一种去壁灵芝孢子粉的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种去壁灵芝孢子粉的制备方法。本发明专利技术根据灵芝孢子壁壳成分的理化特性，通过在发酵阶段先接入乳酸克鲁维酵母发酵，再配合交变磁场短时发酵，然后再接入罗伊氏乳杆菌发酵，利用特定的发酵过程在降解灵芝孢子壁壳的同时将壁壳中的几丁质等成分进行发酵转化，又能很好地使孢子粉内的三萜和多糖类有效成分释放出来，制得的去壁灵芝孢子粉无壁壳残留，壁壳成分全部生物转化，生物活性得到显著提高。

【技术实现步骤摘要】
一种去壁灵芝孢子粉的制备方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种去壁灵芝孢子粉的制备方法。
技术介绍
灵芝(GanodermaLucidumKarst)，又称为瑞草、神芝、仙草、瑶草、还阳草、林中灵、菌灵芝、万年蕈、灵草、赤芝、丹芝、琼珍等，是一种多孔菌科真菌灵芝的子实体，其外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形。灵芝是中国传统的食药两用的名贵药材，具有扶正固本等功效，在明代大医学家李时珍编著的《本草纲目》中有灵芝的记载。灵芝孢子是灵芝在生长成熟期从灵芝菌盖中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞即灵芝的种子。大量现代药理学研究及临床案例证实灵芝孢子粉对免疫系统、神经系统、内分泌和代谢系统以及心血管系统等都具有很好的调节作用。灵芝孢子凝聚了灵芝的精华，含有大量的灵芝多糖、三萜类、灵芝孢子油等活性成分，具有灵芝的全部遗传物质和保健作用。从细胞结构上看，灵芝孢子具有双层壁结构，双层壁由几丁质和葡聚糖构成，质地较为坚韧，占比达50％-70％。几丁质为广泛存在于自然界的一种含氮多糖类生物性高分子。实验表明，灵芝孢子壁阻碍有效成分的溶出，影响体内吸收，因此目前绝大部分产品都采用不同的破壁工艺粉碎孢子壁，以期提高活性成分体内生物利用度，增强治疗效果。未破壁的灵芝孢子只有约12％的有效成分能被人体吸收，而破壁后其吸收率可达95％以上，其抗肿瘤、抗氧化和免疫调节作用更加显著。目前灵芝孢子粉的破壁方法有物理、化学及生物法。物理破壁的方法如机械粉碎对孢子粉进行物理破壁得到破壁灵芝孢子粉，该方法虽然操作简单易行，破壁率较高，但其破壁时间长、能耗高，破壁过程中大量产热，会导致部分热敏物质失活，易导致有效物质的流失及破坏，同时破壁产品中容易混入机械杂质，易造成重金属污染等。化学法也易导致有效物质的流失及破坏。生物法是采用酶解、微生物发酵等温和手段，能有效地保存灵芝孢子功效成分，同时具有能量消耗小、破壁效果好等优点。但是现有的生物酶解法采用微生物发酵使灵芝孢子粉破壁普遍存在发酵周期长、壁壳去除率低、有效成分含量低等问题。现有灵芝孢子粉的破壁方法，破壁后双层壁中的几丁质等仍然存在，与壁内有效成分混合在一起，难以去除，孢子中活性成分含量低的问题仍没有得到根本解决。中国专利CN104013652B公开了一种灵芝孢子粉的精制工艺与综合利用方法及其用途，精制工艺为：在破壁后对破壁的灵芝孢子粉进行去壁精制，用体积分数为20％-95％的乙醇溶液和水浸泡后，分离壁壳，得到去壁灵芝孢子粉滤液和灵芝孢子粉壁壳，壁灵芝孢子粉滤液经浓缩得到浓缩液，浓缩液经干燥得到精制灵芝孢子粉，或浓缩液采用一步制粒法直接制得精制灵芝孢子粉制剂或制剂中间体；灵芝孢子粉壁壳经过化学提取的综合回收利用工艺，制得二氯甲烷提取固体粉末、乙酸乙酯提取固体粉末、正丁醇提取固体粉末、壁壳水提物固体粉末和壳聚糖。