一种原花青素B2分子印迹聚合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于分子印迹聚合物技术领域，具体涉及一种原花青素B2金属配位分子印迹聚合物及其制备方法和应用。本发明专利技术通过将原花青素B2、金属化合物与功能单体在溶剂中混合，再加入交联剂和引发剂，在保护气体中进行聚合反应，然后对聚合物进行洗脱、干燥后，获得原花青素B2金属配位分子印迹聚合物。并通过固相萃取，将制得的聚合物作为填料，用于原花青素B2快速、高效的分离纯化。本发明专利技术的制备方法简单、可靠，所得的分子印迹聚合物具有较强的特异选择性和较高的回收率，在原花青素的分离纯化领域应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子印迹聚合物
，具体涉及一种原花青素B2金属配位分子印迹聚合物及其制备方法和应用。
技术介绍
原花青素是由儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C6或C4-C8共价相联组成的聚合体，它能清除人体内过剩自由基，提高人体免疫力，可作为防癌、抗突变、防治心血管疾病药物的主要有效成分和用作安全无毒的新型抗氧化剂。原花青素B2是由两个表儿茶素聚合而成的二聚体(分子结构式见图1)，有研究表明，它是原花青素中抗氧化活性最强的单体，可作为衡量原花青素质量的标志性成分。由于原花青素B2在聚合体中含量较低，而且与其它聚合体的结构和性质相近，这对其分离造成了极大的困难。因此，目前国内外关于原花青素B2单体等相关成熟的制备分离工艺还极少。分子印迹聚合物是将功能单体在模板分子存在条件下进行交联聚合，然后洗脱除去模板分子制得的聚合物,它在空间结构和功能基排布上具有与目标分子互补结构的空穴,对模板分子具有“记忆”功能，从而对目标分子具有可预定的选择性。由于分子印迹聚合物具有选择性强、化学性质稳定、对环境的耐受性好、制备简单等优点，目前已被应用于中药活性成分分离、固相萃取、仿生传感器、模拟酶催化等领域。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的之一在于提供一种能够快速、高效的分离纯化原花青素B2的金属配位分子印迹聚合物。本专利技术的目的之二是提供了所述原花青素B2金属配位分子印迹聚合物的制备方法。本专利技术的目的之三是提供了所述原花青素B2金属配位分子印迹聚合物的应用。本专利技术是通过以下技术方案来实现的：一种原花青素B2金属配位分子印迹聚合物，包括模板分子、金属化合物、四氢呋喃/甲醇、功能单体、交联剂和引发剂；按摩尔比计算，模板分子和金属化合物的摩尔比为1:1～1:3，模板分子与功能单体的摩尔比为1:3～1:8，功能单体与交联剂的摩尔比为1:4～1:6，引发剂与功能单体的摩尔比为1:50～1:20；按摩尔体积比计算，模板分子与四氢呋喃/甲醇的比例为1:10～1:15(mmol/ml)。较佳地，所述的金属化合物为氯化铜、醋酸锌或硝酸铝。较佳地，所述的功能单体为α-甲基丙烯酸、对乙烯基苯甲酸或2-乙烯基吡啶。较佳地，所述的交联剂为二乙烯基苯(DVB)、季戊四醇三丙烯酸酯(PETA)或乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)。较佳地，所述的引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)、偶氮二异丁酸二甲酯(AIBME)或偶氮二环己基甲腈(ACCN)。制备所述原花青素B2金属配位分子印迹聚合物的方法，具体为：(1)、将模板分子原花青素B2和金属化合物加入到所述量的四氢呋喃/甲醇溶液中，超声震荡1～1.5h，使金属离子和原花青素B2充分配位；(2)、向步骤(1)溶液中加入所述量的功能单体，超声震荡1～1.5h，使功能单体、金属离子和原花青素B2充分反应；(3)、向步骤(2)溶液中加入所述量的引发剂和交联剂，超声震荡15～20min，充氮10min后真空密封，50～60℃恒温水浴热引发聚合24h，得到聚合物；(4)、聚合物烘干后研磨粉碎过200目筛，于甲醇溶液中反复清洗去除过细颗粒。将得到的聚合物在索氏提取器中用乙酸/甲醇的溶液抽提、洗脱模板分子原花青素B2，直至回流液中用高效液相色谱在280nm处检测不到为止；然后EDTA溶液洗涤除去残留在聚合物中的金属离子，最后用水和甲醇重复洗涤pH至中性，放入真空干燥箱中干燥，得到原花青素B2金属配位分子印迹聚合物。较佳地，所述四氢呋喃/甲醇的体积比为1:4。较佳地，所述乙酸/甲醇的体积比为8:2～9:1。较佳地，所述EDTA溶液浓度为1～4mmol/L。所述原花青素B2金属配位分子印迹聚合物的使用方法：把制得的原花青素B2金属配位分子印迹聚合物装入固相萃取柱，加入甲醇溶液淋湿固相萃取柱后，将原花青素提取液上样(茶籽壳、葡萄籽等原料中提取)，吸附完毕后采用乙酸/甲醇(体积比为8:2～9:1)的溶液洗脱，经浓缩、干燥后得到高纯度的原花青素B2产品。本专利技术的有益效果：(1)、目前，原花青素B2的研究主要局限于含量测定和痕量分析，制备工艺主要通过大孔树脂吸附、凝胶柱层析、制备型高效液相色谱等多种分离和分析手段，存在步骤繁琐、成本高昂、产品杂质多等缺点，采用本专利技术能够单一的选择性分离原花青素B2，具有操作简单、成本低廉、选择性好等优点。