细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断EBOV感染中的应用制造技术

本发明专利技术公开了细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断EBOV感染中的应用。本发明专利技术所公开的细胞通路调控分子为TRAF2、TP53、CASP9、RIPK3、CASP7、CIAPIN1、TNF、BAX、CASP6、TYRO3、MSR1、MARCO、HAVCR1、IRS1、LRSAM1、TPCN2、TPCN1、ULK1、AKT2、MTOR、CASP8和LAMP2。这22个分子可以作为关键靶标分子，用于抗EBOV感染药物的设计和指导临床干预手段的策略选择，还可以作为生物分子标识，用于EBOV感染者的临床诊断。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
中，细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断EBOV感染中的应用。
技术介绍
埃博拉病毒病是由纤丝病毒科(filoviridae)的埃博拉病毒(Ebolavirus，EBOV)所引起的一种急性出血性传染病。病死率很高，可达50％～90％。埃博拉病毒基因组为单股负链RNA，约长19kb，能编码核蛋白(NP)及包膜蛋白(VP35、VP40、VP30、VP24)、糖蛋白(GP)和RNA聚合酶等7个结构蛋白，其中GP基因对EBOV复制有独特的编码和转录功能。病毒在感染细胞的胞质中复制、装配，以芽生方式释放。埃博拉病毒主要包括扎伊尔型(EBOV-Z)，苏丹型(EBOV-S)，科特迪瓦型(EBOV-C)及雷斯顿型(EBOV-R)等，不同亚型的特性不同，其中扎伊尔型毒力最强，苏丹型次之，两者对人类和非人灵长类的致死率很高。雷斯顿型和科特迪瓦型对人的毒力较低，表现为亚临床感染，但对非人灵长类具有致命性。EBOV是一种人兽共患病毒，其传播途径尚不明确，通常由与人类密切接触到感染动物的血液、分泌物、器官或其他体液造成感染，而直接接触感染者的体液等均可造成人际传播。各种非人灵长类动物和人类普遍易感。因此，感染者家属、医务人员、检验人员、在埃博拉病毒流行现场的工作人员，感染动物接触者等均是高危人群。EBOV是一种泛嗜性的病毒，可侵犯各系统器官，尤以肝、脾损害为重。本病的发生与机体的免疫应答水平有关。单核吞噬细胞系统尤其是吞噬细胞是首先被病毒攻击的靶细胞，随后成纤维细胞和内皮细胞均被感染，血管通透性增加，纤维蛋白沉着。感染后2天病毒首先在肺中检出，4天后在肝、脾等组织中检出，6天后全身组织均可检出。目前许多关于病毒致病性的研究都是在动物模型和体外实验中进行的，而关于人体病毒感染的相关研究少。病毒感染机体的每个阶段，从病毒进入细胞、局部复制、传播(病毒血症)、在靶器官内繁殖、患者康复(但仍带毒)或死亡，均存在两种因素的相互制约：病毒感染和宿主机体应答与防御。研究EBOV对人类的致病机理和免疫逃逸机制，进而根据这些关键步骤，确定新型靶标位点，研发治疗药物，对于埃博拉出血热的综合防控具有重要意义。同时，研究人体感染EBOV的反应特征，发现感染和预后特征性的分子标识，对于建立快速诊断方法、建立及时有效干预方案可以提供理论依据。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何诊断EBOV感染及如何设计治疗和/或预防EBOV感染的药物靶点。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了下述R1)-R4)中的任一应用：R1)G1作为靶点在制备治疗和/或预防EBOV感染产品中的应用；R2)所述G1作为靶点在治疗和/或预防EBOV感染中的应用；R3)检测所述G1表达水平的系统在制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品中的应用；R4)检测所述G1表达水平的系统在诊断或辅助诊断EBOV感染中的应用；所述G1为TRAF2基因、TP53基因、CASP9基因、RIPK3基因、CASP7基因、CIAPIN1基因、TNF基因、BAX基因、CASP6基因、TYRO3基因、MSR1基因、MARCO基因、HAVCR1基因、IRS1基因、LRSAM1基因、TPCN2基因、TPCN1基因、ULK1基因、AKT2基因、MTOR基因、CASP8基因和/或LAMP2基因。