一种新型高效复合止血海绵及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种新型高效复合止血海绵及其制备方法。采用的技术方案是：将Col溶于乙酸水溶液中，加入适量ORC，常温下，磁力搅拌至粉末分散均匀后，冷冻干燥，得到复合材料Col‑ORC。将复合材料Col‑ORC置于15‑45％的乙醇/MES缓冲液中浸泡，过滤，弃滤液得过滤物；再按料液比1：2.5‑4.5，取过滤物和乙醇/MES缓冲液，浸泡3‑6h后，缓慢添加EDC和NHS，反应4‑8h后，用1M磷酸一氢钠中和过量的EDC和NHS，过滤，弃滤液，去离子水洗涤，得交联产物。本发明专利技术所制备的止血海绵加速了止血进程，且无生物毒性、促进组织愈合。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医疗止血海绵领域，具体的涉及一种以胶原蛋白和氧化再生纤维素进行交联制备的复合止血海绵及其制备方法。
技术介绍
止血对于口腔颌面外科手术的成功至关重要，尤其对于伴有并发症且经历了正颌外科手术后患者以及具有出血倾向如血小板减少症患者。随着止血方法的发展，很多填塞和缝合方法在临床常用。许多填塞止血材料，包括明胶海绵、甲壳素和壳聚糖海绵被用于手术中，这些材料各有优势和局限性。例如，明胶海绵敷于伤口，材质柔软，压力不足，使止血时间略长，无抗炎作用因此无法控制牙槽内感染。而且它的生物降解速度较快，不适于植入体内。甲壳素和壳聚糖海绵止血作用研究仍处于初期，需要更多论述。因此不断开发新型的、生物相容性好、止血效果快的止血材料是本领域不断研发的课题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新型高效复合止血海绵及其制备方法，该复合止血海绵，将氧化再生纤维素及I型胶原蛋白按一定比例进行交联，所制备的止血海绵加速了止血进程，且无生物毒性、促进组织愈合。本专利技术采用的技术方案是：一种新型高效复合止血海绵：由胶原蛋白和氧化再生纤维素交联制得；所述的氧化再生纤维素的质量为胶原蛋白质量的0.1-1％。一种新型高效复合止血海绵的制备方法，方法如下：1)复合材料Col-ORC的制备：将胶原蛋白海绵(Col)溶于乙酸水溶液中，得到胶原蛋白乙酸水溶液，将适量氧化再生纤维素(ORC)加入到胶原蛋白乙酸水溶液中，常温下，磁力搅拌至粉末分散均匀后，冷冻干燥24-48h，得到胶原蛋白和氧化再生纤维素的复合材料Col-ORC。优选的，所述的胶原蛋白乙酸水溶液为：每10ml乙酸水溶液加入0.03-0.1g胶原蛋白海绵；按体积百分比，所述的乙酸水溶液的浓度为0.5-1.2％。优选的，氧化再生纤维素的加入量为胶原蛋白质量的0.1-1％。2)将复合材料Col-ORC置于体积百分浓度为15-45％的乙醇/MES缓冲液中浸泡30-45min，过滤，弃滤液得过滤物；再按料液比1：2.5-4.5，取过滤物和体积百分浓度为35-45％的乙醇/MES缓冲液，浸泡3-6h后，缓慢添加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)至浓度为10-20mg/mL，随后再添加N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)至浓度为2.25-3.75mg/mL，反应4-8h后，用1M磷酸一氢钠中和过量的EDC和NHS 1-3h，过滤，弃滤液，去离子水洗涤，得交联产物。3)将交联产物冷冻干燥，得到新型高效复合止血海绵。上述的新型高效复合止血海绵的制备方法，所述的胶原蛋白海绵的制备方法如下：1)去脂：将新鲜牛跟腱刮去表面的筋膜、油脂，用蒸馏水浸泡、洗涤，切碎后，放入组织捣碎机中，捣碎匀浆；用质量分数为0.05％-0.2％的碳酸钠溶液浸泡10-18h，过滤，得去脂处理的牛跟腱。2)提取：取去脂处理的牛跟腱，加入胃蛋白酶和乙酸水溶液，在0-4℃下搅拌3-4天，所得粗提液，离心，取上清液。优选的，胃蛋白酶的加入量为，每100克去脂处理的牛跟腱，加入胃蛋白酶3-5g。3)盐析：向离心后的上清液中，搅拌下，加入NaCl颗粒至氯化钠的浓度达到2-3M，待沉淀析出后静置12-18h，过滤，得白色粘稠状的沉淀。4)透析：将白色粘稠状的沉淀用0.1M Tris-HCl溶液溶胀10-18h，之后装入截留分子量为7000-14000的透析袋中，依次采用0.5M、0.3M、0.1M的乙酸溶液作为透析外液，每种浓度分别透析1.5-3天，最后用蒸馏水作为透析外液，透析2-4天，得到透析后的胶原蛋白溶液。5)干燥：将透析后的胶原蛋白溶液放入容器中，冰箱预冻后，放入冷冻干燥机中，冷冻干燥24-48h，得到胶原蛋白海绵。本专利技术的有益效果是：本专利技术从牛跟腱中提取胶原蛋白溶液后，引入氧化再生纤维素粉末，经无毒交联后，制成不同比例的Col/ORC止血复合材料。通过表面结构观察，理化性能分析，生物安全性和有效性分析，使新型Col/ORC止血复合材料达到更有效的止血，快速体内降解，并且促进组织愈合。