本发明专利技术提供二甲基补骨脂素(DMFC)在制备抗多药耐药性肿瘤药物中的用途。本发明专利技术提供的DMFC的分子式为C13H10O3，分子量214。其对多药耐药肝癌细胞的杀伤作用明显优于目前常用的有代表性的抗肿瘤药物，DMFC杀死多药耐药肝癌细胞的机理是促进促凋亡基因Bim的转录并诱导肿瘤细胞凋亡。本发明专利技术提供的DMFC具有很好的制备抗多药耐药性肿瘤药物的应用前景，为临床上提供能逆转多药耐药性肝癌细胞的药物。本发明专利技术制备的DMFC药物包括制剂允许的药物赋形剂或载体，制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、滴丸剂或注射剂,给药形式主要包括口服给药或注射给药。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属制药
，涉及二甲基补骨脂素(DMFC)的新用途，即DMFC在制备抗多药耐药性肿瘤药物中的应用。
技术介绍
肿瘤化疗是治疗肿瘤的一种基本手段，但肿瘤化疗的效果会因为肿瘤细胞获得抗药性而失败，多药耐药(multipledrugresistance，MDR)指肿瘤细胞对不同结构和作用机理的多种药物产生交叉耐药性，是化疗失败的主要原因。MDR的产生机制复杂，其中一个原因与细胞凋亡过程有关，文献指出，促凋亡蛋白Bim和抗凋亡蛋白Bcl-2在肿瘤细胞凋亡过程中发挥重要作用，所以Bim表达量的减少或者Bcl-2表达量增加均会导致某些肿瘤细胞产生多药耐药性。目前临床上使用的抗癌药物，阿霉素，表阿霉素，丝裂霉素，柔红霉素，紫杉醇，长春新碱，顺铂等，均为耐药肿瘤细胞所抗。肿瘤细胞获得的抗药性，并不针对一种抗癌药，而是对多种抗癌药，即多药耐药，要增加多药耐药肿瘤细胞对药物的敏感性，办法之一就是促进/抑制Bim/Bcl-2蛋白的功能，增加其蛋白表达量的比例，从而增强肿瘤细胞的凋亡，因此研制促进/抑制这些蛋白功能的药物对肿瘤的化疗有重要意义。本专利技术所述DMFC是香豆素(coumarin)衍生物，由多种化合物进行多步反应修饰后得到。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种二甲基补骨脂素在制备抗多药耐药性肿瘤药物中的应用，具体是制备抗多药耐药性肝癌药物中的应用，是DMFC的一种新的用途，所述的二甲基补骨脂素(DMFC)是经多步化学反应修饰所得的香豆素衍生物，分子式为C13H10O3，分子量214。所述药物由DMFC与制剂允许的药物赋形剂或载体组成。DMFC的化学结构：本专利技术提供的药物，其制剂形式为液体制剂、固体制剂，主要包括颗粒剂、片剂、冲剂、软胶丸、软胶囊、滴丸剂或注射剂。本专利技术提供的药物，制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。DMFC对多药耐药肝癌细胞R-HepG2(RD)的杀伤作用明显优于紫杉醇，阿霉素，顺铂等临床常用药，DMFC杀死多药耐药肝癌细胞的机理是促进促凋亡蛋白Bim的增加并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2从而诱导肝癌细胞凋亡，目前临床上缺乏能逆转多药耐药性肿瘤的药物，因此DMFC具有很好的制备抗多药耐药性肿瘤药物的应用前景。附图说明图1：不同浓度DMFC抑制R-HepG2(RD)体外增殖比较。图2：DMFC诱导RD细胞凋亡的AnnexinⅤ-PI双染凋亡比较图。图3：DMFC诱导RD细胞PARP蛋白剪切比较图。图4：DMFC诱导RD细胞caspase蛋白剪切比较图。图5：DMFC促进/抑制Bim/Bcl-2表达比较图。图6：DMFC促进Bax活化的免疫印迹比较图。图7：DMFC促进Bim从Mcl-1中替换Bak结果图。图8：DMFC促进Bak活化的流式细胞检测比较图。图9：DMFC诱导RD细胞线粒体膜电位变化的JC-1染色比较图。图10：DMFC诱导RD细胞线粒体中细胞色素C释放比较图。图11：DMFC抑制小鼠模型实体瘤效果图。具体实施方式以下将结合具体实施例与附图详细说明本专利技术，这些实例仅用于说明目的，而不用于限制本专利技术范围。实施例一：DMFC化合物的获得实验方法1.合成：将20ml间二苯酚(70mM)和乙酰乙酸乙酯(70mM)的混合溶液在0℃逐滴加入120ml的H2SO4(12M)溶液中，恢复室温后搅拌12h。