非交叉反应性抗IgG抗体制造技术

本发明专利技术报导了细胞系DSM ACC3006，DSM ACC3007和DSM ACC3008，以及从所述细胞系得到的抗体，和从所述细胞系得到的抗体在免疫测定中的用途。还报导了结合人或黑猩猩IgG但不结合犬和绒猴IgG的抗体，和特异性结合包含κ轻链恒定结构域的IgG1的抗体。

【技术实现步骤摘要】
本申请为2010年10月18日提交的、专利技术名称为“非交叉反应性抗IgG抗体”的PCT申请PCT/EP2010/065617的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2012年4月19日，申请号为201080047203.6。本专利技术报导了特异性结合人和黑猩猩IgG类抗体的IgG-Fab片段的恒定区的抗体及其在免疫测定中的用途。专利技术背景自从Koehler和Milstein在1974年开发了首例单克隆抗体以来，进行了许多努力以开发适用于治疗人的抗体。首例可获得的单克隆抗体已在小鼠和大鼠中被开发。在过去10年中，越来越多的人单克隆抗体或人源化单克隆抗体已进入市场。熟知的实例包括例如来自F.Hoffmann-LaRocheAG,Basel的和极大量的人或人源化抗体正在调查研究中，并在能够考虑进入人体进行初步试验以前需要在实验动物中研究。必须研究如生物可用性和抗体清除等(只提到其中2种)的重要标准。许多这些研究需要在实验动物自身抗体的背景下定量治疗抗体。在大多数情况下使用哺乳动物作为实验动物。通常最先在啮齿类如小鼠或大鼠中评估毒理学。在更高级的药物开发阶段，特别是在药物进入人体以前，甚至必须将猴子包括在这样的临床前研究中。哺乳动物循环中通常具有约10至约30毫克/ml之间的抗体。治疗单克隆抗体一般必须以范围从约1纳克/ml至约100毫克/ml之间的血清水平进行检测。因此，必须在实验动物抗体的背景下检测治疗抗体，所述实验动物抗体为约100倍至1千万倍过量。在实验动物抗体的背景下检测人或人源化治疗抗体是对药理学家的极为严峻的任务。检测动物与智人的亲缘关系越近，人或人源化抗体的检测就变得越来越困难。在WO2008/031532中报导了一种抗药物抗体测定。在WO2006/066912中报导了在实验动物中检测治疗抗体。在US5,332,665中报导了物种特异性、高亲和力的单克隆抗体。专利技术概述本专利技术首先报导了在人和黑猩猩的G型免疫球蛋白的抗体上的构象表位，其不存在于通常使用的实验动物中。其次报导了与此表位结合的非交叉反应性抗人IgG抗体和抗黑猩猩IgG抗体。第三，报导了使用这些抗体的测定。本专利技术报导的一个方面是结合人或黑猩猩IgG(G亚类的免疫球蛋白)但不结合犬和绒猴(marmoset)IgG的抗体。在一个实施方案中，所述抗体不结合犬、恒河猴(Rhesus-monkey)、绒猴、狒狒和食蟹猴(cynomolgus)IgG。在另一个实施方案中，所述抗体特异性结合人和黑猩猩IgG。在另外的实施方案中，通过表面等离子共振测定的结合人或黑猩猩IgG的KD值是10-9mol/l或更低，结合犬、恒河猴、绒猴、狒狒和食蟹猴IgG的KD值是10-6mol/l或更高。在一个实施方案中，结合人或黑猩猩IgG的KD值是10-9mol/l至10-13mol/l。在另一个实施方案中，结合犬、恒河猴、绒猴、狒狒和食蟹猴IgG的KD值不能通过表面等离子共振测定。在一个实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。本专利技术报导的另一个方面是特异性结合包含κ轻链恒定结构域的IgG1(G1亚类的免疫球蛋白)的抗体。在一个实施方案中，所述抗体还结合IgG2。在另一个实施方案中，所述抗体还结合IgG4。在另一个实施方案中，所述抗体不结合IgG3。在一个实施方案中，所述抗体不结合包含λ轻链恒定结构域的IgG1。在一个实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。本专利技术报导的从细胞系DSMACC3006(M-1.3.2),DSMACC3007(M-1.5.8)和DSMACC3008(M-1.7.10)得到的抗体与例如细胞系DSMACC2708产生的抗体M-R10Z8E9比较时显示了降低的交叉反应性，它们结合Fab区中的不同表位，不受邻近的糖基化位点的影响，并可在免疫测定中混合用于测定Fab治疗抗体，因为每种抗体的结合位点在Fab片段中仅出现1次。本专利技术报导的各方面是细胞系DSMACC3006,DSMACC3007和DSMACC3008，以及从所述细胞系得到的各个抗体和这些抗体在免疫测定中的用途。另一个方面是一种试剂盒，其包含a)从DSMACC3006,或DSMACC3007,或DSMACC3008,或DSMACC2708得到的抗体的生物素化形式，b)从DSMACC3006,或DSMACC3007,或DSMACC3008,或DSMACC2708得到的抗体的地高辛化(digoxygenylated)形式。本专利技术报导的另一个方面是检测从实验动物得到的样品中的治疗抗体的方法，其包括以下步骤a)提供待分析的样品，b)将所述样品与和本专利技术报导的抗体结合相同表位的抗体孵育，c)任选地将所述样品与适于选择性检测总治疗抗体、活性治疗抗体或结合抗原的治疗抗体的试剂孵育，和d)任选地通过校准曲线将在(b)或(c)中形成的复合物与治疗抗体的浓度相关联。本专利技术报导的另一个方面是使用包含捕获抗体和示踪抗体的抗原桥连免疫测定，进行免疫学测定从实验动物得到的样品中的治疗抗体的方法，其中所述捕获抗体和示踪抗体都独立地选自和本专利技术报导的抗体结合相同表位的抗体。在一个实施方案中，所述免疫测定是夹心免疫测定。在另一个实施方案中，抗体与其缀合配偶体的缀合通过经由抗体的氨基酸骨架的N-端和/或ε-氨基(赖氨酸)、不同赖氨酸的ε-氨基、羧基、巯基、羟基和/或酚官能团，和/或抗体的碳水化合物结构的糖醇基的化学结合进行。在另外的实施方案中，捕获抗体通过特异性结合对固定。在一个实施方案中，捕获抗体与生物素缀合并通过固定化的抗生物素蛋白或链霉抗生物素进行固定。在另一个实施方案中，示踪抗体通过特异性结合对与可检测的标记物缀合。在一个实施方案中，示踪抗体与地高辛缀合并通过针对地高辛的抗体进行与可检测的标记物的连接。在另一个实施方案中，治疗抗体是Fab。在一个实施方案中，实验动物选自绒猴和绢毛猴(tamarin)、旧大陆猴(oldworldmonkey)、侏儒狐猴和鼠狐猴(dwarfandmouselemur)、长臂猿和小猿(lesserape)、美狐猴(truelemur)家族的成员，以及其杂种。在一个实施方案中，实验动物选自狗、恒河猴、绒猴、狒狒和食蟹猴。在一个实施方案中，实验动物是猕猴(Macacamonkey)。在另一个实施方案中，结合治疗抗体但不结合实验动物的免疫球蛋白的抗体是本专利技术报本文档来自技高网...

