一种强力霉素广谱单克隆抗体及制备工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种强力霉素广谱单克隆抗体及制备工艺，按照重量份数由如下原料制成：强力霉素40‑52份、四环素4‑20份、米诺环素2‑6份、美他环素2‑4份、牛血清白蛋白3‑5份、弗氏完全佐剂5‑8份、弗氏不完全佐剂1‑2份、HRP‑羊抗鼠IgG2‑3份、硫酸铵3‑6份、磷酸氢二钠9‑10份、磷酸二氢钾16‑20份、柠檬酸12‑16份、磷酸二氢铵8‑12份、无水乙醇9‑15份、氯甲酸异丁酯1‑3份、包被缓冲液2‑4份、封闭液5‑7份、洗涤缓冲液3‑4份、底物6‑10份、细胞培养液20‑25份，以强力霉素和对氨基苯乙酸为主要原料，采用重氮法制备出具有抗血清特异性的强力霉素广谱单克隆抗体，具有优良的生物性能，且该抗体的抗血清效价、抑制性较好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及强力霉素抗体制备工艺领域，具体涉及一种强力霉素广谱单克隆抗体及制备工艺。
技术介绍
强力霉素是四环素类抗生素的重要成员之一，在畜牧兽医临床应用很广泛，随着我国畜牧业的快速发展，养殖场(小区)在利益的驱使下，不合理滥用兽药导致药物在动物可食性组织中蓄积残留，这种行为不仅造成耐药菌产生，而且严重影响了我国畜牧产品的出口，造成重大经济损失，也给广大消费者身心健康带来极大的危害，此外，饲养者还存在不符合用药剂量、给药部位和用药动物种类等用药规定，以及重复使用几种商品名称不同但成分相同药物的现象，因此，加强对动物源食品中兽药残留监测非常必要。
技术实现思路
针对以上问题，本专利技术提供了一种强力霉素广谱单克隆抗体及制备工艺，以强力霉素和对氨基苯乙酸为主要原料，加入一定量的亚硝酸钠溶液、碳酸钠溶液、盐酸，采用重氮法制备出具有抗血清特异性的强力霉素广谱单克隆抗体，具有优良的生物性能，可以有效解决
技术介绍
中的问题。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种强力霉素广谱单克隆抗体，按照重量份数由如下原料制成：强力霉素40-52份、四环素4-20份、米诺环素2-6份、美他环素2-4份、牛血清白蛋白3-5份、弗氏完全佐剂5-8份、弗氏不完全佐剂1-2份、HRP-羊抗鼠IgG 2-3份、硫酸铵3-6份、磷酸氢二钠9-10份、磷酸二氢钾16-20份、柠檬酸12-16份、磷酸二氢铵8-12份、无水乙醇9-15份、氯甲酸异丁酯1-3份、包被缓冲液2-4份、封闭液5-7份、洗涤缓冲液3-4份、底物6-10份、细胞培养液20-25份。根据上述技术方案，所述包被缓冲液选用浓度为0.05mol/L，PH值为9.6的碳酸盐缓冲液。根据上述技术方案，所述封闭液使用2g进口明胶，加入包被缓冲液100ml中煮沸趁热过滤所得。根据上述技术方案，所述底物配制是将10mg的四甲基联苯胺溶于5ml无水乙醇中，将其0.5mL与10mL底物缓冲液混合，再加入10ul的30%的H2O2。根据上述技术方案，所述细胞培养液选用浓度为0.2mol/L的L-谷氨酸溶液。另外本专利技术还设计了一种强力霉素广谱单克隆抗体的制备工艺，包括如下步骤：（1）将0.4g强力霉素溶于5mL碳酸钠溶液；（2）将151mg对氨基苯乙酸溶于2mL HCL(0.3mol/L)，冷却至4℃；（3）4℃避光条件下，边搅拌边往（2）液中缓慢滴加亚硝酸钠溶液；反应过程始终用淀粉-碘化钾试纸监控，当试纸变蓝，停止滴加；（4）将（1）中的液体缓慢滴入（3）液中。