然后混合液倒入100ml冰水中，过滤收集固体后再用冰水洗涤一次。再在甲醇中重结晶得到纯白色7-羟基-4-甲基香豆素(11.12g，90％)。室温下，逐滴把将溶解于75ml丙酮和75ml二氯甲烷的K2CO3(62mM)和氯丙酮(45mM，4.16g)加入上述7-羟基-4-甲基香豆素(31mM,5.46g)中并用力搅拌。加入完成后，用薄层色谱法回流48h后冷却过滤，滤液减压蒸发后获得的残渣在甲醇中重结晶得到5.61g白色固体。在氮气环境中，将上述固体5.33g溶解在140mlNaOH(1M)中回流24h，冷却后用2M的HCl处理。得到的沉淀用冰水洗涤后在甲醇中重结晶即得到固体DMFC(4.04g)。2.实验结果：DMFC，分子式为C13H10O3，所得DMFC的化学结构如下：实施例二肝癌多药耐药细胞RD对临床抗肿瘤药的敏感性实验材料和方法：阿霉素，顺铂，紫杉醇，MTT均购自Sigma公司，Bcl-2蛋白抗体购自SantaCruz，Bim，细胞色素C等蛋白抗体购自CST。DMFC溶解在PBS中配成10mg/ml母液，置于-20℃冰箱，实验时用培养液稀释成所需浓度供用。肝癌细胞HepG2购自美国AmericanTypeCultureCollection，耐药细胞R-HepG2(RD)的建立，系由HepG2加抗癌药物阿霉素培养，存活下来的细胞继续添加较高浓度的阿霉素继代培养，不断培养一段时间后，挑选抗药性克隆建系即R-HepG2。细胞培养在DMEM培养基(Invitrogene)，添加5％小牛血清(Invitrogene)，2mM谷氨酰胺，37℃，10％CO2培养箱。四甲基偶氮唑盐(简称MTT法)检测药物对肿瘤细胞增殖的影响：选择对数生长期细胞，以1×104的密度接种于96孔板中，置37℃，10％培养箱中培养4小时后加入不同浓度的药物，每个浓度设复孔6个，培养48小时，吸出孔板中培养液，往每孔中加入浓度为1mg/ml的MTT50μl，放入培养箱中继续培养4小时，取出加过MTT的96孔板，每孔加入150μl的DMSO，轻轻震荡孔板10min，待孔底部的结晶物完全溶解后，将孔板放入酶标仪中测波长在570nm的各孔的光吸收值，记录结果，实验重复三次，用IC50软件计算半数增殖抑制浓度IC50。实验结果见表1和附图1。表1为不同浓度的临床抗肿瘤药阿霉素，顺铂和紫杉醇分别作用于RD，其半数增殖抑制浓度IC50的比较。由表中可见，RD对三种抗肿瘤药的作用，均表现出比DMFC更高的耐药性。说明RD是来自HepG2的多药耐药细胞株，且对多种抗癌药物有耐受性，尤其抗阿霉素。图1中表示不同浓度DMFC处理RD细胞后细胞的存活情况，DMFC对RD的半数增殖抑制浓度经计算为25.02μM。表1.RD对抗肿瘤药的敏感性实施例三DMFC对RD的体外增殖抑制机制AnnexinⅤ-PI双染实验：约3x105个对数生长期的肝癌RD细胞与DMFC共同孵育48h，，胰酶消化收集细胞，PBS清洗一次，加入500μl的AnnexinⅤ-FITC结合缓冲液，含25μl的AnnexinⅤ-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种二甲基补骨脂素在制备抗多药耐药性肿瘤药物中的应用，所述的二甲基补骨脂素的分子式为C13H10O3，分子量214，其特征在于，在制备抗多药耐药性肝癌药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种二甲基补骨脂素在制备抗多药耐药性肿瘤药物中的应用，所述的二甲基补骨脂素
的分子式为C13H10O3，分子量214，其特征在于，在制备抗多药耐药性肝癌药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的一种二甲基补骨脂素在制备抗多药耐药性肿瘤药物中的应用，
其特征在于，所述药物由二甲基补骨脂素与制剂允许的药...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘非燕，向军，陈超越，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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