(2)、采用本专利技术方法制备的原花青素B2聚合物具有很高的强度和稳定性，可以重复使用，产业化前景广阔。用扫描电镜分别观察原花青素B2洗脱前后聚合物的表面形态，发现洗脱前后印迹聚合物表面的结构有显著不同：原花青素B2被洗脱前聚合物表面相对均匀、平滑；原花青素B2被洗脱后印迹聚合物表面多孔、凹凸不平，表明聚合物具有较多空穴和活性结合位点(见图4、图5)。(3)、目前，大部分分子印迹聚合物的制备过程是在弱极性溶剂中进行。从结构上分析,原花青素B2含有多个羟基,其极性较大而不易溶于非极性或弱极性溶剂。而引入金属离子，利用金属离子的配位作用，可以制备出具有较高选择识别能力的配位分子印迹聚合物，适合在强极性溶液中分离纯化原花青素B2，从而扩大分子印迹技术的应用范围。附图说明图1原花青素B2的分子结构式。图2原花青素B2标准品的HPLC图谱。图3原花青素B2产品的HPLC图谱。图4原花青素B2洗脱前分子印迹聚合物的扫描电镜图片。图5原花青素B2洗脱后分子印迹聚合物的扫描电镜图片。具体的实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细说明，以助于本领域技术人员理解本专利技术。实施例1：一种原花青素B2金属配位分子印迹聚合物的制备方法及其应用：(1)、将1mmol模板分子原花青素B2和1mmol氯化铜加入到10ml的四氢呋喃/甲醇(体积比1:4)溶液中，超声震荡1h，使金属离子和原花青素B2充分配位。(2)、向步骤(1)溶液中加入3mmol的α-甲基丙烯酸，超声震荡1h，使α-甲基丙烯酸、铜离子和原花青素B2充分反应。(3)、向步骤(2)溶液中加入12mmol的交联剂二乙烯基苯(DVB)和0.1mmol偶氮二异丁腈(AIBN)引发剂，超声震荡15min，充氮10min后真空密封，50℃恒温水浴热引发聚合24h，得到聚合物。(4)、聚合物烘干后研磨粉碎过200目筛，于甲醇溶液中反复清洗除去过细颗粒。将得到的聚合物在索氏提取器中用乙酸/甲醇(体积比为8:2)的溶液抽提、洗脱模板分子原花青素B2，直至回流液中用高效液相色谱在280nm处检测不到为止；然后用1mmol/L EDTA溶液洗涤除去残留在聚合物中的金属离子，最后用水和甲醇重复洗涤pH至中性，放入真空干燥箱中干燥，得到原花青素B2金属配位分子印迹聚合物。(5)、将制得的原花青素B2金属配位分子印迹聚合物装入固相萃取柱，加入甲醇溶液淋湿固相萃取柱后，并将原花青素提取液上样(茶籽壳、葡萄籽等原料中提取)，吸附完毕后采用乙酸/甲醇(体积比为8:2)的溶液洗脱，经浓缩、干燥后得到原花青素B2产品，经HPLC检测纯度为95.2％。实施例2：一种原花青素B2金属配位分子印迹聚合物的制备方法及其应用：(1)、将1mmol模板分子原花青素B2和2mmol醋酸锌加入到15ml的四氢呋喃/甲醇(体积比1:4)溶液中，超声震荡1.5h，使金本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种原花青素B2分子印迹聚合物，其特征在于，包括模板分子、金属化合物、四氢呋喃/甲醇、功能单体、交联剂和引发剂；按摩尔比计算，模板分子和金属化合物的摩尔比为1:1～1:3，模板分子与功能单体的摩尔比为1:3～1:8，功能单体与交联剂的摩尔比为1:4～1:6，引发剂与功能单体的摩尔比为1:50～1:20；按摩尔体积比计算，模板分子与四氢呋喃/甲醇的比例为1:10～1:15(mmol/ml)。

【技术特征摘要】
1.一种原花青素B2分子印迹聚合物，其特征在于，包括模板分子、金属化合物、四氢呋喃/甲醇、功能单体、交联剂和引发剂；按摩尔比计算，模板分子和金属化合物的摩尔比为1:1～1:3，模板分子与功能单体的摩尔比为1:3～1:8，功能单体与交联剂的摩尔比为1:4～1:6，引发剂与功能单体的摩尔比为1:50～1:20；按摩尔体积比计算，模板分子与四氢呋喃/甲醇的比例为1:10～1:15(mmol/ml)。2.如权利要求1所述原花青素B2分子印迹聚合物，其特征在于，所述的金属化合物为氯化铜、醋酸锌或硝酸铝。3.如权利要求1所述原花青素B2分子印迹聚合物，其特征在于，所述的功能单体为α-甲基丙烯酸、对乙烯基苯甲酸或2-乙烯基吡啶。4.如权利要求1所述原花青素B2分子印迹聚合物，其特征在于，所述的交联剂为二乙烯基苯、季戊四醇三丙烯酸酯或乙二醇二甲基丙烯酸酯。5.如权利要求1所述原花青素B2分子印迹聚合物，其特征在于，所述的引发剂为偶氮二异丁腈、偶氮二异丁酸二甲酯或偶氮二环己基甲腈。6.制备权利要求1-5中任意一项所述原花青素B2分子印迹聚合物的方法，其特征在于，具体为：(1)、将模板分子原花青素B2和金属化合物加入到所述量的四氢呋喃/甲醇溶液中，超声震荡1～1.5h，使金属离子和原花青素B2充分配位；(2)、向步骤(1)溶液中加入所述量的功能单体，超声震荡1～1.5h，使功能单体、...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊伟，李雄辉，王慧宾，付建平，韩晓丹，胡居吾，徐国良，邓朝阳，
申请(专利权)人：江西省科学院应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：江西;36