（5）用HCL（0.1mol/L）调PH到3.6，继续4℃避光搅拌30min；（6）真空抽滤，得到红色沉淀，50mL超纯水冲洗，烘干；（7）装于安培瓶密封4℃保存。根据上述技术方案，所述步骤（1）中，碳酸钠溶液的浓度为0.1mol/L。根据上述技术方案，所述步骤（3），滴入的亚硝酸钠溶液的浓度为0.1mol/L；所述步骤（4）中，需要在4℃避光条件下，搅拌30min，直到出现红色沉淀为止。本专利技术的有益效果：本专利技术以强力霉素和对氨基苯乙酸为主要原料，加入一定量的亚硝酸钠溶液、碳酸钠溶液、盐酸，采用重氮法制备出具有抗血清特异性的强力霉素广谱单克隆抗体，具有优良的生物性能。附图说明图1为本专利技术发泡保温时间与泡径的关系曲线图。图2为本专利技术不同PbO加入量与发泡温度的示意图。图3为本专利技术PbO与密度的示意图。图4为本专利技术PbO加入量与高密度泡沫玻璃力学性能的示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1：一种强力霉素广谱单克隆抗体，按照重量份数由如下原料制成：强力霉素40份、四环素4份、米诺环素2份、美他环素2份、牛血清白蛋白3份、弗氏完全佐剂5份、弗氏不完全佐剂1份、HRP-羊抗鼠IgG 2份、硫酸铵3份、磷酸氢二钠9份、磷酸二氢钾16份、柠檬酸12份、磷酸二氢铵8份、无水乙醇9份、氯甲酸异丁酯1份、包被缓冲液2份、封闭液5份、洗涤缓冲液3份、底物6份、细胞培养液20份。所述包被缓冲液选用浓度为0.05mol/L，PH值为9.6的碳酸盐缓冲液；所述封闭液使用2g进口明胶，加入包被缓冲液100ml中煮沸趁热过滤所得；所述底物配制是将10mg的四甲基联苯胺溶于5ml无水乙醇中，将其0.5mL与10mL底物缓冲液混合，再加入10ul的30%的H2O2；所述细胞培养液选用浓度为0.2mol/L的L-谷氨酸溶液。其制备工艺，包括如下步骤：（1）将0.4g强力霉素溶于5mL碳酸钠溶液，所述碳酸钠溶液的浓度为0.1mol/L；（2）将151mg对氨基苯乙酸溶于2mL HCL(0.3mol/L)，冷却至4℃；（3）4℃避光条件下，边搅拌边往（2）液中缓慢滴加亚硝酸钠溶液，滴入的亚硝酸钠溶液的浓度为0.1mol/L；反应过程始终用淀粉-碘化钾试纸监控，当试纸变蓝，停止滴加；（4）将（1）中的液体缓慢滴入（3）液中，在4℃避光条件下，搅拌30min，直到出现红色沉淀为止。（5）用HCL（0.1mol/L）调PH到3.6，继续4℃避光搅拌30min；（6）真空抽滤，得到红色沉淀，50mL超纯水冲洗，烘干；（7）装于安培瓶密封4℃保存。实施例2：一种强力霉素广谱单克隆抗体，按照重量份数由如下原料制成：强力霉素46份、四环素12份、米诺环素4份、美他环素3份、牛血清白蛋白4份、弗氏完全佐剂6.5份、弗氏不完全佐剂1.5份、HRP-羊抗鼠IgG 2.5份、硫酸铵4.5份、磷酸氢二钠9.5份、磷酸二氢钾18份、柠檬酸14份、磷酸二氢铵10份、无水乙醇12份、氯甲酸异丁酯2份、包被缓冲液3份、封闭液6份、洗涤缓冲液3.5份、底物8份、细胞培养液22.5份。