抗‑GCC抗体分子和其用于测试对GCC标靶治疗的易感性的用途制造技术

技术编号：11114881 阅读：135 留言：0更新日期：2015-03-05 20:07

本发明专利技术揭示结合GCC的抗体和抗体的抗原结合片段。本发明专利技术还提供用于鉴别应接受利用本文提供的所述抗‑GCC抗体的GCC标靶治疗的患者的诊断方法。所述抗‑GCC抗体分子可作为裸抗体分子和作为免疫偶联物的组份来使用。因此，在另一方面中，本发明专利技术的特征在于包含本文描述的抗‑GCC抗体分子和治疗剂或标记的免疫偶联物。本发明专利技术的特征还在于使用本文描述的抗‑GCC抗体分子和免疫偶联物用于(例如)检测GCC以及表达GCC的细胞或组织的方法。所述方法尤其可用于GCC介导疾病的诊断、预后、成像或分期。因此，在一些方面中，本发明专利技术的特征在于鉴别用GCC标靶治疗、例如抗‑GCC抗体治疗、例如包含与治疗剂偶联的抗‑GCC抗体的免疫偶联物来治疗的个体的方法。

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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案本申请案主张对2012年4月27日申请的美国临时申请案第61/639,376号的权益和优先权。美国临时申请案第61/639,376号的全部内容是以引用方式并入本文中。
本专利技术涉及结合GCC的抗体分子和使用其选择用GCC标靶治疗来治疗的患者的方法，所述GCC标靶治疗是(例如)含有偶联到诸如治疗剂等药剂的抗-GCC抗体分子或其片段的免疫偶联物。
技术介绍
鸟苷酸环化酶C(“GCC”)是在维持肠液、电解质平衡和细胞增殖中发挥功能的跨膜细胞表面受体，例如，参见卡里瑟斯(Carrithers)等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)100:3018-3020(2003)。GCC在小肠、大肠和直肠衬里的黏膜细胞处表达(卡里瑟斯等人，结肠与直肠疾病(Dis Colon Rectum)39:171-181(1996))。在肠上皮细胞发生肿瘤转化后，维持GCC表达，且在所有原发性和转移性结肠直肠肿瘤中都有表达(卡里瑟斯等人，结肠与直肠疾病39:171-181(1996)；比克(Buc)等人，欧洲癌症杂志(Eur J Cancer)41:1618-1627(2005)；卡里瑟斯等人，胃肠病学(Gastroenterology)107:1653-1661(1994))。
技术实现思路
本专利技术至少部分地基于新颖的抗-GCC抗体的发现。因此，在一个方面中，本专利技术的特征在于如本文所揭示的抗-GCC抗体...
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【技术保护点】
一种抗‑GCC抗体分子，其包含三个重链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含氨基酸序列SEQ ID NO：21、22和23或分别包含SEQ ID NO：33、34和35；和三个轻链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含氨基酸序列SEQ ID NO：27、28和29或分别包含SEQ ID NO：39、40和41。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.27 US 61/639,3761.一种抗-GCC抗体分子，其包含三个重链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，
其分别包含氨基酸序列SEQ ID NO：21、22和23或分别包含SEQ ID NO：33、34和
35；和三个轻链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含氨基酸序列SEQ ID NO：
27、28和29或分别包含SEQ ID NO：39、40和41。
2.一种抗-GCC抗体分子，其与包含以下的抗-GCC抗体竞争结合到相同表位或结
合到所述表位：三个重链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含氨基酸序列
SEQ ID NO：21、22和23；和三个轻链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包
含氨基酸序列SEQ ID NO：27、28和29。
3.一种抗-GCC抗体分子，其与包含以下的抗-GCC抗体竞争结合到相同表位或结
合到所述表位：三个重链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含氨基酸序列
SEQ ID NO：33、34和35；和三个轻链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包
含氨基酸序列SEQ ID NO：39、40和41。
4.根据前述权利要求中任一权利要求所述的抗-GCC抗体分子，其中所述抗-GCC
抗体分子是单克隆抗体。
5.根据前述权利要求中任一权利要求所述的抗-GCC抗体分子，其中所述抗-GCC
抗体分子是兔或兔源抗体。
6.根据权利要求5所述的抗-GCC抗体分子，其中所述抗体是兔单克隆抗体。
7.根据权利要求1所述的抗-GCC抗体分子，其进一步包含包含根据SEQ ID NO：
11或SEQ ID NO：15的氨基酸序列的重链可变区和包含根据SEQ ID NO：13或SEQ ID
NO：17的氨基酸序列的轻链可变区。
8.根据权利要求1所述的抗-GCC抗体分子，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3
分别包含根据SEQ ID NO：21、22和23的氨基酸序列，并且所述轻链CDR分别包含

