改性心磷脂包被的纳米磁珠及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种改性心磷脂包被的纳米磁珠及其制备方法，改性心磷脂包被的纳米磁珠包括：改性心磷脂、生物素衍生物和链霉亲和素磁珠；改性心磷脂与生物素衍生物通过‑NH‑CO‑结构从而将改性心磷脂和生物素衍生物连接到一起；链霉亲和素磁珠为结合了链霉亲和素的纳米磁珠，生物素衍生物和链霉亲和素连接。这种改性心磷脂包被的纳米磁珠通过化学键直接将改性心磷脂牢固与生物素衍生物牢固的连接，生物素衍生物和链霉亲和素磁珠表面的链霉亲和素连接。这种改性心磷脂包被的纳米磁珠可以直接用于抗磷脂抗体的检测，并且相对于传统物理吸附心磷脂的方法制备的检测产品，具有较高的稳定性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外检测领域，尤其涉及一种改性心磷脂包被的纳米磁珠及其制备方法。
技术介绍
抗心磷脂抗体是一种能与多种含有磷脂结构的抗原物质发生反应的抗体，抗原为参与多种细胞膜组成的带负电荷的磷脂成分。临床上主要存在于抗磷脂综合征、各种自身免疫性疾病和梅毒感染患者体内。抗磷脂综合症(APS)包括多种自身性免疫性疾病，多见于年轻人，男女发病比率约为2：8。患者可出现一种或多种表现，可累及多个系统、器官，主要有：静脉和动脉血栓形成、血小板减少症、习惯性流产、心肌病、心脏病、大脑和肾脏梗塞、肺高压。恶性APS可表现为短期内进行性广泛血栓形成，造成多器官功能衰竭甚至死亡。可继发于系统性红斑狼疮或者其它自身免疫病，但也可单独出现(原发抗磷脂综合征)。梅毒患者体内也能产生抗磷脂抗体，梅毒是由螺旋体细菌梅毒密螺旋体引起的性传播疾病。据报道，每年有超过5百万人感染梅毒，其中包括通过先天性传染的3万名婴儿。梅毒可于患者体内潜伏和隐藏许多年，并可导致各种各样的临床表现。其中处于梅毒隐藏期的患者并无临床症状，次阶段在约三分之二未治疗病人中持续终生。感染者在隐藏期不具有传染性，然而处于隐藏期的母亲所生的孩子可能感染先天性梅毒。抗磷脂抗体检测试验被广泛应用于磷脂综合征诊断以及梅毒的非密螺旋体试验。该检测具有廉价、快速和方便对大量样本执行的优点。此外，由于抗磷脂抗体的浓度会随着梅毒的治疗成功而逐渐降低，而梅毒感染的特异性抗体密螺旋体抗体会持续数年甚至终生都高。因此抗磷脂抗体检测试验被认为是监测梅毒治疗的更好选择。传统的检测抗磷脂抗体的主要方法是将心磷脂用物理吸附的方式涂抹在特定的固体如酶标板上面，然后利用附着在酶标板上面的心磷脂与待检测样本中的抗磷脂抗体结合，实现对样本中的抗磷脂抗体的捕获。通过对捕获的抗磷脂抗体显色并测定发光浓度，就能间接的读取样本中的抗磷脂抗体浓度。由于用物理吸附方式固定的心磷脂在溶剂、加热等外部条件影响下容易从固体板上解离和脱落，因此通过该方法制备的检验产品的稳定性较差。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种用于检测抗心磷脂抗体的稳定性较好的改性心磷脂包被的纳米磁珠及其制备方法。一种改性心磷脂包被的纳米磁珠，包括：改性心磷脂、生物素衍生物和链霉亲和素磁珠；所述改性心磷脂为心磷脂的疏水性脂肪酸侧链被氧化并氨基化得到，所述改性心磷脂含有-NH2；所述生物素衍生物的结构式为：其中，所述-R-为含有4个～20个碳原子的饱和烷基链或含有2个～10个碳原子的聚乙二醇链，所述改性心磷脂中的-NH2与所述生物素衍生物中的-COOH生成-NH-CO-结构从而将所述改性心磷脂和所述生物素衍生物连接到一起；所述链霉亲和素磁珠为结合了链霉亲和素的纳米磁珠，所述生物素衍生物和所述链霉亲和素连接。在一个实施例中，所述-R-为含有4个～10个碳原子的饱和烷基链。在一个实施例中，所述改性心磷脂含有一个-NH2。在一个实施例中，所述改性心磷脂的结构式如下：一种上述的改性心磷脂包被的纳米磁珠的制备方法，包括如下步骤：将心磷脂和过氧化物在第一溶剂存在的条件下充分反应，得到中间产物；向所述中间产物中加入过量氨水并充分反应，得到改性心磷脂，其中，所述改性心磷脂的疏水性脂肪酸侧链被氧化并氨基化，所述改性心磷脂含有氨基；将所述改性心磷脂和N-羟基丁二酰亚胺活化的生物素衍生物在第二溶剂存在的条件下充分反应，得到生物素衍生物结合的改性心磷脂，其中，所述生物素衍生物的结构式为：其中，所述-R-为含有4～20个碳原子的碳链或含有2～10个碳原子的聚乙二醇链，所述改性心磷脂中的-NH2与所述生物素衍生物中的-COOH生成-NH-CO-结构从而将所述改性心磷脂和所述生物素衍生物连接到一起生成所述生物素衍生物结合的改性心磷脂；以及将所述生物素衍生物结合的改性心磷脂和链霉亲和素磁珠混合并充分反应，得到改性心磷脂包被的纳米磁珠，其中，所述链霉亲和素磁珠为结合了链霉亲和素的纳米磁珠，所述生物素衍生物和所述链霉亲和素连接。在一个实施例中，所述将心磷脂和过氧化物在第一溶剂存在的条件下充分反应的操作中，所述过氧化物为过氧苯甲酸、间氯过氧苯甲酸、过氧乙酸或过氧丙酸，所述心磷脂和所述过氧化物的摩尔比为1：1～8，所述第一溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、氯仿、苯或甲苯。在一个实施例中，所述向所述中间产物中加入过量氨水并充分反应的操作中，所述氨水的质量浓度为10％～30％。在一个实施例中，所述将所述改性心磷脂和N-羟基丁二酰亚胺活化的生物素衍生物在第二溶剂存在的条件下充分反应的操作中，所述第二溶剂为DMSO、DMF、四氢呋喃或pH为6.5～8.5的磷酸盐缓冲液。在一个实施例中，所述将所述改性心磷脂和N-羟基丁二酰亚胺活化的生物素衍生物在第二溶剂存在的条件下充分反应的操作中，所述改性心磷脂与所述N-羟基丁二酰亚胺活化的生物素衍生物的摩尔比为1：1.5～20。在一个实施例中，所述将所述生物素衍生物结合的改性心磷脂和链霉亲和素磁珠混合并充分反应的操作中，所述生物素衍生物结合的改性心磷脂的浓度为0.1mg/mL～1mg/mL，所述链霉亲和素磁珠的浓度为5mg/mL～15mg/mL。这种改性心磷脂包被的纳米磁珠通过化学键直接将改性心磷脂牢固与生物素衍生物牢固的连接，生物素衍生物和链霉亲和素磁珠表面的链霉亲和素连接，相对于物理吸附的方式，更加易于控制磁珠表面的改性心磷脂量，并且可以通过调节-R-的长度，实现改性心磷脂量与纳米磁珠之间的距离的控制，更好的保留了改性心磷脂量与抗磷脂抗体结合的空间。这种改性心磷脂包被的纳米磁珠可以直接用于抗磷脂抗体的检测，并且相对于传统物理吸附心磷脂的方法制备的检测产品，具有较高的稳定性。附图说明图1为一实施方式的改性心磷脂包被的纳米磁珠的制备方法的流程图。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。一实施方式的改性心磷脂包被的纳米磁珠，包括：改性心磷脂、生物素衍生物和链霉亲和素磁珠。心磷脂是由3个甘油、2个磷酸以及4个长链不饱和烷基构成的酯类物质，该结构含有2个亲水性中心以及4条疏水性侧链。心磷脂的结构式如下：改性心磷脂为心磷脂的疏水性脂肪酸侧链被氧化并氨基化得到，改性心磷脂含有-NH2。由于心磷脂有4条侧链，心磷脂改性时4条侧链可以同时被氧化，因此该改性心磷脂可能包含多个-NH2。具体来说，该改性心磷脂可以包含1个～8个-NH2。优选的，改性心磷脂含有一个-NH2。特别优选的，改性心磷脂的结构式如下：生物素衍生物的结构式为：其中，-R-为含有4个～20个碳原子的饱和烷基链或含有2个～10个碳原子的聚乙二醇链。改性心磷脂中的-NH2与生物素衍生物中的-COOH生成-NH-CO-结构从而将改性心磷脂和生物素衍生物连接到一起。优选的，-R-为含有4个～10个碳原子的饱和烷基链。特别优选的，-R-为-(CH2)6-。由于心磷脂分子的尺寸非常小，可改造的空间严重不足，对亲水性的磷酸酯中心进行修本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改性心磷脂包被的纳米磁珠，其特征在于，包括：改性心磷脂、生物素衍生物和链霉亲和素磁珠；所述改性心磷脂为心磷脂的疏水性脂肪酸侧链被氧化并氨基化得到，所述改性心磷脂含有‑NH2；所述生物素衍生物的结构式为：其中，所述‑R‑为含有4个～20个碳原子的饱和烷基链或含有2个～10个碳原子的聚乙二醇链，所述改性心磷脂中的‑NH2与所述生物素衍生物中的‑COOH生成‑NH‑CO‑结构从而将所述改性心磷脂和所述生物素衍生物连接到一起；所述链霉亲和素磁珠为结合了链霉亲和素的纳米磁珠，所述生物素衍生物和所述链霉亲和素连接。

【技术特征摘要】
1.一种改性心磷脂包被的纳米磁珠，其特征在于，包括：改性心磷脂、生物素衍生物和链霉亲和素磁珠；所述改性心磷脂为心磷脂的疏水性脂肪酸侧链被氧化并氨基化得到，所述改性心磷脂含有-NH2；所述生物素衍生物的结构式为：其中，所述-R-为含有4个～20个碳原子的饱和烷基链或含有2个～10个碳原子的聚乙二醇链，所述改性心磷脂中的-NH2与所述生物素衍生物中的-COOH生成-NH-CO-结构从而将所述改性心磷脂和所述生物素衍生物连接到一起；所述链霉亲和素磁珠为结合了链霉亲和素的纳米磁珠，所述生物素衍生物和所述链霉亲和素连接。2.根据权利要求1所述的改性心磷脂包被的纳米磁珠，其特征在于，所述-R-为含有4个～10个碳原子的饱和烷基链。3.根据权利要求1所述的改性心磷脂包被的纳米磁珠，其特征在于，所述改性心磷脂含有一个-NH2。4.根据权利要求3所述的改性心磷脂包被的纳米磁珠，其特征在于，所述改性心磷脂的结构式如下：5.一种权利要求1～4中任一项所述的改性心磷脂包被的纳米磁珠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将心磷脂和过氧化物在第一溶剂存在的条件下充分反应，得到中间产物；向所述中间产物中加入过量氨水并充分反应，得到改性心磷脂，其中，所述改性心磷脂的疏水性脂肪酸侧链被氧化并氨基化，所述改性心磷脂含有氨基；将所述改性心磷脂和N-羟基丁二酰亚胺活化的生物素衍生物在第二溶剂存在的条件下充分反应，得到生物素衍生物结合的改性心磷脂，其中，所述生物素衍生物的结构式为：其中，所述-R-为含有4～20个碳原子的碳链或含有2～10个碳原子的聚乙二醇链，所述改性心磷脂中的-NH2与所述生物素衍生物中的-COOH生成-NH-CO-结构从而将所述改性心磷脂和所述生物素衍生物连接到一起生...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏福臻，邹定标，王刚，叶小琴，钱纯亘，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44