所述包被缓冲液选用浓度为0.05mol/L，PH值为9.6的碳酸盐缓冲液；所述封闭液使用2g进口明胶，加入包被缓冲液100ml中煮沸趁热过滤所得；所述底物配制是将10mg的四甲基联苯胺溶于5ml无水乙醇中，将其0.5mL与10mL底物缓冲液混合，再加入10ul的30%的H2O2；所述细胞培养液选用浓度为0.2mol/L的L-谷氨酸溶液。其制备工艺，包括如下步骤：（1）将0.4g强力霉素溶于5mL碳酸钠溶液，所述碳酸钠溶液的浓度为0.1mol/L；（2）将151mg对氨基苯乙酸溶于2mL HCL(0.3mol/L)，冷却至4℃；（3）4℃避光条件下，边搅拌边往（2）液中缓慢滴加亚硝酸钠溶液，滴入的亚硝酸钠溶液的浓度为0.1mol/L；反应过程始终用淀粉-碘化钾试纸监控，当试纸变蓝，停止滴加；（4）将（1）中的液体缓慢滴入（3）液中，在4℃避光条件下，搅拌30min，直到出现红色沉淀为止。（5）用HCL（0.1mol/L）调PH到3.6，继续4℃避光搅拌30min；（6）真空抽滤，得到红色沉淀，50mL超纯水冲洗，烘干；（7）装于安培瓶密封4℃保存。实施例3：一种强力霉素广谱单克隆抗体，按照重量份数由如下原料制成：强力霉素52份、四环素20份、米诺环素6份、美他环素4份、牛血清白蛋白5份、弗氏完全佐剂8份、弗氏不完全佐剂2份、HRP-羊抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种强力霉素广谱单克隆抗体，其特征在于，按照重量份数由如下原料制成：强力霉素40‑52份、四环素4‑20份、米诺环素2‑6份、美他环素2‑4份、牛血清白蛋白3‑5份、弗氏完全佐剂5‑8份、弗氏不完全佐剂1‑2份、HRP‑羊抗鼠IgG 2‑3份、硫酸铵3‑6份、磷酸氢二钠9‑10份、磷酸二氢钾16‑20份、柠檬酸12‑16份、磷酸二氢铵8‑12份、无水乙醇9‑15份、氯甲酸异丁酯1‑3份、包被缓冲液2‑4份、封闭液5‑7份、洗涤缓冲液3‑4份、底物6‑10份、细胞培养液20‑25份。

【技术特征摘要】
1.一种强力霉素广谱单克隆抗体，其特征在于，按照重量份数由如下原料制成：强力霉素40-52份、四环素4-20份、米诺环素2-6份、美他环素2-4份、牛血清白蛋白3-5份、弗氏完全佐剂5-8份、弗氏不完全佐剂1-2份、HRP-羊抗鼠IgG 2-3份、硫酸铵3-6份、磷酸氢二钠9-10份、磷酸二氢钾16-20份、柠檬酸12-16份、磷酸二氢铵8-12份、无水乙醇9-15份、氯甲酸异丁酯1-3份、包被缓冲液2-4份、封闭液5-7份、洗涤缓冲液3-4份、底物6-10份、细胞培养液20-25份。2.根据权利要求1所述的一种强力霉素广谱单克隆抗体，其特征在于，所述包被缓冲液选用浓度为0.05mol/L，PH值为9.6的碳酸盐缓冲液。3.根据权利要求1所述的一种强力霉素广谱单克隆抗体，其特征在于，所述封闭液使用2g进口明胶，加入包被缓冲液100ml中煮沸趁热过滤所得。4.根据权利要求1所述的一种强力霉素广谱单克隆抗体，其特征在于，所述底物配制是将10mg的四甲基联苯胺溶于5ml无水乙醇中，将其0.5mL与10mL底物缓冲液混合，再加入10ul的30%的H2O2。5.根据权利要求1所述的一种强力霉素广谱单克隆抗体，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王作弟，
申请(专利权)人：陕西思尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61