一种多肽S1及其在制备治疗脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽S1及其在制备保护肝脏及维持糖代谢稳态的药物中的应用。本发明专利技术还公开了一种表达多肽S1的重组腺相关病毒以及该病毒的制备方法。本发明专利技术利用S1的重组腺相关病毒实现在ob/ob小鼠及食蟹猕猴肝脏组织中过表达，在高脂诱导的脂肪肝及Ⅱ型糖尿病模型中，多肽S1具有抑制胰岛素抵抗，增强葡萄糖耐受，减少肝脏脂质蓄积，保护肝功能，改善脂肪肝及Ⅱ型糖尿病的作用。为临床上有效预防、缓解和/或治疗脂肪肝及Ⅱ型糖尿病开辟了一条前景非常广阔的新途径。

Polypeptide S1 and its application in preparing medicine for treating fatty liver and / or type

The present invention discloses one kind of polypeptide S1 and its application in preparing medicine for protecting liver and maintaining sugar metabolism homeostasis. The invention also discloses a recombinant adeno-associated virus expressing polypeptide S1 and a preparation method thereof. The present invention utilizes recombinant adeno-associated virus S1 over expression in ob/ob mice and cynomolgus macaque liver tissue, and fatty liver in type II diabetes model induced by high fat diet, peptide S1 can inhibit insulin resistance, improve glucose tolerance and reduce lipid accumulation in the liver, protect the liver function, improve liver and fat type II diabetes the role of. It provides a new way to prevent, relieve and / or treat fatty liver disease and type II diabetes.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种多肽S1在制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的药物中的应用。
技术介绍
随着老龄人口的增加，都市化的生活以及生活方式的改变，肥胖、脂肪肝病、代谢综合征和糖尿病等代谢异常人群剧增，现已经成为全球性的公众健康的重要危害。糖尿病是一组以血葡萄糖水平增高为特征的慢性代谢性疾病，世界卫生组织依据糖尿病病因及发病机制将其分为Ⅰ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病、妊娠糖尿病和特殊类型糖尿病，其中Ⅱ型糖尿病约占糖尿病总数的90％。其最显著的特征为高血糖，主要由胰岛素抵抗及胰岛素相对缺乏引起，目前被认为是遗传因素和环境因素共同作用的结果[1]。其所导致的多种慢性并发症如糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿病相关的心脑血管疾病以及“糖尿病足”已得到人们的充分认识[2]，也是其致死致残的主要原因。当前儿童、青少年以及青年人群中Ⅱ型糖尿病前期发病率剧增，糖尿病的发病人群不断扩大，防治难度大大增加。脂肪肝包括酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝，两者都是全球常见的慢性肝病。非酒精性脂肪肝是指除酒精和其他明确的损伤肝因素造成的以肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病例综合征，常与其他代谢性综合征并存或者相互影响，如腹型肥胖、胰岛素抵抗、葡萄糖耐受不良、Ⅱ型糖尿病以及致动脉粥样硬化的脂质代谢紊乱等，是非酒精性脂肪肝炎、肝硬化以及肝癌三部曲的主要诱发因素[3]。研究表明，非酒精性脂肪肝是Ⅱ型糖尿病的独立风险因素之一，在有些患者中肝脏脂肪沉积可能是影响其Ⅱ型糖尿病发展的主要因素[4]，防治非酒精性脂肪肝可以减少Ⅱ型糖尿病的发生发展。另一方面，如果Ⅱ型糖尿病控制不佳或充分发展，不仅促进脂肪肝生成，而且使肝损伤加重，甚至形成非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维变性、肝硬化及肝细胞癌[5]。现阶段，Ⅱ型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的患病率正逐年增加，在糖尿病人群中，非酒精性脂肪肝患病率可高达80％[6]。因此，研究Ⅱ型糖尿病与非酒精性脂肪肝之间的关系以开发能有效防治Ⅱ型糖尿病合并非酒精性脂肪肝疾病的药物尤为重要。腺相关病毒(AAVs)属于微小病毒科依赖病毒属，需要辅助病毒如腺病毒、疱症病毒等参与其有效感染[7]，由于其非致病性以及有效的递送外源DNA至靶细胞的能力成为了一种理想的基因治疗病毒载体[8]，可分为11种不同的血清型(AAV1-11)。AAV8为一种从猕猴组织中分离出来的，与其他血清型具有高度同源性的腺相关病毒。重要的是，与其他腺相关病毒相比，其具有更高的肝脏细胞转导效率。在小鼠模型中AAV8的肝脏细胞转导效率约为AAV2的50倍[9]。这一性质使研究者们广泛应用于肝脏靶向的基因治疗中，并且在犬类模型中取得了较大成功[10]。参考文献[1]FaragYM,GaballaMR.Diabesity:anoverviewofarisingepidemic[J].NephrolDialTransplant,2011,26(1):28-35.[2]GavinIIIJR,AlbertiK,DavidsonMB,etal.Reportoftheexpertcommitteeonthediagnosisandclassificationofdiabetesmellitus[J].Diabetescare,1997,20(7):1183.