附图说明图1a是胶原蛋白海绵和不同/氧化再生纤维素含量的复合止血海绵的SEM图；其中：(A)Control(创尔胶原蛋白海绵)，500×，(a)200×；(B)Col(自制胶原蛋白海绵)，500×，(b)200×；(C)Col-0.25％ORC，500×，(c)200×；(D)Col-0.5％ORC，500×，(d)200×；(E)Col-1％ORC，500×，(e)200×。图1b是胶原蛋白海绵和不同/氧化再生纤维素含量的复合止血海绵的孔径分布图。图2是胶原蛋白海绵和不同/氧化再生纤维素含量的复合止血海绵的红外谱图。图3是为实施例1-实施例3制备的复合止血海绵对ACC-M细胞的细胞毒性。图4a是Col与不同含量Col/ORC复合止血海绵拉伸强度对比图。图4b是Col与不同含量Col/ORC复合止血海绵接触角测定对比图。图4c是Col与不同含量Col/ORC复合止血海绵孔隙率对比图。图4d是Col与不同含量Col/ORC复合止血海绵吸水率对比图。图5是在兔耳动脉和肝损伤模型中，Col和不同含量Col/ORC复合止血海绵的出血量。图6是不同材料分别植入兔腿部1天，7天，14天和28天后的局部组织病理图(HE染色)。具体实施方式实施例1(一)胶原蛋白海绵的制备1)去脂：将新鲜牛跟腱刮去表面的筋膜、油脂，用蒸馏水浸泡、洗涤，切碎后，放入组织捣碎机中捣碎匀浆。用质量分数为0.1％的碳酸钠溶液浸泡12h，过滤、得去脂处理的牛跟腱。2)提取：取上述得到的去脂处理的牛跟腱10g放入三口烧瓶中，加入0.45g的胃蛋白酶和约1000ml的0.3％乙酸溶液。在0-4℃下搅拌3天。将所得粗提液在高速冷冻离心机中离心，转速10000rpm离心20min，取上清液。3)盐析：向离心后的上清液中，搅拌下，加入NaCl颗粒至氯化钠的浓度达到2-3M，待沉淀析出后静置12-18h，过滤，得白色粘稠状的沉淀。4)透析：将白色粘稠状的沉淀，用0.1M Tris-HCl溶液溶胀12h，之后装入截留分子量为1万的透析袋中，依次采用0.5M、0.3M、0.1M的乙酸溶液作为透析外液，每种浓度透析2天。最后用蒸馏水作为透析外液，透析3天，得到透析后的胶原蛋白溶液。5)干燥：将透析后的胶原蛋白溶液放入不锈钢盘中，冰箱预冻，然后放入冷冻干燥机中，冷冻干燥24-48h，得到胶原蛋白海绵(Col)，存储于-20℃，备用。(二)复合止血海绵的制备1)复合材料Col-ORC的制备：按照每10ml乙酸水溶液(1％v/v)加入0.06g胶原蛋白海绵(Col)，配制胶原蛋白乙酸水溶液。取100ml胶原蛋白乙酸水溶液，加入氧化再生纤维素(ORC)，氧化再生纤维素(ORC)的加入量为胶原蛋白质量的0.25％，常温下，磁力搅拌至粉末分散均匀后，冷冻干燥24-48h，得到胶原蛋白和氧化再生纤维素的复合材料Col-0.25％ORC。2)取25mg复合材料Col-0.25％ORC，置于10ml乙醇/MES缓冲液(40％v/v)中，浸泡30min，过滤，弃滤液得过滤物；再按料液比1：3.5，取1mg过滤物和3.5ml乙醇/MES缓冲液(40％v/v)，浸泡4h后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型高效复合止血海绵，其特征在于：由胶原蛋白和氧化再生纤维素交联制得；所述的氧化再生纤维素的质量为胶原蛋白质量的0.1‑1％。

【技术特征摘要】
1.一种新型高效复合止血海绵，其特征在于：由胶原蛋白和氧化再生纤维素交联制得；所述的氧化再生纤维素的质量为胶原蛋白质量的0.1-1％。2.权利要求1所述的新型高效复合止血海绵的制备方法，其特征在于：方法如下：1)复合材料Col-ORC的制备：将胶原蛋白海绵溶于乙酸水溶液中，得到胶原蛋白乙酸水溶液，将适量氧化再生纤维素加入到胶原蛋白乙酸水溶液中，常温下，磁力搅拌至粉末分散均匀后，冷冻干燥24-48h，得到胶原蛋白与氧化再生纤维素的复合材料Col-ORC；2)将复合材料Col-ORC置于体积百分浓度为15-45％的乙醇/MES缓冲液中浸泡30-45min，过滤，弃滤液得过滤物；再按料液比1：2.5-4.5，取过滤物和体积百分浓度为35-45％的乙醇/MES缓冲液，浸泡3-6h后，缓慢添加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐至浓度为10-20mg/mL，随后再添加N-羟基琥珀酰亚胺至浓度为2.25-3.75mg/mL，反应4-8h后，用1M磷酸一氢钠中和过量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺1-3h，过滤，弃滤液，去离子水洗涤，得交联产物；3)将交联产物冷冻干燥，得到新型高效复合止血海绵。3.按照权利要求1所述的新型高效复合止血海绵的制备方法，其特征在于：所述的胶原蛋白海绵的制备方法如下：1)去脂：将新鲜牛跟腱刮去表面的筋膜、油脂，用蒸馏水浸泡、洗涤，切碎后，放入组...

【专利技术属性】
技术研发人员：程玮璐，李慧，李洪谊，李贵阳，王耀涓，刘富忠，赵志平，高健，郭凯，蔡盼盼，刘杰，
申请(专利权)人：沈阳尚贤微创医疗器械股份有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21