PD‑1的抗体分子及其用途制造技术

本发明专利技术公开特异性地结合PD‑1的抗体分子。所述抗PD‑1抗体分子可以用于治疗、预防和/或诊断癌或感染性疾病症和疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉参考本申请要求2014年1月24日提交的美国临时申请No.61/931,512、和2014年10月3日提交的美国临时申请No.62/059,676、以及2014年12月19日提交的美国临时申请No.62/094,834的权益，上述申请的内容按引用全部并入本文中。序列表本申请含有序列表，其已经以ASCII形式电子提交，特此将其全部通过引用并入本文中。所述ASCII拷贝于2015年1月12日生成，命名为C2160-7000WO_SL.txt并且为191,589个字节大小。背景T细胞介导对抗抗原的免疫应答的能力需要两个不同信号传导的相互作用(Viglietta,V.等，(2007)Neurotherapeutics 4:666-675；Korman,A.J.等，(2007)Adv.Immunol.90:297-339)。第一个，已经排列在抗原递呈细胞(APC)表面上的抗原被递呈给抗原特异性天然CD4+ T细胞。这样的递呈通过T细胞受体(TCR)传送信号，所述T细胞受体指引T细胞启动针对所递呈抗原的特异性免疫应答。第二个，通过APC和不同的T细胞表面分子之间的相互作用介导的各种共同刺激和抑制信号，可以引发T细胞的激活和增殖并最终引发它们的抑制。免疫系统受到共同刺激和共同抑制配体和受体网络的密切控制。这些分子提供T细胞激活的第二信号，并提供正向和负向信号的平衡网络，以最大化对抗感染的免疫应答，同时限制对自身的免疫性(Wang,L.等，(Epub，2011年3月7日，2011)J.Exp.Med.208(3):577-92；Lepenies,B.等，(2008)Endocrine,Metabolic&Immune Disorders--Drug Targets 8:279-288)。共同刺激信号的实例包括APC的B7.1(CD80)和B7.2(CD86)配体与CD4+T-淋巴细胞的CD28和CTLA-4受体之间的结合(Sharpe,A.H.等，(2002)Nature Rev.Immunol.2:116-126；Lindley,P.S.等，(2009)Immunol.Rev.229:307-321)。B7.1或B7.2与CD28的结合刺激T细胞激活，而B7.1或B7.2与CTLA-4的结合抑制这样的激活(Dong,C.等，(2003)Immunolog.Res.28(1):39-48；Greenwald,R.J.等，(2005)Ann.Rev.Immunol.23:515-548)。CD28在T细胞的表面上组成型地表达(Gross,J.等，(1992)J.Immunol.149:380-388)，而CTLA-4表达在T-细胞激活后快速上调(Linsley,P.等(1996)Immunity 4:535-543)。CD28受体的其他配体包括一组相关的B7分子，也称为“B7超家族”(Coyle,A.J.等，(2001)Nature Immunol.2(3):203-209；Sharpe,A.H.等，(2002)Nature Rev.Immunol.2:116-126；Collins,M.等，(2005)Genome Biol.6:223.1-223.7；Korman,A.J.等，(2007)Adv.Immunol.90:297-339)。B7超家族的几个成员是已知的，包括B7.1(CD80)、B7.2(CD86)、可诱导共刺激分子配体(ICOS-L)、程序化死亡-1配体(PD-L1；B7-H1)、程序化死亡-2配体(PD-L2；B7-DC)、B7-H3、B7-H4和B7-H6(Collins,M.等，(2005)Genome Biol.6:223.1-223.7)。程序化死亡1(PD-1)蛋白是扩大范围的T细胞调节剂的CD28/CTLA-4家族的抑制成员(Okazaki等，(2002)Curr Opin Immunol 14:391779-82；Bennett等，(2003)J.Immunol.170:711-8)。CD28家族的其他成员包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。提出PD-1作为单体存在，缺乏其他CD28家族成员特征性的未配对半胱氨酸残基。PD-1在激活的B细胞、T细胞和单核细胞上表达。PD-1基因编码55kDa I型跨膜蛋白(Agata等，(1996)Int Immunol.8:765-72)。尽管结构上与CTLA-4相似，PD-1缺乏对B7-1和B7-2结合重要的MYPPY基序(SEQ ID NO:236)。已经鉴定了两个PD-1的配体，PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)，其已经显示出结合PD-1时下调T细胞激活(Freeman等，(2000)J.Exp.Med.192:1027-34；Carter等，(2002)Eur.J.Immunol.32:634-43)、PD-L1和PD-L2是结合PD-1的B7同源物，但不结合其他CD28家族成员。PD-L1在各种人的癌症中是大量存在的(Dong等，(2002)Nat.Med.8:787-9)。PD-1已知是负向调节TCR信号的免疫抑制蛋白(Ishida,Y.等，(1992)EMBO J.11:3887-3895；Blank,C.等，(Epub 2006Dec.29)Immunol.Immunother.56(5):739-745)。PD-1和PD-L1之间的相互作用可以作为免疫检查点，其可以导致例如肿瘤浸润淋巴细胞的减少、T-细胞受体介导的增殖的减少、和/或由癌性细胞引起的免疫逃避(Dong等，(2003)J.Mol.Med.81:281-7；Blank等，(2005)Cancer Immunol.Immunother.54:307-314；Konishi等，(2004)Clin.Cancer Res.10:5094-100)。可以通过抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的局部相互作用来逆转免疫抑制；当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，效果是加性的(Iwai等，(2002)Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA99:12293-7；Brown等，(2003)J.Immunol.170:1257-66)。鉴于免疫检查点途径在调节免疫应答中的重要性，需要研发新的调节免疫抑制蛋白(如PD-1)活性的活性剂，由此导致免疫系统的激活。这样的活性剂可以用于例如癌症免疫治疗和其他病症的治疗，如慢性感染。专利技术概述本文公开以高亲和性和特异性结合程序化死亡1(PD-1)的抗体分子(例如，人源化抗体分子)。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括新的构架区组合(例如，FW1、FW2、FW3和/或FW4)，例如，重链构架区和/或轻链构架区的新组合。本专利技术还提供编码抗体分子的核酸分子、表达载体、宿主细胞和用于制备抗体分子的方法。还提供包括抗体分子的免疫缀合物、多-或双特异性抗体分子和药物组合物。本文公开的抗PD-1抗体分子可以用于(单独或结合其他活性剂或治疗形式)治疗、预防和/或诊断疾病，如癌症疾病(例如，实体和软组织肿瘤)，以及传染病(例如，慢性感染性疾病或脓毒症)。因此，本文公开了使本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够结合人程序化死亡‑1(PD‑1)的分离抗体分子，其包括：(a)包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列的重链可变区(VH)；和包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列的轻链可变区(VL)；(b)包含SEQ ID NO:1的VHCDR1；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列的VH；以及SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列的VL；(c)包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸的VH；以及包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列的VL；或(d)包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸的VH；以及包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列的VL。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.24 US 61/931,512;2014.10.03 US 62/059,676;1.一种能够结合人程序化死亡-1(PD-1)的分离抗体分子，其包括：(a)包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列的重链可变区(VH)；和包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列的轻链可变区(VL)；(b)包含SEQ ID NO:1的VHCDR1；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列的VH；以及SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列的VL；(c)包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸的VH；以及包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列的VL；或(d)包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸的VH；以及包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列的VL。2.权利要求1的抗体分子，包括包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列的VH；和包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列的VL。3.权利要求1的抗体分子，包括包含SEQ ID NO:1的VHCDR1；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列的VH；和包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列的VL。4.权利要求1的抗体分子，包括包含SEQ ID NO:224的VHCDR1；SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列的VH；和包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列的VL。5.权利要求1的抗体分子，包括包含SEQ ID NO:224的VHCDR1；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列的VH；和包括SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列的VL。6.权利要求1-5任一项的抗体分子，其中所述抗体分子是人源化抗体分子。7.权利要求1-6任一项的抗体分子，其中所述抗体分子是单特异性抗体分子。8.权利要求1-6任一项的抗体分子，其中所述抗体分子是双特异性抗体分子。9.权利要求1-8任一项的抗体分子，所述抗体分子具有包括至少一个构架(FW)区的重链可变区，所述构架区包含SEQ ID NO:147，151，153，157，160，162，166或169中任一个的氨基酸序列，或与其至少90％相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:147，151，153，157，160，162，166或169中任一个的氨基酸序列相比，具有不超过两个氨基酸置换、插入或缺失。10.权利要求1-9任一项的抗体分子，其具有包括至少一个构架区的重链可变区，所述构架区包含SEQ ID NO:147，151，153，157，160，162，166或169中任一个的氨基酸序列。11.权利要求1-10任一项的抗体分子，其具有包括至少两个、三个或四个构架区的重链可变区，所述构架区包含SEQ ID NO:147，151，153，157，160，162，166或169中任一个的氨基酸序列。12.权利要求1-11任一项的抗体分子，其包含SEQ ID NO:147或151的VHFW1氨基酸序列，SEQ ID NO:153，157或160的VHFW2氨基酸序列，和SEQ ID NO:162或166的VHFW3氨基酸序列，和任选，进一步包含SEQ ID NO:169的VHFW4氨基酸序列。13.权利要求1-12任一项的抗体分子，其具有包括至少一个构架区的轻链可变区，所述构架区包含SEQ ID NO:174，177，181，183，185，187，191，194，196，200，202，205或208中任一个的氨基酸序列，或与其至少90％相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:174，177，181，183，185，187，191，194，196，200，202，205或208中任一个的氨基酸序列相比，具有不超过两个氨基酸置换、插入或缺失。14.权利要求1-13任一项的抗体分子，其具有包括至少一个构架区的轻链可变区，所述构架区包含SEQ ID NO:174，177，181，183，185，187，191，194，196，200，202，205或208中任一个的氨基酸序列。15.权利要求1-14任一项的抗体分子，其具有包括至少两个、三个或四个构架区的轻链可变区，所述构架区包含SEQ ID NO:174，177，181，183，185，187，191，194，196，200，202，205或208中任一个的氨基酸序列。16.权利要求1-15任一项的抗体分子，其包含SEQ ID NO:174，177，181，183或185的VLFW1氨基酸序列，SEQ ID NO:187，191或194的VLFW2氨基酸序列，和SEQ ID NO:196，200，202或205的VLFW3氨基酸序列，和任选，进一步包含SEQ ID NO:208的VLFW4氨基酸序列。17.权利要求1-16任一项的抗体分子，其包括重链可变结构域，所述结构域包含与SEQ ID NO:38，50，82或86中的任一个至少85％相同的氨基酸序列。18.权利要求1-17任一项的抗体分子，其包括重链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:38，50，82或86的氨基酸序列。19.权利要求1-18任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含与SEQ ID NO:42，46，54，58，62，66，70，74或78中的任一个至少85％相同的氨基酸序列。20.权利要求1-19任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:42，46，54，58，62，66，70，74或78的氨基酸序列。21.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括重链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。22.权利要求1-21任一项的抗体分子，其包括重链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:91的氨基酸序列。23.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括重链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。24.权利要求1-20和23任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链。25.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括重链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列。26.权利要求1-20和25任一项的抗体分子，其包括重链，所述重链包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列。27.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括重链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。28.权利要求1-20和27任一项的抗体分子，其包括重链，所述重链包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列。29.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列。30.权利要求1-29任一项的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。31.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。32.权利要求1-28和31任一项的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。33.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。34.权利要求1-28和33任一项的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列。35.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。36.权利要求1-28和35任一项的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列。37.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列。38.权利要求1-28和37任一项的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。39.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。40.权利要求1-28和39任一项的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。41.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列。42.权利要求1-28和41任一项的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。43.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列。44.权利要求1-28和43任一项的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。45.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链可变结构域，所述结构域包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列。46.权利要求1-28任一项的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列。47.权利要求45的抗体分子，其包括轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列。48.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链可变结构域。49.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的轻链可变结构域。50.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的轻链可变结构域。51.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的轻链可变结构域。52.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链可变结构域。53.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链可变结构域。54.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链可变结构域。55.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链可变结构域。56.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变结构域。57.权利要求1-20任一项的抗体分子，其包括包含SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·J·弗里曼，A·H·夏普，W·A·布莱特勒，J·M·玛塔拉扎，C·A·萨巴托斯佩顿，H·W·常，G·J·弗雷，
申请(专利权)人：达纳法伯癌症研究公司，诺华股份有限公司，哈佛大学，
类型：发明
国别省市：美国;US