一种提高姬松茸液体发酵产物产量及产物活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高姬松茸液体发酵产物产量及产物活性的方法，包括步骤：(1)将由山茱萸5‑30重量份、生地黄5‑30重量份、甘草5‑30重量份和银杏叶5‑30重量份组成的中药材经水溶液提取，得到中药复合水提液；(2)将步骤(1)制备的中药复合水提液、银杏内酯及蔗糖脂肪酸酯加入发酵基础培养基中，得到姬松茸发酵培养基；(3)将姬松茸菌种接入步骤(2)制得的姬松茸发酵培养基中，经液体发酵，得到发酵液，然后分离得到发酵产物。本发明专利技术针对姬松茸菌种的特性，向发酵培养基中添加山茱萸、生地黄、甘草和银杏叶四种中药的中药复合提取物、银杏内酯及蔗糖脂肪酸酯可显著提高姬松茸的生物量和多糖产量，同时多糖的活性也有明显的提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于发酵工程领域，具体涉及一种提高姬松茸液体发酵产物产量及产物活性的方法。
技术介绍
姬松茸(AgaricusblazeiMurill)又名巴西蘑菇，在分类上隶属担子菌纲伞菌目蘑菇科蘑菇属。姬松茸味道鲜美，子实体干品蛋白质含量高于香菇等常食食用菌；矿质元素含量高，种类丰富；亦富含人体必需氨基酸和不饱和脂肪酸。姬松茸营养极其丰富，而且组配合乎人体健康要求，尤其引人注目的是医药保健价值。据报道，其多糖含量较高，特别是所含甘露聚糖对抑制肿瘤(尤其是腹水癌)、增强精力、防治心血管病等都有神效。正是由于有如此诱人的营养价值和医疗保健功能，所以近年来在日本掀起食用姬松茸热，被日本食用菌业和医学界称为“奇迹的蘑菇”，“地球上的最后食品”。研究表明，姬松茸多糖在防癌、抗肿瘤、降低血糖、提高机体免疫力、防治心血管疾病等方面效果奇特。姬松茸菌粉内含多糖、甾醇类及谷氨酸、γ-氨基丁酸、色氨酸、赖氨酸等19种氨基酸，还含有维生素和微量元素等多种成分。现代药理学研究表明，姬松茸具有诸多医疗保健功能，如免疫调节、神经调节和内分泌调节功能(王伟,孙彬,张玉,等.几种特色食用菌功能活性成分的研究进展[J].浙江农业科学,2015,56(11):1786-1791；段县平,马吉飞,刘炳才,等.姬松茸活性成分抗病毒作用的研究进展[J].动物科学与动物医学,2004,21(5):15-17)。因此，姬松茸具有很好的研究和应用的前景，将来姬松茸制剂可能在功能食品开发和医疗保健事业上作出重要贡献，造福于人类。中国专利ZL201410262434.9公开了一种姬松茸营养粉及其生产方法，该方法是以姬松茸固态发酵菌种，以玉米和小麦为培养基，采用固态发酵方法，制成含有姬松茸菌丝体及其代谢物的固态发酵产物。但是通过这种方法制备出的胞外多糖产量较低，产出效率不高。中国专利申请CN01129715.8公开了姬松茸大规模液体深层发酵工艺，该方法成功地建立了姬松茸10吨罐及10吨罐以上发酵工艺，打破了以往姬松茸发酵只限于小试而不能工业化大规模生产的局限，所得的姬松茸菌丝干粉得率达0.80％-1.20％，每百克菌丝干粉的姬松茸多糖含量达到5-7克。但是该工艺产物的活性并未得到显著的改善。中国专利申请CN201510126057.0公开了一种添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基、发酵工艺及发酵制品，该方法主要以添加废弃山药皮的液体发酵培养基进行姬松茸液体发酵培养，可以缩短发酵时间，提高发酵效率，还可以提高发酵液中多糖黄酮的总含量、姬松茸菌丝体的生物量及菌丝体中多糖黄酮的含量。随着微生物研究的深入以及分离技术和结构鉴定的不断发展，研究发现真菌的液体发酵技术简易可行，通过添加中药进行液体培养，除能够大量增殖菌丝或孢子，还可在发酵液中得到多糖、多肽、生物碱、萜类化合物、甾醇、酶、核酸、氨基酸、维生素、植物激素等多种具有生理活性的物质，这些物质具有抗癌、抗炎、抗菌、抗溃疡和抗衰老等功效。由于有些中药不仅可以为发酵物质提供营养成分，还能促进其活性物质的生产，所以不少学者通过中药材作为液体发酵培养基的成分，来增强药效和使其产生协同作用。通过向培养基中添加适量中药成分或油脂类物质，能够显著促进食药用真菌的生长或提高活性代谢产物的产量，具有生长速度快、周期短、产率高、产物活性大等优点。中药成分与真菌的生长代谢过程存在着相互关联，中药成分有可能参与真菌的代谢途径，影响其胞外多糖积累和生物合成的相关酶，如葡糖磷酸异构酶(PGI)是糖酵解(EMP)途径中的重要酶，α-葡糖磷酸变位酶(α-PGM)是与胞外多糖(EPS)合成相关的重要酶。文献报道薏苡仁脂能较大幅度地提高灵芝多糖的产量，进而研究了薏苡仁脂对灵芝多糖EMP途径中关键酶α-PGM和PGI活性的影响(ZhouHuabin,BiPengyang,WuXiangting,etal.ImprovedpolysaccharideproductioninsubmergedcultureofGanodermalucidumnbytheadditionofcoixenolide[J].AppliedBiochemistryandBiotechnology,2014,172(3):1497-1505.)。在液体发酵时，中药中的活性成分可能被微生物转化或修饰，产生新的物质。代谢产物活性的改变可能是培养基中添加中药后，刺激或抑制了真菌活性物质的代谢量，或是真菌在生长代谢过程中对某些中药成分进行了生物转化，产生了新的次生代谢产物，从而改变代谢产物的活性。