一种用液相色谱法分离测定依普利酮及其有关物质的方法技术

本发明专利技术属分析化学领域，本发明专利技术公开了一种用液相色谱法分离测定依普利酮及其有关物质的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液‑有机相为流动相，可以定量测定依普利酮及其有关物质的含量，从而有效控制依普利酮的质量，实现依普利酮的质量可控。本发明专利技术方法专属性强，准确度高，操作简便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定依普利酮及其有关物质的方法。
技术介绍
依普利酮是一种选择性醛固酮受体拮抗药，用于治疗高血压和其他心血管疾病。对血管紧张素转换酶抑制药和血管紧张素II受体抑制药作用不佳的低肾素水平的原发性高血压患者，依普利酮有良好降压效果。此外，还可以显著减轻肾小球的超滤作用，从而减轻高血压患者的白蛋白尿，而这对于合并糖尿病的高血压患者有明显的肾脏保护作用。依普利酮的化学名为9,11α-Epoxy-7α-(methoxycarbonyl)-3-oxo-17α-pregn-4-ene-21,17-carbolactone，分子式为C24H30O6。依普利酮的结构式为：。在该化合物的生产过程中，有几个物质可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，这几个物质即药物质量控制中的有关物质，对于依普利酮的生产质量主要控制的有关物质有10个，分别是3-oxo-17α-pregn-4-ene-7α,9:21,17-dicarbolactone（有关物质1），11α,12α-epoxy-7α-(methoxycarbonyl)-3-oxo-17α-pregn-4-ene-21,17-carbolactone（有关物质2），7α-(methoxycarbonyl)-3-oxo-17α-pregna-4,9(11)-diene-21,17-carbolactone(有关物质3），（2’’R）-9,11α-epoxy-3,5’-dioxo-4’,5’-dihydro-3’H-spiro[androst-4-ene-17,2’-furan]-7α-carboxylicacid（有关物质4），9,11α-epoxy-7β-(methoxycarbonyl)-3-oxo-17α-pregn-4-ene-21,17-carbolactone（有关物质5），9,11α-epoxy-17-hydroxy-7α-(methoxycarbonyl)-3-oxo-17α-pregn-4-ene-21-carboxylicsodiumsalt（有关物质6），7α-(methoxycarbonyl)-3-oxo-17α-pregn-4-ene-21,17-carbolactone（有关物质7），pregna-4-ene-7,21-dicarboxylicacid,11,17-dihydroxy-3-oxo,g-lactone,methylester,(7α,11α,17α)-（有关物质8），(2’R,7R,10R,11R,13S)-methyl10,13-dimethyl-3,5’-dioxo-11-(tosyloxy)-1,2,3,4’,5’,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16-hexadecahydro-3’H-spiro[cyclopenta[α]phenanthrene-17,2’-furan]-7-carboxylate（有关物质9），9,11-7β-9,11α-epoxy-7α-(methoxycarbonyl)-3-oxo-17α-pregn-4-ene-21,17-carbolactone（有关物质10），结构式分别为：。对于依普利酮工艺生产过程中引入的有关物质，在原料药中是需要进行质量控制的，因此，实现依普利酮及其有关物质的分离，在依普利酮质量控制方面具有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种分析依普利酮纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现依普利酮与其有关物质的分离和测定，从而保证依普利酮的纯度，实现其终产品的质量控制。本专利技术所述的用液相色谱法分析依普利酮纯度以及分离其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相。上述所说的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，色谱柱选自Kromasil、Alltima和YMC等品牌。上述所说的有机相选自以下化合物：乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃等，优选乙腈。上述所说的方法，其流动相缓冲盐溶液-有机相采用梯度洗脱。上述所说的方法中，缓冲盐溶液选自磷酸盐、高氯酸盐，优选磷酸盐。其中缓冲盐溶液的浓度为0.02～0.1mol/L，优选浓度为0.02mol/L。本专利技术所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：1)取依普利酮样品及其有关物质适量，用乙腈或流动相溶解样品，配制成每1mL含依普利酮0.1～1.5mg的样品溶液；2)设置流动相流速为0.5～1.5mL/min，流动相流速优选为1.0mL/min，检测波长为200～250nm，最佳检测波长为240nm，柱温箱温度为10～40℃，柱温箱温度最佳为40℃；3)取1)的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成依普利酮与其有关物质的分离测定。其中：高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本专利技术采用的色谱仪为岛津高效液相色谱仪：LC-20AT泵，SPD-M20A检测器，SIL-20AC自动进样器，CBM-20A控制器，CTO-10AS柱温箱，LCsolution工作站；色谱柱：C18（YMC，150×4.6mm，3μm）；流动相：A：0.02M磷酸二氢铵，B：乙腈；按以下梯度进行洗脱：流速：1.0mL/min；检测波长：240nm；进样体积：20μL；柱温：40℃。本专利技术采用C18（YMC，150×4.6mm，3μm），能够有效的分离依普利酮及其有关物质。本专利技术解决了依普利酮及其有关物质的分离测定问题，从而减少了副反应的发生，提高了原料药终产品的收率和纯度，保证了依普利酮的质量可控。附图说明：图1为实施例1时依普利酮及其有关物质HPLC图；图2为实施例1时依普利酮HPLC图；图3为实施例2时空白溶剂HPLC图；图4为实施例2时依普利酮及其有关物质HPLC图；图5为实施例2时依普利酮HPLC图。具体实施方式：以下实施例用于进一步理解本专利技术，但不限于本实施的范围。实施例1：仪器与条件高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；色谱柱：C18（YMC，150×4.6mm，3μm）；流动相：A：0.1%磷酸水，B：磷酸-乙腈-甲醇（0.1：40：60）；按以下梯度进行洗脱：流速：1.0mL/min；检测波长：240nm；进样体积：20μL；柱温：30℃。实验步骤：取依普利酮及其有关物质适量，分别用乙腈溶解样品，配制成含依普利酮及其有关物质约1.0mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1~2，图1中保留时间为10.501min的色谱峰为依普利酮，其余色谱峰为依普利酮各有关物质的色谱峰；图2中保留时间为10.578min的色谱峰为依普利酮。实施例2：仪器与条件：高效液相色谱仪：岛津，LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；色谱柱：C18（YMC，150×4.6mm，3μm）；流动相：A：0.02M磷酸二氢铵，B：乙腈；按以下梯度进行洗脱：流速：1.0mL/min；检测波长：240nm；进样体积：20μL；柱温：40℃。实验步骤：取依普利酮及其有关物质适量，分别用乙腈溶解本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种液相色谱法分离测定依普利酮及其有关物质的方法，其特征在于：十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液‑有机相为流动相。

【技术特征摘要】
1.一种液相色谱法分离测定依普利酮及其有关物质的方法，其特征在于：十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相。2.根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自Kromasil、Alltima和YMC等品牌。3.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的有机相选自以下化合物中的一种或几种：乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃等。4.根据权利要求3所述的分离测定方法，所说的有机相优选乙腈。5.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的缓冲盐溶液选自以下缓冲盐：磷酸盐、高氯酸盐等。6.根据权利要求5所述的分离测定方法，所说的缓冲盐溶液中所含缓冲盐的浓度优选0.02mol/L。7.根据权利要求5所述的分离测定方法，所说的缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓莹，刘秋叶，
申请(专利权)人：北京万全德众医药生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11