本发明专利技术公开了下式的八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松，八肽中的AA为L-Val或L-Phe。公开了它们的制备方法，公开了它们的纳米结构，公开了它们对小鼠耳后心肌移植免疫排斥反应的抑制作用，公开了它们对二甲苯导致炎症反应的抑制作用，进一步公开了它们不像地塞米松那样会产生骨质疏松及血栓副作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松，八肽中的AA为L-Val或L-Phe残基。涉及它们的制备方法，涉及它们的纳米结构，涉及它们对小鼠耳后心肌移植免疫排斥反应的抑制作用，涉及它们对二甲苯导致炎症反应的抑制作用，进一步涉及它们不像地塞米松那样会产生骨质疏松及血栓副作用。因而本专利技术涉及八肽修饰的地塞米松在制备免疫抑制和抗炎药物的应用前景。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
通过器官移植替换废旧器官，已经成为临床外科的常规治疗手段。器官移植中免疫排斥反应是器官移植失败的最主要因素。接受器官移植的患者，术后服用地塞米松类糖皮质激素免疫抑制剂，是避免排斥反应和延长移植器官存活时间的重要措施之一。地塞米松类糖皮质激素在临床的另外的重要应用是，治疗风湿性疾病，自身免疫病和严重感染或炎性疾病。患者长期使用地塞米松类糖皮质激素，不可避免地诱发骨质疏松和血栓性疾病。目前，降低地塞米松类糖皮质激素副作用风险的唯一办法，就是停药。停药的后果是，降低疗效。改造地塞米松类糖皮质激素的结构，降低或规避副作用，是地塞米松类糖皮质激素研究的热点。专利技术人曾经用RGD四肽修饰皮质激素，制备了结构A的化合物。它们在1.43μmol/kg剂量下，可延长移植的乳鼠心肌存活时间。它们在25.5μmol/kg剂量下，可抑制小鼠炎症。它们在1.43μmol/kg剂量下，不会诱发小鼠患骨质疏松症。它们在1.43μmol/kg剂量下，是否不存在血栓形成风险，当时没有定论。结构A.专利技术人曾经公开的RGD四肽修饰的皮质激素专利技术人还曾经用尿毒素三肽修饰氢化可的松和泼尼松龙，制备了结构B的化合物。它们分别在7.5mmol/kg和2.0mmol/kg剂量下，可延长移植的乳鼠心肌存活时间。没有发现它们的抗炎活性。它们在7.5mmol/kg和2.0mmol/kg剂量下，是否不存在骨质疏松和血栓形成风险，当时没有定论。结构B.专利技术人还曾经公开的尿毒素三肽修饰的氢化可的松和泼尼松龙采用新方法改造地塞米松的结构，进一步降低用药剂量，不仅消除骨质疏松副作用，而且消除血栓形成副作用，是专利技术人一直努力发展的新技术。经过各种组合，专利技术人认识到肽与甾体五元环被五个以上原子隔离是问题之一。于是专利技术人用乙酰基代替丁二酰基，制备了下式的化合物。疗效没有明显改进。接着，专利技术人采取RGD四肽逆转连接到L-Lys的侧链氨基上的策略，制备了下式的化合物。虽然疗效没有明显改进，但是骨质疏松和血栓形成副作用都不再发生。最后，专利技术人采取尿毒素三肽Glu-Asp-Gly逆转连接到上面化合物的L-Lys的α-氨基上的策略，制备了本专利技术的化合物，达到了降低用药剂量，消除骨质疏松副作用和消除血栓形成副作用三重目标。根据这些研究，专利技术人提出了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术要解决的第一个技术问题是，提出下式的八肽修饰的地塞米松结构。式中AA为L-Val和L-Phe残基。本专利技术要解决的第二个技术问题是，提供制备八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松的方法，该化合物包括三大步骤：1)在DMSO中，NaH催化地塞米松17位羟乙酰基的羟基与溴乙酸乙酯脱HBr，将17位羟乙酰基转化为乙氧羰基甲氧乙酰基。再在NaOH溶液中将17位乙氧羰基甲氧乙酰基转化为17位羧甲氧乙酰基；2)按照标准的液相接肽法，逐步接肽，将L-Boc-Lys的侧链氨基与羧端游离的全保护的RGDV或RGDF的羧端偶联，将L-Lys的羧端与α-氨基游离的全保护的Glu-Asp-Gly的N端偶联，制备全保护的八肽Fmoc-Lys[AA-Asp(OMe)-Gly-Arg(Tos)-Boc)]-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl，然后在20％哌啶的DMF溶液中脱Fmoc制备N游离的全保护八肽Lys[AA-Asp(OMe)-Gly-Arg(Tos)-Boc)]-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl，式中AA为L-Val或L-Phe残基；3)在HATU，HOBt和NMM存在下，在无水DMF中，先将步骤1得到的地塞米松-17-羧酸与步骤2得到的Lys[AA-Asp(OMe)-Gly-Arg(Tos)-Boc)]-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl偶联，再在三氟乙酸中用三氟甲磺酸脱去全部保护基，制得权利要求1的八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松(式中AA为L-Val或L-Phe残基)。