【技术保护点】
细胞系DSM ACC3006或DSM ACC3007。

【技术特征摘要】
2009.10.19 EP 09013144.21.细胞系DSMACC3006或DSMACC3007。
2.从根据权利要求1的细胞系得到的抗体。
3.根据权利要求2的抗体在免疫测定中的用途，其中所述用途不用于
治疗或诊断目的。
4.试剂盒，其包含
a)从细胞系DSMACC3006或DSMACC3007得到的抗体作为捕获试剂，
b)从细胞系DSMACC3006或DSMACC3007得到的抗体作为检测试剂。
5.检测从实验动物得到的样品中的治疗抗体的方法，其包括以下步骤
a)提供待分析的样品，
b)将所述样品与根据权利要求2的抗体进行孵育，和
c)将在b)中形成的复合物与所述治疗抗体的浓度相关联，
其中所述方法不用于治疗或诊断目的。
6.检测从实验动物得到的样品中的治疗抗体的方法，其包括以下步骤
a)提供待分析的样品，
b)将所述样品与根据权利要求2的抗体进行孵育，
c)将所述样品与适于选择性检测总治疗抗体、活性治疗抗体或抗原结
合的治疗抗体的试剂孵育，和
d)将在c)中形成的复合物与所述治疗抗体的浓度相关联，
其中所述方法不用于治疗或诊断目的。
7.使用抗原桥连免疫测定对从实验动物得到的样品中的治疗抗体进
行免疫学测定的方法，所述抗原桥连免疫测定包含捕获抗体和示踪抗体，
特征在于所述捕获抗体和所述示踪抗体都独立地选自根据权利要求2的抗
体，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：U·埃西格，S·克洛斯特曼，F·科瓦莱夫斯基，KG·施图本拉赫，R·福格尔，U·韦塞尔斯，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH