【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋生物活性物质制备
,具体的说是涉及一种离心法结合阴离子交换层析介质制备高纯度藻红蛋白的方法。
技术介绍
藻胆蛋白(phycobiliprotein,PBP)是存在于蓝藻、红藻、隐藻和少数甲藻中的一类捕光色素蛋白。根据紫外吸收光谱的特点,人们将藻胆蛋白分为三类:藻蓝蛋白(phycoeyanin,PC)、别藻蓝蛋白(allophycoeyanin,APC)和藻红蛋白(phycoerythrin,PE)。藻红蛋白主要分布于海洋红藻中,它是由脱辅基蛋白和色基组成,其脱辅基蛋白是一类寡聚蛋白,基本单位为α和β亚基,有些藻红蛋白中还有少量的γ亚基。由于色素分子的存在,藻红蛋白在可见光区480~570nm处有较强的光吸收,并且具有强烈的荧光。藻红蛋白用途非常广泛,它既可以作为天然色素应用于食品、化妆品等行业,还可制成荧光试剂,用于生物医学分析和免疫化学等领域。藻红蛋白也是一种重要的生理活性物质,具有抗肿瘤,抗病毒,增强免疫力等,它还是一种具有开发潜力的光敏剂,可制成光敏剂应用于肿瘤光动力学治疗。藻红蛋白的纯度通常用(A545/A280)来表示,等级划分为0.7<食品级<3.0<反应级<4.0<分析级,藻红蛋白的纯度越高,价格越高。目前人们主要采用硫酸按分级沉淀、羟基磷灰石柱层析、凝胶过滤层析等相结合的方法制备藻红蛋白,现有的制备工艺流程存在操作复杂,生产成本高,产品质量不稳定,且难以实现工业化的大规模的生产。
技术实现思路
本专利技术就是针对上述问题,提供一种操作简便、成本低廉且易于大规模制备高纯度藻红蛋白的方法。为解 ...
【技术保护点】
一种离心法结合阴离子交换层析介质制备藻红蛋白的方法,其特征在于所述制备方法包括如下步骤:(1) 离心收集新鲜培养的紫球藻,将藻泥与磷酸盐缓冲液按1:5~1:10比例混合,得细胞悬液;(2) 将步骤(1)所得细胞悬液在0~4˚C条件下进行超声波处理,得到破壁液;将破壁液冷冻离心, 收集上清液;(3) 室温下将步骤(3)所得上清液超滤后得到藻红蛋白粗提液,然后向藻红蛋白粗提液中加入20%饱和度硫酸铵; (4) 向步骤(4)所得的藻蓝蛋白粗提液加入用磷酸盐缓冲液预处理的强阴离子层析介质,充分混匀,冷冻离心,取沉淀;接着向沉淀中加入2倍体积含有0.1mol/LNaCl的磷酸盐缓冲液,充分混匀,冷冻离心,取上清,得到纯化的藻红蛋白。
【技术特征摘要】
1.一种离心法结合阴离子交换层析介质制备藻红蛋白的方法,其特征在于所述制备方法包括如下步骤:(1) 离心收集新鲜培养的紫球藻,将藻泥与磷酸盐缓冲液按1:5~1:10比例混合,得细胞悬液;(2) 将步骤(1)所得细胞悬液在0~4˚C条件下进行超声波处理,得到破壁液;将破壁液冷冻离心, 收集上清液;(3) 室温下将步骤(3)所得上清液超滤后得到藻红蛋白粗提液,然后向藻红蛋白粗提液中加入20%饱和度硫酸铵; (4) 向步骤(4)所得的藻蓝蛋白粗提液加入用磷酸盐缓冲液预处理的强阴离子层析介质,充分混匀,冷冻离心,取沉淀;接着向沉淀中加入2倍体积含有0.1mol/LNaCl的磷酸盐缓冲液,充...
【专利技术属性】
技术研发人员:唐志红,吕家森,赵吉路,张超,
申请(专利权)人:烟台大学,
类型:发明
国别省市:山东;37
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