该工艺操作复杂，有机溶剂使用较多，工业化生产成本高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有破壁灵芝孢子粉制备工艺的不足，提供一种高效、快速、安全、可控的去壁灵芝孢子粉的制备方法，以提高灵芝孢子粉产品的品质和附加值，为产业发展提供可行的思路和方法。本专利技术根据灵芝孢子壁壳成分的理化特性，通过在发酵阶段先接入乳酸克鲁维酵母发酵，再配合交变磁场短时发酵，然后再接入罗伊氏乳杆菌发酵，利用特定的发酵过程在降解灵芝孢子壁壳的同时将壁壳中的几丁质等成分进行发酵转化，又能很好地使孢子粉内的三萜和多糖类有效成分释放出来，制得的去壁灵芝孢子粉无壁壳残留，且壁壳成分全部生物转化，生物活性得到显著提高。为了实现以上目的，本专利技术采用的技术方案是：一种去壁灵芝孢子粉的制备方法，包括步骤：(1)前处理：灵芝孢子粉原料经去杂质和干燥，得到干燥的灵芝孢子粉；(2)乳酸克鲁维酵母种子液的制备：将活化后的乳酸克鲁维酵母菌种接种于液体种子培养基A中培养5h-24h，得到乳酸克鲁维酵母种子液；(3)罗伊氏乳杆菌种子液的制备：将活化后的罗伊氏乳杆菌菌种接种于液体种子培养基B中培养5h-24h，得到罗伊氏乳杆菌种子液；(4)灵芝孢子粉壁壳的生物降解：将步骤(1)中干燥的灵芝孢子粉和水混合配制成灵芝孢子粉浓度为5g/L-20g/L的液体发酵培养基，灭菌冷却后，在液体发酵培养基中接入乳酸克鲁维酵母种子液，培养10h-60h，然后置于交变磁场环境中再培养1h-10h，灭菌冷却后再接入罗伊氏乳杆菌种子液，培养10h-60h，所得发酵液经干燥，得到去壁灵芝孢子粉。由于本专利技术主要是利用乳酸克鲁维酵母发酵配合交变磁场短时发酵以及罗伊氏乳杆菌发酵来实现灵芝孢子壁壳成分全部生物转化，灵芝孢子壁壳完全降解完全，从而使壁壳内的灵芝三萜、多糖等有效成分释放出来，得到完全没有壁壳残留的灵芝孢子粉。因此，本专利技术所述制备方法中参数在所述范围内变化并不影响去壁灵芝孢子粉的制备及其专利技术效果，因此本专利技术制备方法中任意参数的组合均可实现去壁灵芝孢子粉的制备并达到本专利技术的效果。本专利技术所使用的原料均为现有，在所述范围内任意替换对专利技术效果无明显影响。为了达到更好的专利技术效果，进行以下优选：步骤(1)中，灵芝孢子粉原料经过筛除去杂质，再经水洗离心除去杂质后得到湿灵芝孢子粉，烘干后得到干燥的灵芝孢子粉。所述灵芝孢子粉原料选用现有的灵芝孢子粉(含有灵芝孢子壁壳)，含有灵芝孢子壁壳的灵芝孢子粉原料可采用本专利技术方法进行去壁，可直接采用市售产品也可按现有方法制备，例如可选用未破壁的灵芝孢子粉、现有的破壁灵芝孢子粉(如市售的破壁灵芝孢子粉)、灵芝孢子粉经提取后的残余物等中的一种或两种以上。所述灵芝孢子粉原料选用两种以上时用量比例没有特别的限制，可为任意比例。步骤(2)中，所述菌种可采用任意一种乳酸克鲁维酵母菌种(Kluyveromyceslactis)，均可达到本专利技术的效果；可采用市售产品，例如：乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)ACCC20054，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心。