\t根据SEQ ID NO：27、28和29的氨基酸序列。
9.根据权利要求7所述的抗-GCC抗体分子，其中所述重链可变区包含根据SEQ ID
NO：11的氨基酸序列且所述轻链可变区包含根据SEQ ID NO：13的氨基酸序列。
10.根据前述权利要求中任一权利要求所述的抗-GCC抗体分子，其中所述抗-GCC
抗体分子偶联到可检测标记。
11.根据权利要求10所述的抗-GCC抗体分子，其中所述可检测标记选自由以下组
成的群组：辣根过氧化物酶HRP；碱性磷酸酶；半乳糖苷酶；葡萄糖淀粉酶；溶菌酶；
糖氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖6-磷酸脱氢酶；杂环氧化酶，
例如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶，其与诸如HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶等采用过氧
化氢来氧化染料前体的酶偶合；生物素/抗生物素蛋白；自旋标记；噬菌体标记；和稳定
自由基。
12.根据权利要求10所述的抗-GCC抗体分子，其中所述可检测标记是选自以下的
荧光团：荧光黄或其衍生物、玫瑰红或其衍生物、丹磺酰基、伞形酮、荧光素酶、荧光
素和2，3-二氢酞嗪二酮。
13.根据权利要求10所述的抗-GCC抗体分子，其中所述可检测标记是选自由以下
组成的群组的放射性试剂：32P、3H、14C、188Rh、43K、52Fe、57Co、67Cu、67Ga、68Ga、
77Br、81Rb/81MKr、87MSr、99Tc、111In、113M In、123I、125I、127Cs、129Cs、131I、132I、197Hg、
203Pb和206Bi和213Bi。
14.一种经分离核酸序列，其编码根据权利要求1、7、8和9中任一权利要求所述
的抗体分子。
15.一种细胞，其包含根据权利要求14所述的经分离核酸序列。
16.一种产生根据权利要求1、7、8或9所述的抗体分子的方法，其包含在容许产
生抗体分子的条件下培养根据权利要求15所述的细胞，由此产生根据权利要求1、7、8
或9所述的抗体分子。
17.一种载体，其包含根据权利要求1、7、8或9所述的抗体分子的轻链和重链中
的一者或二者。
18.一种检测生物样品中的GCC分子的方法，其包含使所述生物样品与根据权利
要求1到13中任一权利要求所述的抗体分子接触和测定所述抗体分子是否结合到所述
GCC分子。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述方法检测方法包含免疫组织化学分析。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述生物样品是源自怀疑患有表达
GCC的癌症的患者的肿瘤生检。
21.根据权利要求18到20中任一权利要求所述的方法，其进一步包含对所述生物
样品中的GCC表达进行定量的步骤。
22.根据权利要求21所述的方法，其中对GCC表达的所述定量包含所述生物样品
中的顶端GCC表达、所述生物样品中的细胞质GCC表达或二者。
23.根据权利要求21或22所述的方法，其中所述定量步骤包含H-评分方法。
24.根据权利要求20所述的方法，其中所述表达GCC的癌症选自由以下组成的群
组：结肠直肠癌、胃癌、小肠癌、食道癌、胰脏癌、肺癌、软组织肉瘤、神经外胚层肿
瘤和神经内分泌肿瘤。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述肺癌是鳞状细胞癌或腺癌。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述软组织肉瘤是平滑肌肉瘤或横纹肌肉
瘤。
26.根据权利要求24所述的方法，其中所述神经内分泌肿瘤是胃肠或支气管肺神