本专利技术要解决的第三个技术问题是，评价八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松(式中AA为L-Val或L-Phe残基)延长小鼠耳后移植心肌存活时间。本专利技术要解决的第四个技术问题是，评价八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松(式中AA为L-Val或L-Phe残基)抑制小鼠炎症的活性。本专利技术要解决的第五个技术问题是，评价八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松(式中AA为L-Val或L-Phe残基)抑制大鼠血栓形成的活性。本专利技术要解决的第六个技术问题是，评价八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松(式中AA为L-Val或L-Phe残基)抑制小鼠骨质疏松的活性。附图说明图1八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松(式中AA为L-Val或L-Phe残基)的合成路线.i)DMSO，BrCH2CO2C2H5，NaH；ii)MeOH，NaOH；iii)DCC，HOBt，NMM；iV)4NHCl/EtOAc，v/v)H2，Pt/C；vi)HATU，HOBt，NMM；vii)20％哌啶/DMF；viii)TFMSA，TFA。图2浓度为1.43×10-6M的八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松(式中AA为L-Val或L-Phe残基)在水溶液中的透射电镜照片。图3化合物对小鼠耳后心肌移植心肌存活的影响，n＝10，口服给药，0.1μmol/kg/day，连续给药15天。具体实施方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。实施例1制备Boc-Asp(OBzl)-Gly-OBzl称取17.6g(54.2mmol)Boc-Asp(OBzl)，7.3g(53.9mmol)HOBt，干燥四氢呋喃(THF)溶解，冰浴下搅拌，向其中滴加THF溶解的13.4g(65.0mmol)DCC，搅拌活化30分钟后，加入12.0g(59.6mmol)HCl·Gly-OBzl，NMM调pH＝8，室温反应12小时，TLC(CH2Cl2/MeOH＝20/1本文档来自技高网...
【技术保护点】
下式的八肽Lys(AA‑Asp‑Gly‑Arg)‑Glu‑Asp‑Gly修饰的地塞米松，式中AA为L‑Val或L‑Phe残基。
【技术特征摘要】
1.下式的八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松，
式中AA为L-Val或L-Phe残基。
2.制备权利要求1的八肽Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-Glu-Asp-Gly修饰的地塞米松的方法，
该方法包括三大步骤：
1)在DMSO中，NaH催化地塞米松17位羟乙酰基的羟基与溴乙酸乙酯脱HBr，将17位
羟乙酰基转化为乙氧羰基甲氧乙酰基。再在NaOH溶液中将17位乙氧羰基甲氧乙酰基转化
为17位羧甲氧乙酰基；
2)按照标准的液相接肽法，逐步接肽，将L-Boc-Lys的侧链氨基与羧端游离的全保护
的RGDV或RGDF的羧端偶联，将L-Lys的羧端与α-氨基游离的全保护的Glu-Asp-Gly的N端
偶联，制备全保护的八肽Fmoc-Lys[AA-Asp(OMe)-Gly-
Arg(Tos)-Boc)]-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl，然后在20％哌啶的DMF溶液中脱Fmoc制备
N游离的全保护八肽Lys[AA-Asp(OMe)-Gly-Arg(Tos)-Boc)]-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，王玉记，吴建辉，于化龙，
申请(专利权)人：北京益生康华医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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