上述应用中，所述检测G1表达水平的系统可为利用现有技术中的方法检测所述G1表达水平所需的试剂和/或仪器，如利用高通量测序检测所述G1表达水平所需的试剂和/或仪器，或利用定量PCR检测所述G1表达水平所需的试剂和/或仪器，或利用northern杂交技术检测所述G1表达水平所需的试剂和/或仪器，或利用基因芯片检测所述G1表达水平所需的试剂和/或仪器。上述应用中，所述高通量测序可利用Illumina测序平台进行。上述应用中，所述检测G1表达水平的系统还可包括数据处理系统，所述数据处理系统用来分析现有技术中的方法直接得到的结果，确定所述G1的表达水平。所述数据处理系统可为软件和/或模块。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述M1)-M4)中的任一应用：M1)P1作为靶点在制备治疗和/或预防EBOV感染产品中的应用；M2)所述P1作为靶点在治疗和/或预防EBOV感染中的应用；M3)检测所述P1含量的系统在制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品中的应用；M4)检测所述P1含量的系统在诊断或辅助诊断EBOV感染中的应用；所述P1为TRAF2、TP53、CASP9、RIPK3、CASP7、CIAPIN1、TNF、BAX、CASP6、TYRO3、MSR1、MARCO、HAVCR1、IRS1、LRSAM1、TPCN2、TPCN1、ULK1、AKT2、MTOR、CASP8和/或LAMP2蛋白质。上述应用中，所述检测P1含量的系统可为利用现有技术中的方法检测所述P1含量所需的试剂和/或仪器，如利用质谱或其相关技术检测所述P1含量所需的试剂和/或仪器，或利用免疫杂交技术检测所述P1含量所需的试剂和/或仪器，或利用ELISA技术检测所述P1含量所需的试剂和/或仪器，或利用蛋白芯片或试纸检测所述P1含量所需的试剂和/或仪器。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述N1)或N2)的应用：N1)以上述G1作为EBOV感染标志物的诊断或辅助诊断EBOV感染方法中所用的系统在下述a1)或a2)中的应用：a1)制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品；a2)诊断或辅助诊断EBOV感染；N2)以上述P1作为EBOV感染标志物的诊断或辅助诊断EBOV感染方法中所用的系统在上述a1)或a2)中的应用。所述以上述G1作为EBOV感染标志物的诊断或辅助诊断EBOV感染方法中所用的系统可为上文所述检测G1表达水平的系统。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述W1)或W2)的产品：W1)治疗和/或预防EBOV感染产品，所述产品以上述G1为靶点；W2)治疗和/或预防EBOV感染产品，所述产品以上述P1为靶点。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述X1)或X2)的产品：X1)诊断或辅助诊断EBOV感染产品，为检测上述G1表达水平的系统；X2)诊断或辅助诊断EBOV感染产品，为检测上述P1含量的系统。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了非诊断目的的EBOV感染相关分子特征谱的构建方法。本专利技术所提供的非诊断目的的EBOV感染相关分子特征谱的构建方法包括：分别对EBOV感染组和非EBOV感染组血液中的RNA或蛋白质进行定量分析，根据分析结果获得EBOV病毒载量相关分子特征谱；所述EBOV病毒载量相关分子特征谱为上述G1或上述P1。上述方法中，所述对EBOV感染组和非EBOV感染组血液中的RNA或蛋白质进行定量分析具体还可包括：纯化EBOV感染组和非EBOV感染组血液中的RNA或蛋白质，利用Illumina测序平台检测RNA或蛋白质的含量。所述纯化EBOV感染组和非EBOV感染组血液中的RNA或蛋白质可利用带有Oligo(dT)的磁珠进行。所述利用Illumina测序平台检测RNA或蛋白质的含量可包括：将纯化后的RNA片段化，并以此为模板反转录合成双链cDNA：对所述双链cDNA进行末端修复补齐，使其5’端磷酸化，3’端加“A”；将带本文档来自技高网...