\t经内分泌肿瘤。
27.一种试剂盒，其包含根据权利要求1到13中任一权利要求所述的抗-GCC抗体
分子和使用说明书。
28.根据权利要求27所述的试剂盒，其进一步包含GCC标靶治疗剂。
29.根据权利要求28所述的试剂盒，其中所述GCC标靶治疗剂包含抗-GCC抗体
分子。
30.根据权利要求29所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是单克隆抗
体。
31.根据权利要求29或30所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是人
类IgG1抗体。
32.根据权利要求29、30或31所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子
包含三个重链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO：67、
68和69的氨基酸序列；和三个轻链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含
根据SEQ ID NO：70、71和72的氨基酸序列。
33.根据权利要求32所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子包含包含
SEQ ID NO：79的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：80的氨基酸序列的轻
链可变区。
34.根据权利要求29到33所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子偶联
到细胞毒性剂。
35.根据权利要求34所述的试剂盒，其中所述细胞毒性剂是奥里斯他汀分子。
36.根据权利要求35所述的试剂盒，其中所述奥里斯他汀分子是单甲基奥里斯他
汀E MMAE或单甲基奥里斯他汀F MMAF。
37.根据权利要求34到36所述的试剂盒，其中所述细胞毒性剂经由含有马来酰亚
胺部分的连接体偶联到所述抗体。
38.根据权利要求37所述的试剂盒，其中所述马来酰亚胺连接体选自由以下组成
的群组：马来酰亚胺基己酰基(mc)、马来酰亚胺基己酰基-L-苯丙氨酸-L-赖氨酸-对-氨基
苯甲基氨基甲酸酯和马来酰亚胺基己酰基-L-缬氨酸-L-瓜氨酸-对-氨基苯甲基氨基甲酸
酯(vc)。
39.根据权利要求28所述的试剂盒，其中所述GCC标靶治疗剂是特征在于式(I-4)、
(I-5)或(I-6)中任一者的免疫偶联物：
其中Ab是抗-GCC抗体分子，所述抗-GCC抗体分子包含三个重链互补决定区
(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO：67、68和69的氨基酸序列；
和三个轻链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO：70、71
和72的氨基酸序列，并且其中m是1到8的整数。
40.根据权利要求39所述的试剂盒，其中m是3到5。
41.根据权利要求39所述的试剂盒，其中m是约4。
42.一种治疗患有特征在于一或多个表达GCC的细胞的疾病的患者的方法，其包
含：
a.通过例如根据权利要求18到26中任一权利要求所述的方法检测从所述患者获得
的生物样品中的GCC蛋白质表达；和
b.如果所述生物样品表达GCC，那么将GCC标靶治疗剂、例如本文所述的GCC
标靶治疗剂投与所述患者。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述检测步骤包含以下步骤：
i)使所述生物样品与本文所述的抗-GCC抗体分子、例如根据权利要求1到13中任
一权利要求所述的抗-GCC抗体分子、例如包含以下的抗-GCC抗体分子接触：三个重链
互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO：21、22和23或SEQ
ID NO：33、34和35的氨基酸序列；和三个轻链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，
其分别包含根据SEQ ID NO：27、28和29或SEQ ID NO：39、40和41的氨基酸序列；
和
ii)检测所述抗-GCC抗体分子与GCC蛋白质之间的复合物的形成。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述检测步骤是经由免疫组织化学来执行。
45.根据权利要求43所述的方法，其中所述GCC标靶治疗剂包含抗-GCC抗体分
子。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是单克隆抗体。
47.根据权利要求45或46所述的方法，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是人类
IgG1抗体。
48.根据权利要求45所述的方法，其中所述抗-GCC抗体分子包含三个重链互补决
定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO：67、68和69的氨基酸序
列；和三个轻链互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO：70、

\t71和72的氨基酸序列。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗-GCC抗体分子进一步包含包含根据
SEQ ID NO：79的氨基酸序列的重链可变区和包含根据SEQ ID NO：80的氨基酸序列
的轻链可变区。
50.根据权利要求45所述的方法，其中所述抗-...

【专利技术属性】
技术研发人员：海伦·艾利森·弗兰克，艾丽斯·A·麦克唐纳，特雷莎·L·奥基夫，
申请(专利权)人：米伦纽姆医药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US

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