一种两面针的组织培养快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种两面针的组织培养快繁方法，特征是通过组织培养技术获得株系稳定的种苗的育苗方法。本发明专利技术以两面针带节藤茎为外植体，通过诱导不定芽、丛生芽增殖培养、试管苗生根以及炼苗移栽等阶段实现了两面针种苗的组织培养快速繁殖。解决了两面针大规模种植的种苗供应，也为以两面针药材作原料的药品生产提供了原料保证。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到一种两面针的快繁
，特征是一种两面针的组织培养快繁方法。
技术介绍
两面针为芸香科植物，两面针Zanthoxylum nitidm cRoxbjdc 的干燥根。主产广东、广西、福建、云南、贵州、浙江、台湾等地，全年采，挖取根部，除去枝叶、泥土、洗净、切片、晒干，其药理药性为，根是类圆柱形，长5~20cm，直径0.5~7cm，表面呈棕黄色或淡黄色，皮孔类圆形，黄色。商品多切成不规则的块片或段。大小不一，厚1~4mm，外皮脱落处呈浅褐色。切面皮部成棕色，木部浅黄色，可见同心性环纹及密集的小孔，质硬。气微香，味苦而辛辣，有麻舌感。以根皮厚、气味浓者为佳。主要成份：根和根皮含两面针碱，根皮还含布桔叶苷。功用主治：行气止痛，活血化瘀。用于风湿骨病，喉痹，胃痛，牙痛，跌打损伤，烫伤，蛇咬伤。
技术实现思路
本专利技术的目的就提供一种通过诱导导入定芽、丛生芽增殖、试管苗生根、炼苗移栽等，使两面针通过丛生芽的离体快繁方式获得管苗，再经移栽获得成功的一种两面针的组织培养快繁方法。本专利技术的技术解决方案是这样的，一种两面针的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：（1）诱导不定芽：选取两面针带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒16秒种后，用无菌水冲洗6次后置于0.4%的升汞溶液中消毒32分钟，然后用无菌水冲洗7次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在29℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为1600lx，培养温度为29℃的条件下培养，19天转接一次；（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在29℃条件下全暗培养15天，然后每天光照16小时，光照强度为3100lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根；（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质中并定植于大田中。步骤（1）所述的两面针带藤茎外植体在进行不定芽诱导之前需进行预处理，处理的方法是：将从野外采集的两面针带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.06%的高锰酸钾溶液中浸泡9小时，再用自来水冲洗6次后用胶塑料袋密封后置于6℃冰箱中过夜备用。步骤（1）所述的诱导培养基为：以GS为基本培养基，附加3.6%蔗糖0.6%琼脂0.2%活性炭0.6%酸性水解酪蛋白以及2.2mg/L KT2.2mg/L IBA和1.2mg/L 2,4-D，pH值为5.3。步骤（2）所述的增殖培养基为：以MS为基本培养基，附加3.2mg/L 6-BA1.6mg/L NAA 7.0mg/L核黄素0.6mg/L D-泛酸钙7.0mg/L抗坏血酸6.0mg/L L-半胱氨酸和3.6%蔗糖0.6%琼脂0.2%活性炭，pH值为5.3。步骤（3）所述的生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，附加0.9mg/L IBA1.2mg/L GGR2.6mg/L L-半胱氨酸和2.6%蔗糖0.8%琼脂0.2%活性炭，pH值为5.3。与现有技术相比本专利技术的突出效果是：技术工艺路线简单、可行，操作容易，育成的试管苗成活率达95%以上，为市场大量提供优质的两面针种苗打定基础。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例11、外植体预处理：将从采集的两面针带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.02%的高锰酸钾溶液中浸泡6小时，再用自来水冲洗6次后用胶塑料袋密封后置于2℃冰箱中过夜备用。2、培养过程：（1）诱导不定芽：两面针带节藤茎经75%酒精消毒10秒种后，用无菌水冲洗4次后经0.1%的升汞溶液中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗5次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在26℃条件下全暗培养，培养46天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+1.6mg/LKT+0.2mg/LIBA和0.5mg/L 2,4-D +3.3%蔗糖+0.30%琼脂+0.06%活性炭+0.2%酸性水解酪蛋白，pH值为5.6;（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为1100lx，培养温度为26℃的条件下培养，26天转接一次，增殖系数为4。所采用的增殖培养基为：MS+1.6mg/L 6-BA+0.6mg/L NAA +1.2mg/L核黄素+0.6mg/L D-泛酸钙+1.2mg/L抗坏血酸+1.2mg/L L-半胱氨酸+3.5%蔗糖+0.30%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.6；（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养8天，然后每天光照16小时，光照强度为3100lx，培养温度为26℃的条件下培养21天生根，生根率达96%。所采用的生根培养基为：1/2MS+0.2mg/L IBA+0.5mg/L GGR+1.2mg/L L-半胱氨酸+2.2%%蔗糖+0.5%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.6；（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质并定植于大田中，成活率达95%。实施例21、外植体预处理：将从野外采集的两面针带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.02%的高锰酸钾溶液中浸泡9小时，再用自来水冲洗4次后用胶塑料袋密封后置于6℃冰箱中过夜备用。2、培养过程：（1）诱导不定芽：两面针带节藤茎经75%酒精消毒6秒种后，用无菌水冲洗6次后经0.3%的升汞溶液中消毒12分钟，然后用无菌水冲洗6次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在26℃条件下全暗培养，培养41天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+0.9mg/L KT+0.3mg/L IBA和0.3mg/L 2,4-D +3.2%蔗糖+0.5%琼脂+0.2%活性炭+0.6%酸性水解酪蛋白，pH值为5.5;（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照13小时，光照强度为1250lx，培养温度为26℃的条件下培养，29天转接一次，增殖系数为7。所采用的增殖培养基为：MS+0.9mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA +4.0mg/L核黄素+0.4mg/L D-泛酸钙+3.6mg/L抗坏血酸+4.6mg/L L-半胱氨酸+3.6%蔗糖+0.6%琼脂+0.06%活性炭，pH值为5.5；（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养11天，然后置于每天光照13小时，光照强度为3000lx，培养温度为26℃的条件下培养29天生根，生根率达95%。所采用的生根培养基为：1/2MS+0.6mg/L IBA+1.2mg/L GGR+2.6mg/L L-半胱氨酸+2.6%%蔗糖+0.5%琼脂+0.06%活性炭，pH值为5.5；（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗8天后，将试本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种两面针的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：步骤（1）诱导不定芽：选取两面针带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒16秒种后，用无菌水冲洗6次后置于0.4%的升汞溶液中消毒32分钟，然后用无菌水冲洗7次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在29℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；步骤（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为1600lx，培养温度为29℃的条件下培养，19天转接一次；步骤（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在29℃条件下全暗培养15天，然后每天光照16小时，光照强度为3100lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根；步骤（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质并定植于大田中。

【技术特征摘要】
1.一种两面针的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：步骤（1）诱导不定芽：选取两面针带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒16秒种后，用无菌水冲洗6次后置于0.4%的升汞溶液中消毒32分钟，然后用无菌水冲洗7次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在29℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；步骤（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为1600lx，培养温度为29℃的条件下培养，19天转接一次；步骤（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在29℃条件下全暗培养15天，然后每天光照16小时，光照强度为3100lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根；步骤（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质并定植于大田中。2.根据权利要求1所述的一种两面针的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（1）所述的两面针带藤茎外植体在进行不定芽诱导之前需进行预处理，处理的方法是：将从野外采集的两...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志勇，
申请(专利权)人：李志勇，
类型：发明
国别省市：广西;45