及BHT的标准品均购买于Sigma-Aldrich试剂公司。甲醇、乙醇、正己烷、乙腈及丙酮均为色谱纯度，购买于Sigma-Aldrich试剂公司。不含有合成抗氧化剂的空白棉籽油样由农业部棉花质量监督检测中心提供。芝麻油、橄榄油、葡萄籽油、棉籽油、花生油、大豆油、玉米油及向日葵油均购买于超市。实验用水均为超纯水。使用标准品配制6种目标物的标准储备混合液，浓度为500mg/100mL，保存在4℃冰箱中，并且避光保存。Agilent 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，色谱柱(150×4.6mm,5μm)，KQ-200VDE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，Eppendorf AG离心机(德国艾本德公司)，XP504分析天平(Mettle–Toledo,瑞典)；Milli-Q超纯水系统(美国Millipore公司)。实施例1、分散液液微萃取-高效液相色谱测定食用油中酚类抗氧化剂种类和含量的方法，具体步骤如下：1、样品前处理过程：分散液液微萃取称取25mg的食用油样品止于配有螺旋盖的2mL的离心试管内。然后快速加入0.5mL正己烷分散剂，以增加食用油的流动性。充分混匀后，将0.5mL乙腈萃取剂快速注射进样品中，然后超声2min，再3000r/min离心2分钟。离心后，将萃取相转移入样品瓶中。2、高效液相色谱法分析测定萃取相中各个成分的保留时间和含量高效液相色谱分析条件：流动相为乙腈(A)及含1％乙酸的水(B)。梯度洗脱程序为：0～9min，30％-90％(A)；9～13min，90％-100％(A)。流速为1.5mL/min，柱温为25℃，进样量为10μL，检测波长为280nm。每次结束后，用甲醇/水冲洗柱子至少30min。实验结果如下：(1)线性及检出限DAD检测器的灵敏度是通过分析6种酚类抗氧化剂(PG、TBHQ、BHA、DG、OG及BHT)标准混合液来实现的。线性曲线是由峰面积与对应的各种物质浓度作图而得。该法对这6种抗氧化剂的线性范围均为0.1～500mg·L-1，并且相关系数均大于0.998。将标准本文档来自技高网...
【技术保护点】
分散液液微萃取‑高效液相色谱测定食用油中酚类抗氧化剂种类和含量的方法，包括如下步骤：1)将待测食用油与分散剂混合，然后加入萃取剂混合，收集萃取相；2)采用高效液相色谱法分析测定所述萃取相中各个成分的保留时间和含量，经与酚类抗氧化剂标准品的保留时间与含量的对比与计算，即得到食用油中酚类抗氧化剂的种类和含量。
【技术特征摘要】
1.分散液液微萃取-高效液相色谱测定食用油中酚类抗氧化剂种类和含量的方法，包括如下步骤：1)将待测食用油与分散剂混合，然后加入萃取剂混合，收集萃取相；2)采用高效液相色谱法分析测定所述萃取相中各个成分的保留时间和含量，经与酚类抗氧化剂标准品的保留时间与含量的对比与计算，即得到食用油中酚类抗氧化剂的种类和含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述待测食用油为芝麻油、橄榄油、葡萄籽油、棉籽油、花生油、大豆油、玉米油和向日葵油中的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述分散剂为正己烷、异丙醇和丙酮中的至少一种；所述萃取剂为甲醇、乙腈和乙醇中的至少一种。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐双娇，马磊，魏守军，王延琴，周大云，匡猛，方丹，杨伟华，
申请(专利权)人：中国农业科学院棉花研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41
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