杂交瘤细胞株XA272-907、抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及杂交瘤细胞株XA272‑907、抗体及其应用。所涉及的杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C2016110。所涉及的抗体为本发明专利技术的杂交瘤细胞株分泌的抗体。所涉及的应用为本发明专利技术的抗体用于检测人CTRP9的应用、本发明专利技术的抗体用于检测人CTRP9A的应用以及本发明专利技术的抗体用于检测十二及以上聚体形式人CTRP9的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及杂交瘤细胞、抗体及其应用，具体涉及用于检测人CTRP9的杂交瘤细胞株、抗体及其应用。
技术介绍
C1qandtumornecrosisfactorrelatedprotein9(CTRP9)是主要由脂肪细胞分泌的脂肪细胞因子，作用于肌肉和肝脏，调节全身葡萄糖和脂质代谢等。在肾脏、小肠、肺脏及成纤维细胞等器官、组织细胞中也有所表达。CTRP9由分泌信号肽、短N端可变区域、胶原区域及C端球状结构域构成，成熟蛋白不含其N端信号肽(19个氨基酸残基)。C端球状结构域与C1q结构类似，与脂联素高度相似，可以与其他蛋白或者受体相互作用，因此被认为是其功能结构域。CTRP9是具有诸多生理功能的新型脂肪因子，具有降低血糖、舒张血管及心肌保护等诸多生理作用。骨骼肌细胞中，CTRP9可以长期激活AMPK通路，增加线粒体的含量和上调脂肪酸氧化相关基因的表达，从而降低了脂肪组织的形成。在股动脉损伤模型中，CTRP9过量表达可以激活cAMP/PKA/ERK通路，抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移，大幅度降低新生内膜的形成。人脐静脉内皮细胞和新分离血管环中，重组CTRP9蛋白可以通过AMPK/eNOS通路提高一氧化氮产量使血管扩张。同时，CTRP9具有显著的缺血心肌及血管保护作用，尤其是在心肌及血管组织表达分泌量是脂联素的100倍以上，而心肌缺血损伤时其心肌分泌及血浆含量均显著降低，具有很高的特异性，CTRPs是潜在的肥胖相关心脏病病情评估的生物标记物及干预靶点，有望在治疗代谢综合征和心力衰竭等方面发挥重要作用。天然情况下，人体内存在CTRP9A和CTRP9B两种变体形式，以CTRP9A为主。CTRP9A以多聚体形式存在。三聚体是CTRP9基本聚体形式，在三聚体的基础上，会以三聚体作为基本单位形成六聚体及更高的聚合形式(高分子量聚体)。研究初步证实，CTRP9的聚体形式对其生理活性会产生影响：低聚体形式(三聚体)可能具有更好的心脏保护作用；高聚体可能更易触发负面影响机制，其减少与缺血性心脏病更相关。检测各种变体及聚体含量在基础研究和临床应用中都具有重要意义。
技术实现思路
针对现有技术的缺陷或不足，本专利技术提供一种产生抗人CTRP9各种变体及聚体单克隆抗体的杂交瘤细胞株XA272-907，该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO：C2016110，保藏地址：武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏时间：2016年6月16日。本专利技术的杂交瘤细胞株分泌产生的抗人CTRP9的单克隆抗体。本专利技术的杂交瘤细胞株产生的抗体，该抗体的序列为：重链可变区DVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSNFSWHWIRQFPGNKLEWMGYIHYSGGTNYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCACFDYWGQGTSLTVSS；CDR1序列：NFSWH；CDR2序列：YIHYSGGTNYNPSLKSRIS；CDR3序列：FDY；轻链可变区：DVLMTQTPLSLPVILGAQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGSGTKLEIK；CDR1序列：RSSQTIVHSNGNTYLE；CDR2序列：KVSNRFS；CDR3序列：FQGSHVPFT。本专利技术的抗体用于检测人CTRP9的应用。本专利技术的抗体用于检测人CTRP9A的应用。本专利技术的抗体用于检测十二及以上聚体形式人CTRP9的应用。