【技术保护点】
下述R1)‑R4)中的任一应用：R1)G1作为靶点在制备治疗和/或预防EBOV感染产品中的应用；R2)所述G1作为靶点在治疗和/或预防EBOV感染中的应用；R3)检测所述G1表达水平的系统在制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品中的应用；R4)检测所述G1表达水平的系统在诊断或辅助诊断EBOV感染中的应用；所述G1为TRAF2基因、TP53基因、CASP9基因、RIPK3基因、CASP7基因、CIAPIN1基因、TNF基因、BAX基因、CASP6基因、TYRO3基因、MSR1基因、MARCO基因、HAVCR1基因、IRS1基因、LRSAM1基因、TPCN2基因、TPCN1基因、ULK1基因、AKT2基因、MTOR基因、CASP8基因和/或LAMP2基因。

【技术特征摘要】
1.下述R1)-R4)中的任一应用：R1)G1作为靶点在制备治疗和/或预防EBOV感染产品中的应用；R2)所述G1作为靶点在治疗和/或预防EBOV感染中的应用；R3)检测所述G1表达水平的系统在制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品中的应用；R4)检测所述G1表达水平的系统在诊断或辅助诊断EBOV感染中的应用；所述G1为TRAF2基因、TP53基因、CASP9基因、RIPK3基因、CASP7基因、CIAPIN1基因、TNF基因、BAX基因、CASP6基因、TYRO3基因、MSR1基因、MARCO基因、HAVCR1基因、IRS1基因、LRSAM1基因、TPCN2基因、TPCN1基因、ULK1基因、AKT2基因、MTOR基因、CASP8基因和/或LAMP2基因。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测G1表达水平的系统为检测所述G1表达水平所需的试剂和/或仪器。3.下述M1)-M4)中的任一应用：M1)P1作为靶点在制备治疗和/或预防EBOV感染产品中的应用；M2)所述P1作为靶点在治疗和/或预防EBOV感染中的应用；M3)检测所述P1含量的系统在制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品中的应用；M4)检测所述P1含量的系统在诊断或辅助诊断EBOV感染中的应用；所述P1为TRAF2、TP53、CASP9、RIPK3、CASP7、CIAPIN1、TNF、BAX、CASP6、TYRO3、MSR1、MARCO、HAVCR1、IRS1、LRSAM1、TPCN2、TPCN1、ULK1、AKT2、MTOR、CASP8和/或LAMP2蛋白质。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：检测所述P1含量的系统为检测所述P1含量所需的试剂和/或仪器。5.下述N1)-N4)中任一应用：N1)以G1作为EBOV感染标志物的诊断或辅助诊断EBOV感染方法中所用的系统在下述a1)或a2)中的应用：a1)制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品；a2)诊断或辅助诊断EBOV感染；所述G1为TRAF2基因、TP53基因、CASP9基因、RIPK3基因、CASP7基因、CIAPIN1基因、TNF基因、BAX基因、CASP6基因、TYRO3基因、MSR1基因、MARCO基因、HAVCR1基因、IRS1基因、LRSAM1基因、TPCN2基因、TPCN1基因、ULK1基因、AKT2基因、MTOR基因、CASP8基因和/或LAMP2基因；N2)以P1作为EBOV感染标志物的诊断或辅助诊断EBOV感染方法中所用的系统在上述a1)或a2)中的应用；所述P1为TRAF2、TP53、CASP9、RIPK3、CASP7、CIAPIN1、TNF、BAX、CASP6、TYRO3、MSR1、MARCO、HAVCR1、IRS1、LRSAM1、TPCN2、TPCN1、ULK1、AKT2、MTOR、CASP8和/或LAMP2蛋白质；N3)以所述G1作为EBOV感染标志物在上述a1)或a2)中的应用；N4)以所述P1作为EBOV感染标志物在上述a1)或a2)中的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：王慧，李涛，刘雄，刘坤，宁年智，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11