步骤(3)中，所述罗伊氏乳杆菌菌种可采用任意一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)菌种，均可达到本专利技术的效果；可采用市售产品，例如：罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)ACCC00652，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心。所述活化后的乳酸克鲁维酵母菌种、活化后的罗伊氏乳杆菌菌种在液体种子培养基中培养的温度均为自然环境温度，优选为20℃-37℃，进一步优选乳酸克鲁维酵母菌种的培养温度为20℃-35℃、罗伊氏乳杆菌菌种的培养温度为25℃-37℃。一般1L液体种子培养基中接入1cm2-4cm2大小活化后的乳酸克鲁维酵母菌种菌块或者1cm2-4cm2大小活化后的罗伊氏乳杆菌菌种菌块。乳酸克鲁维酵母菌种的活化方法、罗伊氏乳杆菌菌种的活化方法均为本领域常规的菌种活化方法，一般包括：将斜面保藏的菌种接种到PDA平板培养基上，在22℃-30℃活化培养3天-10天，得到活化后的菌种。所述PDA平板培养基采用本领域种子培养常用的培养基，可采本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种去壁灵芝孢子粉的制备方法，其特征在于，包括步骤：/n(1)前处理：灵芝孢子粉原料经去杂质和干燥，得到干燥的灵芝孢子粉；/n(2)乳酸克鲁维酵母种子液的制备：将活化后的乳酸克鲁维酵母菌种接种于液体种子培养基A中培养5h-24h，得到乳酸克鲁维酵母种子液；/n(3)罗伊氏乳杆菌种子液的制备：将活化后的罗伊氏乳杆菌菌种接种于液体种子培养基B中培养5h-24h，得到罗伊氏乳杆菌种子液；/n(4)灵芝孢子粉壁壳的生物降解：将步骤(1)中干燥的灵芝孢子粉和水混合配制成灵芝孢子粉浓度为5g/L-20g/L的液体发酵培养基，灭菌冷却后，在液体发酵培养基中接入乳酸克鲁维酵母种子液，培养10h-60h，然后置于交变磁场环境中再培养1h-10h，灭菌冷却后再接入罗伊氏乳杆菌种子液，培养10h-60h，所得发酵液经干燥，得到去壁灵芝孢子粉。/n

【技术特征摘要】
1.一种去壁灵芝孢子粉的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(1)前处理：灵芝孢子粉原料经去杂质和干燥，得到干燥的灵芝孢子粉；
(2)乳酸克鲁维酵母种子液的制备：将活化后的乳酸克鲁维酵母菌种接种于液体种子培养基A中培养5h-24h，得到乳酸克鲁维酵母种子液；
(3)罗伊氏乳杆菌种子液的制备：将活化后的罗伊氏乳杆菌菌种接种于液体种子培养基B中培养5h-24h，得到罗伊氏乳杆菌种子液；
(4)灵芝孢子粉壁壳的生物降解：将步骤(1)中干燥的灵芝孢子粉和水混合配制成灵芝孢子粉浓度为5g/L-20g/L的液体发酵培养基，灭菌冷却后，在液体发酵培养基中接入乳酸克鲁维酵母种子液，培养10h-60h，然后置于交变磁场环境中再培养1h-10h，灭菌冷却后再接入罗伊氏乳杆菌种子液，培养10h-60h，所得发酵液经干燥，得到去壁灵芝孢子粉。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述乳酸克鲁维酵母种子液的用量为液体发酵培养基体积的1％-15％。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述罗伊氏乳杆菌种子液的用量为液体发酵培养基体积的1％-10％。

【专利技术属性】
技术研发人员：程俊文，贺亮，李肖娟，金李洁，方良珍，李其，
申请(专利权)人：杭州雪域生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33