一种治疗酒精性肝损伤的药物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种治疗酒精性肝损伤的药物的制备方法，主要采用春季柽柳的细嫩枝叶作为药物原料，其具体制作步骤如下：（1）采用春季柽柳细嫩枝叶，干燥后粉碎，过80目筛，提取条件为料物比=1:10（g/ml）；（2）在80%乙醇中浸泡2‑3天，用滤纸过滤除去不溶物，无菌滤器除菌，用旋转蒸发仪除去乙醇；（3）收集提取物，密封、避光、冷藏备用；本发明专利技术的药物采用全天然原料制作而成，对治疗酒精性肝损伤疗效显著、副作用较少。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种药物的制备方法，尤其涉及一种治疗酒精性肝损伤的药物的制备方法。
技术介绍
随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，人群中嗜酒者出现增多和年轻化趋势。在我国饮酒已成为导致肝损害的第二大病因，仅次于肝炎病毒感染。长期大量饮酒可以引起酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD），表现为早期酒精性脂肪肝，继而可发展为酒精性肝炎、酒精性肝纤维化，最终发展为酒精性肝硬化，甚至肝癌。目前，临床上针对ALD的常用药虽然有一定的疗效，但都不同程度地存在毒副作用大、治疗靶点单一和费用昂贵等缺点，而中药以其疗效显著、副作用相对较少的特点，越来越受到人们重视，为ALD的治疗提供了一条崭新的思路。柽柳（Tamarix chinensis Lour）是一种柽柳属植物，其化学成分主要为黄酮类、三萜类、有机酸及挥发油等，具有保肝、抗炎、抗氧化、抑菌、抗肿瘤等生物活性。柽柳对多种类型的肝脏损伤具有保护作用，如四氯化碳，乙酰氨基酚等药物诱导的肝损伤，而关于其解酒的功效，早在我国古代的医学著作《本草纲目》、《本经逢原》、《药性纂要》中就有相关记载，但是目前关于柽柳在ALD中的应用及作用机制的研究较少。
技术实现思路
本专利技术就是针对上述问题，提出一种治疗酒精性肝损伤的药物的制备方法，该药物以柽柳为主要原料，该药物治疗酒精性肝损伤疗效显著、副作用较少。为达到上述技术目的，本专利技术采用了一种治疗酒精性肝损伤的药物的制备方法，主要采用春季柽柳的细嫩枝叶作为药物原料，其具体制作步骤如下：（1）采用春季柽柳细嫩枝叶，干燥后粉碎，过80目筛，提取条件为料物比=1:10（g/ml）；（2）在80%乙醇中浸泡2-3天，用滤纸过滤除去不溶物，无菌滤器除菌，用旋转蒸发仪除去乙醇；（3）收集提取物，密封、避光、冷藏备用。在本专利技术中，所述的柽柳乙醇提取物主要成分包括黄酮类化合物及三萜类化合物。本专利技术的药物采用全天然原料制作而成，对治疗酒精性肝损伤疗效显著、副作用较少。附图说明图1所示的是本专利技术的实验中小鼠肝脏损伤指标的变化示意图；图2所示的是本专利技术的实验中小鼠肝脏中氧化应激指标的变化。具体实施方式下面结合附图具体实施方式对本专利技术作进一步详细地说明。一种治疗酒精性肝损伤的药物的制备方法，主要采用春季柽柳的细嫩枝叶作为药物原料，其具体制作步骤如下：（1）采用春季柽柳细嫩枝叶，干燥后粉碎，过80目筛，提取条件为料物比=1:10（g/ml）；（2）在80%乙醇中浸泡2-3天，用滤纸过滤除去不溶物，无菌滤器除菌，用旋转蒸发仪除去乙醇；（3）收集提取物，密封、避光、冷藏备用。在本专利技术中，所述的柽柳乙醇提取物主要成分包括黄酮类化合物及三萜类化合物。为了证明本专利技术药物的使用安全性，本专利技术的药物采用小鼠作为实验品进行了验证。具体描述如下：1、准备材料及器具（1）动物和饲料：SPF级雄性C57BL/6J小鼠共80只，6-8周龄，22-25g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，合格证号 SCXK2014-0004，饲养于山东省医学科学院基础研究所实验动物房 IVC（智能型独立送回风净化笼具）中，室温22-25℃，相对湿度55%-60%，光暗周期12h/12h，每隔1天换一次垫料。Lieber-DeCarli酒精液体饲料和对照饲料购自南通特洛菲饲料科技有限公司。（2）试剂与仪器，兔抗鼠NLRP3（Lot. No.84111P141）、Caspase-1（Lot. No.10N318）抗体购自博士德生物公司，兔抗鼠ASC抗（Cat.No.1050-1-AP）购自Proteintech公司，兔抗鼠 IL-1β抗体（Lot.No.GR264200-1）购自Abcam 公司，Percoll分离液购自Solarbio公司，辣根酶标记山羊抗兔IgG购自中杉金桥公司，SABC免疫组化试剂盒购自博士德生物公司，谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase，ALT）、谷草转氨酶（glutamic oxaloacetic transaminase，AST）、甘油三酯（triglyceride，TG）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）试剂盒均购自南京建成公司。Leica DM4000B 光学显微、LeicaQWin V3 图像分析软件购自德国徕卡仪器有限公司，荧光酶标仪购自美国Biotek公司。2、使用方法（1）小鼠ASH模型的建立及分组给药，采用慢性酒精喂养加急性酒精灌胃法（NIAAA法）建立小鼠酒精性肝损伤模型，主要过程为：液体饲料适应喂养5d、酒精液体饲料造模10d、酒精灌胃1次。小鼠随机分为5组：①正常对照组（Ctrl）：每天给予对照液体饲料（不含酒精），保持小鼠每天热量摄入与模型组一致；②模型组（EtOH）：给予Lieber-DeCarli酒精液体饲料；③阳性对照组（EtOH+GSH）：给予Lieber-DeCarli酒精液体饲料，还原型谷胱甘肽200 mg-1·kg-1·d-1；④柽柳低剂量组（EtOH+T.-L）：给予Lieber-DeCarli酒精液体饲料，柽柳100 mg-1·kg-1·d-1；⑤柽柳高剂量组（EtOH+T.-H）：给予Lieber-DeCarli酒精液体饲料，柽柳200 mg-1·kg-1·d-1。柽柳灌胃给药，GSH腹腔注射给药，在造模期连续给药10d。实验期间每天观察各组小鼠的精神活动、反应能力、毛色等一般状态。（2）取材，造模结束后，模型组小鼠用31.5%（V/V）的酒精灌胃一次，对照组用等热量的麦芽糖糊精灌胃，9h后称重，摘眼球取血，颈椎脱臼处死小鼠，取肝脏称重，一部分用于流式细胞检测，一部分用4%中性甲醛固定，剩余肝脏组织分装保存于-80℃冰箱待检。根据公式：肝脏系数=肝重/小鼠体重×100%，计算肝脏指数。（3）血清和肝组织相关指标检测，按照试剂盒说明书测定血清ALT和TG活性，用生理盐水制备10%的肝脏匀浆，按照试剂盒说明书测定肝脏匀浆上清液中AST、MDA含量及SOD活力。（4）肝脏组织形态学及组织中脂质沉积检测 将已固定组织脱水，石蜡包埋，切片，进行HE染色，显微镜下观察肝脏组织病理改变，取肝脏组织制作冰冻切片，油红O避光染色30min，60％异丙醇冲洗后进行苏木素染色，明胶封片，光学显微镜下观察细胞内脂质蓄积情况。（5）免疫组化法检测NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β的表达及结果判定，将小鼠肝组织石蜡切片经30% H2O2溶液灭活内源性过氧化物酶、柠檬酸缓冲液微波抗原修复、10%山羊血清封闭后，滴加一抗4℃孵育过夜，1×PBS洗3遍，再经生物素标记的山羊抗兔IgG 37℃孵育1小时，1×PBS洗4遍，之后滴加SABC试剂，然后DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片，镜下观察。同时设阴性对照，用PBS代替一抗或二抗。判定标准：在C57BL /6J小鼠肝脏中，NLRP3、ASC、Caspase-1主要表达于胞浆，IL-1β表达在胞浆、胞膜和细胞间隙，我们将胞浆内存在不同程度黄色颗粒的细胞判定为阳性细胞。参考双评分半定量法对染色结果进行评分，在400倍高倍镜下随机选取10本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗酒精性肝损伤的药物的制备方法，其特征在于，主要采用春季柽柳的细嫩枝叶作为药物原料，其具体制作步骤如下：（1）采用春季柽柳细嫩枝叶，干燥后粉碎，过80目筛，提取条件为料物比=1:10（g/ml）；（2）在80%乙醇中浸泡2‑3天，用滤纸过滤除去不溶物，无菌滤器除菌，用旋转蒸发仪除去乙醇；（3）收集提取物，密封、避光、冷藏备用。

【技术特征摘要】
1.一种治疗酒精性肝损伤的药物的制备方法，其特征在于，主要采用春季柽柳的细嫩枝叶作为药物原料，其具体制作步骤如下：（1）采用春季柽柳细嫩枝叶，干燥后粉碎，过80目筛，提取条件为料物比=1:10（g/ml）；（2）在80%乙醇中浸泡2...

【专利技术属性】
技术研发人员：王恒孝，张钰，韩琛，
申请(专利权)人：山东省医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37