附图说明图1为不同聚体形式的CTRP9A分离；图2、Native-PAGE免疫印迹，以纯化分离的低分子量(三聚体)、中分子量(六聚体)和高分子量(十二及以上聚体)作为样品，杂交瘤细胞株XA272-907产生的抗体作为一抗，进行Native-PAGE免疫印迹结果。图3为WesternBlot分析杂交瘤细胞株XA272-907产生的抗体对CTRP9B的识别作用；图4为重组人CTRP9A蛋白电泳图，其中：1、Marker；2、破碎上清；3、镍柱流穿液；4、500mM咪唑洗脱液；5、重组人CTRP9A蛋白；图5为重组人CTRP9B蛋白电泳图，其中：1、Marker；2、500mM咪唑洗脱液；3、重组人CTRP9B蛋白。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术做进一步的阐述。实施例是对本专利技术进行详细说明，但本专利技术并不受这些的任何限定。实施例1:本专利技术杂交瘤细胞株的制备根据人CTRP9A序列(GenBankACCESSIONNM_030945)开放阅读框序列，，进行针对大肠杆菌偏好性进行密码子优化，人CTRP9A全基因合成(序列为：ATGCAGGATACCTGCAGACAGGGTCACCCAGGTATTCCAGGTAACCCTGGTCATAATGGTCTGCCAGGTAGAGATGGTCGTGATGGTGCCAAAGGTGACAAAGGTGATGCTGGAGAGCCAGGTAGACCAGGTTCACCTGGTAAGGATGGAACCTCTGGTGAGAAGGGAGAACGTGGTGCCGACGGTAAAGTGGAAGCCAAGGGTATCAAGGGTGACCAGGGTTCTCGTGGTTCTCCAGGTAAACACGGTCCTAAAGGTTTGGCCGGTCCTATGGGAGAAAAGGGTCTGAGAGGTGAGACTGGTCCACAGGGACAGAAAGGTAACAAGGGTGACGTTGGTCCTACTGGTCCTGAGGGTCCTCGTGGTAATATTGGTCCACTGGGTCCTACCGGTCTGCCAGGTCCAATGGGTCCAATTGGTAAGCCAGGTCCAAAGGGTGAAGCTGGTCCTACCGGACCACAGGGAGAACCAGGTGTGCGTGGTATTAGAGGTTGGAAGGGTGATCGTGGAGAGAAGGGTAAAATCGGTGAGACCCTGGTGCTGCCAAAATCTGCCTTTACCGTTGGTCTGACCGTGCTGTCTAAGTTTCCTTCTTCTGATATGCCAATTAAATTTGACAAAATTCTGTACAACGAGTTCAACCATTATGACACTGCCGCCGGTAAGTTCACCTGCCATATCGCCGGTGTTTACTACTTTACCTATCATATTACCGTGTTCTCTCGTAACGTTCAGGTGTCTCTGGTGAAGAACGGTGTGAAGATCCTGCACACCAAGGACGCCTACATGTCTTCTGAGGACCAGGCTTCTGGTGGTATCGTGCTGCAGCTGAAACTGGGTGATGAGGTGTGGCTGCAGGTTACTGGTGGTGAACGTTTCAACGGTCTGTTTGCCGACGAAGATGACGACACCACCTTCACTGGATTCCTGCTGTTCTCATCTCCTTAA)，将合成的基因连接于pET30a(+)，采用IPTG(终浓度1mM)进行25℃，200rpm过夜诱导表达，4000g离心收获菌体。超声破碎后，12000g离心取上清。上清经过镍柱亲和纯本文档来自技高网...

【技术保护点】
杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C2016110。

【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCCNO：C2016110。2.权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌产生的抗人CTRP9的单克隆抗体。3.权利要求2所述的抗体，其特征在于，该抗体的序列为：重链可变区如SEQ.ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙阳，张正斌，易蔚，高超，谭延振，俞世强，宋朝君，金伯泉，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61