[3]PerryRJ,SamuelVT,PetersenKF,etal.TheroleofhepaticlipidsinhepaticinsμLinresistanceandtype2diabetes[J].Nature,2014,510(7503):84-91.[4]LoriaP,LonardoA,AnaniaF.Liveranddiabetes.Aviciouscircle.HepatolRes.2013；43:51-64[5]CusiK.Treatmentofpatientswithtype2diabetesandnon-alcoholicfattyliverdisease:Currentapproachesandfuturedirections.Diabetologia.2016；59:1112-1120[6]FanJG,FarrellGC.Epidemiologyofnon-alcoholicfattyliverdiseaseinchina.JHepatol.2009；50:204-210[7]MuzyczkaN,BernsKI.Parvoviridae:thevirusesandtheirreplication[J].Fieldsvirology,2001,2:2327-2359.[8]NamHJ,LaneMD,PadronE,etal.Structureofadeno-associatedvirusserotype8,agenetherapyvector[J].Journalofvirology,2007,81(22):12260-12271.[9]GaoGP,AlviraMR,WangL,etal.Noveladeno-associatedvirusesfromrhesusmonkeysasvectorsforhumangenetherapy[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2002,99(18):11854-11859.[10]WangL,CalcedoR,NicholsTC,etal.SustainedcorrectionofdiseaseinnaiveandAAV2-pretreatedhemophiliaBdogs:AAV2/8-mediated,liver-directedgenetherapy[J].Blood,2005,105(8):3079-3086.
技术实现思路
为解决现有技术中缺乏能有效防治Ⅱ型糖尿病合并非酒精性脂肪肝疾病的药物的不足，本专利技术的目的在于提供一种多肽S1。本专利技术的另一目的是提供一种能表达多肽S1的重组腺病毒。在本专利技术的第一方面，提供了一种SeqNo.1所示的多肽，或其药学上可接受的盐。在本专利技术的第二方面，提供了一种多核苷酸分子，它编码多肽S1，其核苷酸序列如SeqNo.2所示。在本专利技术的第三方面，提供了一种药物组合物，它含有：(a)上述多肽S1或其药学上可接受的盐；和(b)药学上可接受的载体或赋形剂。在本专利技术的第四方面，提供了一种本专利技术多肽S1或其药学上可接受的盐的用途，它们被用于制备保护肝脏及维持糖代谢稳态的药物。在另一优选例中，所述的保护肝脏及维持糖代谢稳态的药物是将多肽S1制备成注射剂、粉针剂、片剂、胶囊剂或其他的非注射途径进行使用。在本专利技术的第五方面，提供了一种本专利技术多肽S1或其药学上可接受的盐的用途，它们被用于制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病疾病的药物。在另一优选例中，所述的预防、缓解和/或治疗脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病疾病的药物是将多肽S1制备成注射剂、粉针剂、片剂、胶囊剂或其他的非注射途径进行使用。在本专利技术的第六方面，提供了一种表达多肽S1的重组腺相关病毒，是通过以下制备方法得到的：1)构建pAAV-MCS-T2A-EGFP载体：用引物PX458-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽S1，或其药学上可接受的盐，其特征在于，氨基酸序列如Seq No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种多肽S1，或其药学上可接受的盐，其特征在于，氨基酸序列如SeqNo.1所示。2.一种编码权利要求1所述的多肽的多核苷酸。3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，核苷酸序列如SeqNo.2所示。4.一种药物组合物，其特征在于，它含有：（a）权利要求1所述多肽S1或其药学上可接受的盐；和（b）药学上可接受的载体或赋形剂。5.如权利要求1所述的多肽S1或药学上可接受的盐在制备保护肝脏及维持糖代谢稳态的药物中的应用。6.如权利要求1所述的多肽S1或药学上可接受的盐在制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病疾病的药物中应用。7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的保护肝脏及维持糖代谢稳态的药物是将多肽S1制备成注射剂、粉针剂、片剂、胶囊剂或其他的非注射途径进行使用。8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的预防、缓解和/或治疗脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病疾病的药物是将多肽S1制备成注射剂、粉针剂、片剂、胶囊剂或其他的非注射途径进行使用。9.一种表达权利要求1所述多肽S1的重组腺相关病毒，其特征在于，是通过以下制备方法得到的：1）构建pAAV-MCS-T2A-EGFP载体：用引物PX458-HindIII-F和PX458-BgLII-R从质粒PX458（Addgene，48138）中扩增T2A-EGFP片段，两个引物的核苷酸序列如SeqNo.3、4所示，连接至使用HindIII和BgLII双酶切的AAV载体pAAV-MCS中，构建pAAV-T2A-EGFP载体；再合成MCS-Oligo1-SacI，其核苷酸序列如SeqNo.5，和MCS-Oligo2-KpnI，其核苷酸序列如SeqNo.6，通过变性，融合之后连入经SacI和KpnI酶切的上述pA...

【专利技术属性】
技术研发人员：李红良，王丕晓，张晓晶，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42