另外，中药材的种类差异、真菌的种类差异等因素的变化也会给液体发酵带来难以预料的结果。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种提高姬松茸液体发酵产物产量及产物活性的方法。本专利技术针对姬松茸菌种的特性，向发酵培养基中添加山茱萸、生地黄、甘草和银杏叶四种中药的中药复合提取物、银杏内酯和表面活性剂，进行姬松茸的液体发酵培养，有助于提高姬松茸生物量和次生代谢产物的含量，同时促进代谢产物活性提高。一种提高姬松茸液体发酵产物产量及产物活性的方法，包括步骤：(1)将由山茱萸5-30重量份、生地黄5-30重量份、甘草5-30重量份和银杏叶5-30重量份组成的中药材经水溶液提取，得到中药复合水提液；(2)将步骤(1)制备的中药复合水提液、银杏内酯及蔗糖脂肪酸酯加入发酵基础培养基中，得到姬松茸发酵培养基；(3)将姬松茸菌种接入步骤(2)制得的姬松茸发酵培养基中，经液体发酵，得到发酵液，然后分离得到发酵产物。本专利技术采用含中药提取物的中药复合水提液配制姬松茸发酵培养基较直接采用中药材效果更好。步骤(1)中，所述的中药复合水提液的制备可采用本领域常规的水提法，优选采用以下方法：按所述量称取中药材，粉碎(优选过60目-100目的粉末)，加占中药材总重量3倍-8倍量的水浸泡1h-2h，然后加热煎熬，保持温和的沸腾状态40min-80min，过滤收集提取液；重复提取2次-3次，合并滤液，得到中药复合水提液。步骤(2)中，所述的银杏内酯可采用市售产品，也可以采用现有的方法制备；如可采用王琳等在《快速高效提取并检测银杏内酯的一种新方法》一文中记载的银杏内酯制备方法进行制备(王琳，朱缨，吴纪凯.快速高效提取并检测银杏内酯的一种新方法.实用医学杂志，2014，31(4)：336-339)；具体可采用以下制备方法：银杏叶适当粉碎，加入占银杏叶重量7倍量的质量百分浓度70％乙醇水溶液回流提取2次，3h/次，合并提取液，减压回收乙醇，加适量水至3倍药材重量水沉，静置，过滤，浓缩，冷冻干燥制得银杏内酯。所述的姬松茸发酵培养基每100mL中含有以生药材量计为2.1g-3.0g的中药复合水提液、0.1g-0.4g的银杏内酯及0.3g-0.5g的蔗糖脂肪酸酯。所述的发酵基础培养基可采用本领域液体发酵常用的发酵基础培养基，优选的发酵基础培养基为:葡萄糖3g/100ml、酵母粉0.5g/100ml、蛋白胨0.4g/100ml、KH2PO40.2g/100ml和MgSO40.05g/100ml。步骤(3)中，所述的姬松茸菌种可采用任意一种姬松茸菌种，可采用市售产品。所述的姬松茸菌种的接入方法为本领域的常规方法，包括：将活化后的姬松茸菌种，接入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高姬松茸液体发酵产物产量及产物活性的方法，其特征在于，包括步骤：(1)将由山茱萸5‑30重量份、生地黄5‑30重量份、甘草5‑30重量份和银杏叶5‑30重量份组成的中药材经水溶液提取，得到中药复合水提液；(2)将步骤(1)制备的中药复合水提液、银杏内酯及蔗糖脂肪酸酯加入发酵基础培养基中，得到姬松茸发酵培养基；(3)将姬松茸菌种接入步骤(2)制得的姬松茸发酵培养基中，经液体发酵，得到发酵液，然后分离得到发酵产物。

【技术特征摘要】
1.一种提高姬松茸液体发酵产物产量及产物活性的方法，其特征在于，包括步骤：(1)将由山茱萸5-30重量份、生地黄5-30重量份、甘草5-30重量份和银杏叶5-30重量份组成的中药材经水溶液提取，得到中药复合水提液；(2)将步骤(1)制备的中药复合水提液、银杏内酯及蔗糖脂肪酸酯加入发酵基础培养基中，得到姬松茸发酵培养基；(3)将姬松茸菌种接入步骤(2)制得的姬松茸发酵培养基中，经液体发酵，得到发酵液，然后分离得到发酵产物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的姬松茸发酵培养基每100mL中含有以生药材量计为2.1g-3.0g的中药复合水提液、0.1g-0.4g的银杏内酯及0.3g-0.5g的蔗糖脂肪酸酯。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的发酵基础培养基:葡萄糖3g/100ml、酵母粉0.5g/100ml、蛋白胨0.4g/100ml、KH2PO40.2g/100ml和MgSO40.05g/100ml。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的中药复合水提液的制备方法包括：按所述量称取中药材，粉碎，加占中药材总重量3倍-8倍量的水浸泡1h-2h，然后加热煎熬，保持温和的沸腾状态40min-80min，过滤收集提取液；重复提取2次-3次，合并滤液，得到中药复合水提液。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的姬松茸菌种的接入方法包括：将活化后的姬松茸菌种接入灭菌后的液体种子培养基中培养，得到培养好的种子液，然后将培养好的种子液接入步骤(2)制得...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丹丹，贺亮，程俊文，李肖娟，金李洁，方良珍，李其，
申请(专利权)人：杭州雪域生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33